一种利用In-Fusion PCR技术进行基因定点突变的方法技术

本发明专利技术提供一种利用In‑Fusion PCR技术进行基因定点突变的方法，属于生物技术领域。本发明专利技术运用In‑Fusion PCR技术加上引物突变对靶基因进行体外定点突变，可用于各种基因位点突变，改变核苷酸序列获得突变基因、研究基因的结构与功能的关系之外，还能够通过改变特定的氨基酸获得突变蛋白质，研究蛋白质的结构与功能，从微观水平上阐明正常状态下基因的调控机理、疾病的病因和机理。

【技术实现步骤摘要】
一种利用In-FusionPCR技术进行基因定点突变的方法
本专利技术属于生物
，涉及一种基因定点突变技术，特别涉及一种采用In-fusion技术结合引物突变快速进行基因定点突变的方法。
技术介绍
定点突变(site-directedmutagenesis)技术可以随心所欲地在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段。该方法比使用化学因素、自然因素导致突变的方法具有突变率高、简单易行、重复性好的特点；除用于改变核苷酸序列获得突变基因、研究基因的结构与功能的关系之外，还能够通过改变特定的氨基酸获得突变蛋白质，研究蛋白质的结构与功能，从微观水平上阐明正常状态下基因的调控机理、疾病的病因和机理。该技术在生物和医学领域中的应用非常广泛。目前常用的定点突变方法有寡核苷酸引物介导的定点突变、PCR介导的定点突变及盒式突变。寡核苷酸引物介导的定点突变的步骤：其原理是用含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物，在聚合酶的作用下启动DNA分子进行复制。主要的过程：①将待突变基因克隆到突变载体上；②制备含突变基因的单链模板；③引物与模板退火5’端本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种进行基因定点突变的方法，其特征在于，利用In-fusion PCR技术结合引物突变实现靶基因的定点突变。/n

【技术特征摘要】
1.一种进行基因定点突变的方法，其特征在于，利用In-fusionPCR技术结合引物突变实现靶基因的定点突变。


2.如权利要求1所述的进行基因定点突变的方法，其特征在于，具体步骤包括设计突变引物，利用所设计引物进行PCR并使用In-Fusion技术连接PCR产物构建突变质粒，最后进行转化与鉴定。


3.如权利要求2所述的进行基因定点突变的方法，其特征在于，所述方法具体步骤为：
(1)设计突变引物：根据靶基因序列设计两对引物，分别是“Infusion引物1+突变引物”，“Infusion引物2”，“Infusion引物3”和“Infusion引物4”；其中“Infusion引物1+突变引物”含有Infusion引物，突变序列和其它与靶基因相同序列，“Infusion引物2”含有Infusion引物和其它与靶基因互补序列，“Infusion引物1”和“Infusion引物2”的Infusion引物序列互补；“Infusion引物3”含有Infusion引物和其它与靶基因相同序列，“Infusion引物4”含有Infusion引物和其它与靶基因互补序列，“Infusion引物3”和“Infusion引物4”的Infusion引物序列互补；
(2)构建突变质粒：...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪宏海，夏勇，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第三医院广州重症孕产妇救治中心，广州柔济医院，
类型：发明
国别省市：广东;44