一种通过原生质体高效富集植物线粒体的方法技术

一种通过原生质体，高效富集植物线粒体的方法，该方法的技术核心在于原生质体的获得和滤膜的过滤，主要针对植物叶肉细胞及其他可以游离原生质体的组织成分，高效分离纯化线粒体，其步骤为：1)植物材料的培养；2)游离原生质体；3)利用渗透压自然胀裂原生质体；4)差速离心，获得粗线粒体；5)利用PES材质针头过滤器过滤粗线粒体的重悬缓冲液，得到纯净的线粒体；6)荧光显微镜检测线粒体纯度。本发明专利技术操作便捷、耗时略长，但效果稳定，可高效地富集到线粒体，对探究植物线粒体功能具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种通过原生质体高效富集植物线粒体的方法
本专利技术属于生物
，特别涉及一种通过原生质体高效富集植物线粒体的方法。
技术介绍
线粒体和叶绿体是细胞活动的能量中心，叶绿体通过光合作用给生物有机体供能，线粒体通过氧化磷酸化将有机物储存的能量转换为细胞生命活动的直接能源ATP。线粒体和叶绿体都具有半自主遗传的特性，与细胞核一起构成了植物的遗传库。在植物有机体中线粒体和叶绿体是相辅相成，密不可分的细胞器组分。然而，为了研究植物线粒体的结构和功能，叶绿体的存在也为线粒体的研究设置了障碍。以往的研究中，为了避免叶绿体等质体的干扰，多选取黄化苗、植物的根、悬浮细胞或愈伤组织为试验材料，尽量减少叶绿体的干扰。利用线粒体和叶绿体密度不同的特征，采用蔗糖或percoll梯度密度离心的方式进一步分离纯化线粒体。然而，这样的提取过程过于繁琐，还需要超高速离心，不利于线粒体的快速获取。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种通过原生质体高效富集植物线粒体的方法，基于原生质体渗透破裂、低温差速离心和针头注射器滤膜技本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过原生质体高效富集植物线粒体的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤1)，培养植物材料，配制游离原生质体裂解缓冲液，游离植物组织的完整原生质体；/n步骤2)，利用渗透压，自然胀裂原生质体；/n步骤3)，利用差速离心，获得粗线粒体；/n步骤4)，利用PES材质针头过滤器过滤粗线粒体的重悬缓冲液，得到纯净的线粒体。/n

【技术特征摘要】
1.一种通过原生质体高效富集植物线粒体的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1)，培养植物材料，配制游离原生质体裂解缓冲液，游离植物组织的完整原生质体；
步骤2)，利用渗透压，自然胀裂原生质体；
步骤3)，利用差速离心，获得粗线粒体；
步骤4)，利用PES材质针头过滤器过滤粗线粒体的重悬缓冲液，得到纯净的线粒体。


2.根据权利要求1所述通过原生质体高效富集植物线粒体的方法，其特征在于，所述步骤1)中，避光条件下，撕植物叶片的下表皮，暴露的叶肉细胞平铺在游离原生质体裂解缓冲液表面，低温离心获得完整的原生质体。


3.根据权利要求1所述通过原生质体高效富集植物线粒体的方法，其特征在于，所述植物材料为烟草，尤其是单标转基因AtDIPS-GFP烟草，取烟草成熟饱满的种子，点在穴盘中，经光照16h，暗8h培养，4周后，将小苗移栽到2000mL的花盆中，按质量比，培养土的成分为营养土：草炭土：蛭石＝1：1：1，23+1℃，4周后，收集其叶片，现摘现用，清洗后，吸水纸吸水，平铺在报纸上约1-2h，待叶片部分失水后，尽快撕掉叶片下表皮，叶肉细胞暴露的一面与游离原生质体缓冲液，充分接触，平铺在液面上，避光40min，缓慢摇晃，将溶液4层纱布过滤后，烧杯中混匀，分装到250mL离心管中，水平转子100g离心，5min，抽除上清，沉淀即为原生质体。


4.根据权利要求1或2或3所述通过原生质体高效富集植物线粒体的方法，其特征在于，所述游离原生质体裂解缓冲液的成分为：600mMD-mannitol、0.5％Potassiumdexransulphate、1％CellulaseR10、0.1％PectlyaseY23，pH＝5.4...

【专利技术属性】
技术研发人员：于婷乔，段光兴，袁英，张泉，苏都莫日根，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11