一种牡蛎促进泌乳作用研究方法技术

本发明专利技术公开了一种牡蛎促进泌乳作用研究方法，包括以下步骤，S1、实验材料，牡蛎、母鼠和公鼠。本实验使用均为SPF级健康SD大鼠，母鼠和公鼠比例为2：1，且母鼠和公鼠均为8周龄未配种大鼠，SD母鼠的体重范围：180g～200g，SD公鼠的体重范围：200g～250g。S2、主要实验试剂，硼酸、无水碳酸钠、无水乙醇、浓硫酸、浓盐酸、硫酸钾、葡萄糖、正丁醇。该牡蛎促进泌乳作用研究方法，建立超负荷哺乳模型，以SD大鼠为实验对象，探究牡蛎粉是否有促进泌乳作用，利用牡蛎粉组和正常组的大鼠的泌乳量比较，说明牡蛎粉可以提高哺乳母鼠的泌乳量，牡蛎粉组和正常组母鼠的脏器指数相比，牡蛎粉组母鼠的脏器指数均高于正常组，符合哺乳母鼠正常健康的生理水平。

【技术实现步骤摘要】
一种牡蛎促进泌乳作用研究方法
本专利技术涉及牡蛎的应用研究
，具体为一种牡蛎促进泌乳作用研究方法。
技术介绍
牡蛎是世界第一大养殖贝类，也是我国第四大养殖贝类之一，牡蛎蛋白质含量丰富，氨基酸营养组成完善，富含不饱和脂肪酸、多种维生素及微量元素，有“海洋牛奶”之称，牡蛎是我国批准的既可以作为食品又可以作为药品的保健食材，经过研究表明，柴胡加龙骨牡蛎汤治疗失眠患者取到很好的治疗效果，桂枝龙骨牡蛎汤可以治疗多种儿科疾病等，随着对牡蛎应用的研究，牡蛎的药用作用种类越来越多。随着生活提高，科技的发展，人们越来越注重保健，其中牡蛎的研究也在逐渐拓展，在现代医学对乳汁的合成和分泌的研究的当下，人们对治疗产后缺乳的影响因素进行分析，至今未有很全面的牡蛎促进泌乳作用的研究方法对牡蛎治疗产后缺乳效果进行研究。针对上述问题，急需通过建立超负荷哺乳大鼠模型，探究牡蛎是否能促进泌乳作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种牡蛎促进泌乳作用研究方法，以解决上述
技术介绍
中提出的在现代医学对乳汁的合成和分泌的研究的当下，人们对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牡蛎促进泌乳作用研究方法，其特征在于：包括以下步骤：/nS1、实验材料/n（1）牡蛎、母鼠和公鼠。/n（2）本实验使用均为SPF级健康SD大鼠，母鼠和公鼠比例为2：1，且母鼠和公鼠均为8周龄未配种大鼠，SD母鼠的体重范围：180g～200g，SD公鼠的体重范围：200g～250g。/nS2、主要实验试剂/n硼酸、无水碳酸钠、无水乙醇、浓硫酸、浓盐酸、硫酸钾、葡萄糖、正丁醇、五水合硫酸铜硫酸钾、三氯乙酸、氯化钡、酒石酸钠、氢氧化钠、氯化钠、二甲苯、苏木精伊红染色剂、水合氯醛、乙酸锌、福林酚、牛血清蛋白。/nS3、牡蛎粉的制取/n（1）将新鲜的牡蛎利用清洗机或清洗池清洗干净，接着将清洗干净...

【技术特征摘要】
1.一种牡蛎促进泌乳作用研究方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、实验材料
（1）牡蛎、母鼠和公鼠。
（2）本实验使用均为SPF级健康SD大鼠，母鼠和公鼠比例为2：1，且母鼠和公鼠均为8周龄未配种大鼠，SD母鼠的体重范围：180g～200g，SD公鼠的体重范围：200g～250g。
S2、主要实验试剂
硼酸、无水碳酸钠、无水乙醇、浓硫酸、浓盐酸、硫酸钾、葡萄糖、正丁醇、五水合硫酸铜硫酸钾、三氯乙酸、氯化钡、酒石酸钠、氢氧化钠、氯化钠、二甲苯、苏木精伊红染色剂、水合氯醛、乙酸锌、福林酚、牛血清蛋白。
S3、牡蛎粉的制取
（1）将新鲜的牡蛎利用清洗机或清洗池清洗干净，接着将清洗干净的牡蛎滤干，制粉。
（2）在20℃的温度下预冻，预冻3h后，便可放入-80℃超低温冰箱中深冻，对经过冷冻干燥的牡蛎粉进行干燥保存。
S4、牡蛎蛋白的制取
（1）牡蛎冻干粉50g溶于1L蒸馏水。
（2）0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至12～13。
（3）4℃下搅拌3小时，在10000r/min、4℃下离心15min，提取上层清液。
（4）0.1mol/L盐酸溶液调节上层清液pH至4.5～5.1，在10000r/min、4℃下离心15min，收集沉淀物。
（5）将沉淀物转入12ku孔纤维透析袋，透析48小时，收集沉淀，并冷冻干燥，进行干燥保存。
S5、牡蛎酶解粉的制取
（1）将新鲜的牡蛎清洗干净，并进行沥干、匀浆，匀浆∶水为1∶3加入蒸馏水，调节pH为7.0，加入动物蛋白水解酶。
（2）将1000U/g牡蛎肉在53℃水浴锅恒温6h，并以500r/min的速度离心20min，提取上清液，旋蒸除水，接着冷冻干燥，进行干燥保存。
S6、超负荷哺乳大鼠模型的建立
（1）调整每一窝母鼠所哺育的仔鼠数量，通过增加或减少仔鼠数量，使得每一窝仔鼠数量相同，母鼠哺乳同样数量的仔鼠，不能满足一窝仔鼠的摄食需要，为超负荷大鼠模型。
（2）平均分为正常组和牡蛎全粉组，正常组的灌胃蒸馏水，1mL/100g，每天一次，连续20天，牡蛎全粉组的同时灌胃0.8mg/mL牡蛎全粉溶液，每天一次，连续20天。
S7、血清采集和保存
实验结束后，所有母鼠麻醉，眼球取血于离心管中，37℃静置20min，置于高速离心机离心，温度4℃，3000r/min离心15min，收集上清液，于-20℃冰箱中冻存待测。
S8、样品检测
（1）取出血清样品解冻，试剂盒从冷藏环境中取出在室温平衡15-30分钟后使用。
（2）操作步骤：
标准品的稀释：
加样：分别设置空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步骤操作相同）、标准孔、待测样品孔，在酶标包被板上标准品准确加样50μL，待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL（样品稀释度为5倍），加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；
温育：使用封板膜封板后置37℃温育30分钟；
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水3倍稀释后备用；
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，拍干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次拍干；
加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外，温育，洗涤；
显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟；
终止：每孔加入终止液50μL，终止反应（此时蓝色立转黄色）；
测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），测定应在加终止液后15分钟以内进行。
（3）数据处理
S9：乳腺组织结构观察
将麻醉后的母鼠仰卧置于解剖手术盘上，沿腹正中线切开胸腹部皮肤，分离胸腹部皮下的乳腺组织，称量并记录乳腺的重量，然后切取距乳腺顶端1cm的乳腺相同部位，放入大约10倍体积的4%中性多聚甲醛中固定24-72h，过两夜。
S10：组织蜡块制作
（1）固定组织修整与水洗
1、先将组织块置于固定液中固定24h～72h，再取出组织块。
2、取出组织块后用手术刀修整形状，置于脱水框中做好标记，自来水流动清洗组织块2小时以上洗去固定液。
（2）组织脱水
将洗去固定液...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦小明，谌素华，章超桦，曹文红，郑惠娜，林海生，高加龙，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：广东;44