一种运用电化学发光扫描成像系统的新发病毒痕量检测方法技术方案

本发明专利技术公开一种运用电化学发光扫描成像系统的新发病毒痕量检测方法，步骤包括：构建电化学发光信号放大探针，往病毒核酸提取样品中加入电化学发光信号放大探针，使病毒核酸与电化学发光信号放大探针连接，加入捕捉探针，使病毒核酸与捕捉探针连接；加入链霉亲和素磁珠，充分涡旋混匀后使病毒核酸与链霉亲和素磁珠连接，然后磁分离器分离；用超纯水混匀所得产物，然后置于电化学发光成像系统中检测发光信号。本发明专利技术的优点有：实现将唾液、血液、尿液等复杂液体系统中的病毒转化为荧光信号，ZIKV病毒最低检出浓度是50拷贝数，SARS‑Cov2最低检出浓度是10拷贝数，为检测新发病毒提供了一种简单、快速、灵敏度高的检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种运用电化学发光扫描成像系统的新发病毒痕量检测方法
本专利技术涉及病毒核酸检测
，尤其涉及运用电化学发光扫描成像系统的病毒核酸检测

技术介绍
近年来，新发病毒导致的传染病给人类社会带来了巨大的影响。在美洲爆发的寨卡病毒(ZIKV)导致大量婴儿出生时即患有小头畸形；2019年开始新型冠状病毒(SARS-Cov2)在全球范围内的传播造成了不可估量的损失。然而，由于现有技术检测新发病毒样品的处理步骤复杂且耗时费力等因素，对新发病毒的快速检测以及后续的科学研究造成了巨大的阻碍。因此，开发通用的、高灵敏度、兼容性好且仪器试剂可共用的多功能检测平台，研发运用该检测平台适用多种病毒检测的技术对高致病性新发病毒的监测具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种运用电化学发光扫描成像系统的新发病毒痕量检测方法，以解决现有技术检测新发病毒样品的处理步骤复杂且耗时费力的问题。本专利技术合成了树状三联吡啶钌分子，并以该分子为基础构建信号放大体系，为电化学发光扫描成像系统提供放大的电化学发光信号，最终实现检测痕本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种运用电化学发光扫描成像系统的病毒痕量检测方法，其特征在于：/n包括如下步骤：/n(1)构建电化学发光信号放大探针，往1μL病毒核酸提取样品中加入所述电化学发光信号放大探针1μL，在37℃情况下孵育15分钟，使病毒核酸与电化学发光信号放大探针连接，得到体系1；往体系1中加入捕捉探针1μL，涡旋震荡，并在37℃情况下孵育15分钟，使病毒核酸与捕捉探针连接，得到体系2；往体系2中加入链霉亲和素磁珠过量，充分涡旋混匀后在37℃情况下孵育10分钟，使病毒核酸与链霉亲和素磁珠连接，然后磁分离器分离，用缓冲液冲洗；/n(2)用超纯水混匀步骤(1)所得产物，然后置于电化学发光成像系统中检测发光信号。/...

【技术特征摘要】
1.一种运用电化学发光扫描成像系统的病毒痕量检测方法，其特征在于：
包括如下步骤：
(1)构建电化学发光信号放大探针，往1μL病毒核酸提取样品中加入所述电化学发光信号放大探针1μL，在37℃情况下孵育15分钟，使病毒核酸与电化学发光信号放大探针连接，得到体系1；往体系1中加入捕捉探针1μL，涡旋震荡，并在37℃情况下孵育15分钟，使病毒核酸与捕捉探针连接，得到体系2；往体系2中加入链霉亲和素磁珠过量，充分涡旋混匀后在37℃情况下孵育10分钟，使病毒核酸与链霉亲和素磁珠连接，然后磁分离器分离，用缓冲液冲洗；
(2)用超纯水混匀步骤(1)所得产物，然后置于电化学发光成像系统中检测发光信号。


2.根据权利要求1所述的一种运用电化学发光扫描成像系统的病毒痕量检测方法，其特征在于：
所述电化学发光信号放大探针的构建过程是：
(1)取10μM聚合度为20的树状三联吡啶钌聚合物，加入DNA识别域，并在37℃环境下孵育过夜，完成连接；
(2)取50K道尔顿的超滤管，将步骤(1)所得的初产物移至超滤管，5000转/分钟冷冻离心5分钟，直至超滤管中液体离心至下层；
(3)向步骤(2)中超滤管加入500μL1×PBS缓冲液，5000转/分钟冷冻离心5分钟，直至超滤管中液体离心至下层；重复操作3次，将游离的DNA识别域离心至下层；
(4)用200μL的超纯水溶解上层中的电化学发光信号放大探针，反复冲洗上层管底部，充分溶解探针；
(5)取步骤(4)所得产物置于-20℃，并经过冷冻干燥，得到固体产物，即电化学发光信号放大探针，并储存于-20℃备用。


3.根据权利要求1或2所述的一种运用电化学发光扫描成像系统的新发病毒痕量检测方法，其特征在于：
所述病毒核酸是ZIKV病毒核酸或SARS-Cov2病毒核酸或HBV病毒核酸。


4.根据权利要求3所述的一种运用电化学发光扫描成像系统的新发病毒痕量检测方法，其特征在于：
所述病毒核酸是ZIKV病毒核酸，检测具体过程是：
(1)使用病毒裂解试剂盒把ZIKV病毒裂解后，65℃加热5分钟得到病毒核酸提取物；
(2)取病毒核酸提取样品1μL，加入44.5μL超纯水中，并加入2.5μL20×磷酸盐缓冲液，涡旋震荡；
(3)向步骤(2)所得混合物中加入电化学发光信号放大探针1μL，涡旋震荡，并在37℃情况下孵育15分钟，使电化学发光信号放大探针与目标病毒核酸充分杂交；
(4)向步骤(3)体系中加入1μL捕捉探针，涡旋震荡，并在37℃情况下孵育15分钟，使捕捉探针与核酸充分杂交；
(5)向步骤(4)体系中加入过量的链霉亲和素磁珠，充分涡旋混匀后，在37℃情况下孵育10分钟；
(6)将步骤(5)所得产物用磁分离器分离，并用1×PBS缓冲液清洗，重复三次；
(7)将步骤(6)所得产物用超纯水混匀，并用最终用电化学发光成像系统检测信号。


5.根据权利要求4所述的一种运用电化学发光扫描成像系统的新发病毒痕量检测方法，其特征在于：
所述ZIKV病毒目的核酸序列是：
GUUGGUAUGGAAUGGAGAUAAGGCCCAGGAAAGAACCAGA；
所述电化学发光信号放大探针的DNA识别域5’端是顺丁烯二酰亚胺修饰的，DNA识别域的序列是：
TCTGGTTCTTTCCTGGGCCT；
捕捉探针3’端是生物素修饰的，捕捉探针的序列是：
TATCTCCATTCCATACCAAC。


6.根据权利要求3所述的一种运用电化学发光扫描成像系统的新发病毒痕量检测方法，其特征在于：
所述病毒核酸是SARS-Cov2核酸，检测的...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖玉辉，吴云霞，李志嘉，郑兰，
申请(专利权)人：南方医科大学皮肤病医院广东省皮肤病医院，广东省皮肤性病防治中心，中国麻风防治研究中心，
类型：发明
国别省市：广东;44