巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用制造技术

一种巯基还原组合物，包括三(2‑羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽，用量为0.006mg/cm

【技术实现步骤摘要】
巯基还原组合物及荧光微球层析试纸和应用
本专利技术涉及一种组合物，尤其涉及一种用于荧光检测试剂的组合物，以提高试剂对抗体检测的精密度及准确性。
技术介绍
荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术。该技术以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。对于带有多个抗原决定簇的大分子抗原(蛋白、病毒和致病菌等)，通常采用“三明治”型双抗体夹心免疫层析方法，即待测物在流动相作用下先与荧光标记抗体结合，当到达检测线时再与包被抗体结合形成双抗体夹心的“三明治”型。对于只具有单一抗原表位的小分子抗原(农兽药、违禁药物等)，待测小分子抗原与荧光标记抗体结合后，由于空间位阻作用难以再与检测线上的包被抗体结合。所以，具有单一抗原表位的小分子待测物多采用竞争免疫层析法检测。专利申请CN201910109523.2公开了一种甲功五项的荧光微球联合检测装置及其制备方法，将甲状腺素、三碘甲状腺原氨酸和促甲状腺激素抗体包被于硝酸纤维膜膜上，特异性强，能同时检测标本中T3抗体、T4抗体、TSH抗体、游离T3抗体、游离T4抗体，操作简便，实用性强。检测装置包括硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的两端分别与吸收垫、免疫荧光交联抗体玻璃纤维膜搭接，免疫荧光交联抗体玻璃纤维膜另一端与样品垫搭接；硝酸纤维素膜上设置检测线T和质控线C；检测线分别标记甲状腺素抗体、三碘甲状腺原氨酸抗体、促甲状腺激素抗体，质控线C上喷点羊抗鼠IgG多克隆抗体。专利申请CN201510542660.7公开了一种减少体外检测中生物样本假阳性的封闭液，能减少血清蛋白的非特异性吸附作用，减少血清的基底效应，从而减少体外检测中生物样本假阳性的发生，提高检测的准确度，而且，检测灵敏度高，检测线性宽，稳定性强。该封闭液包括试剂A和试剂B，试剂A为氨基酸溶液，试剂B为3-巯基丙酸溶液。该封闭液用于免疫荧光层析检测系统中的抗体微球的封闭。具体应用过程为：将荧光微球进行预处理，然后与抗体交联得到抗体微球，抗体微球再使用封闭液封闭，最后用缓冲液保存。本专利技术封闭液中两种试剂反应后得到的离子型氨基酸单层分布在免疫荧光层析检测系统中的抗体微球表面。总抗体检测试剂盒可同时检测IgG和IgM，而五聚体形式的IgM容易引起荧光微球聚集交联，进而对荧光信号的采集造成影响，导致检测的精密度和准确性不理想。血清/血浆样本中的IgM抗体，占血清免疫球蛋白总量的5％～10％，血清浓度约为1mg/mL。IgM的五聚体形式由5个单体亚单位通过二硫键和J链连接起来，J链是连接五个亚单位的环链。每个单体分子的重链和轻链通过二硫键连接。IgM五聚体具有10个抗原结合片段(Fragmentofbinding，Fab)，可同时结合10个抗原，并更容易产生交联结构，进而导致荧光微球聚集在层析系统的层析膜上，影响信号采集。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种巯基还原组合物，用于荧光微球层析试纸，以利于提高检测的精密度和准确性。本专利技术的另一个目的在于提供一种巯基还原组合物，用于荧光微球层析试纸，在涉及IgM抗体的荧光层析检测的精密度和准确性。本专利技术的再一个目的在于提供一种巯基还原组合物，将其应用于荧光微球层析试纸的样本结合垫，改善荧光微球层析中微球聚集和层析膜堵塞现象。本专利技术的又一个目的在于提供一种巯基还原组合物在制备用于检测乙肝表面抗体阳性血清试剂盒的应用，以利于提高检测的精密度和准确性。本专利技术的第五一个目的在于提供一种荧光微球层析试纸，其样本结合垫吸附巯基还原组合物，以利于提高检测的精密度和准确性。2-巯基乙醇等还原剂，能够裂解二硫键。IgM五聚体的J链及链间二硫键易裂解，而链内二硫键不易裂解。通过控制反应条件，巯基还原剂类物质可将IgM五聚体解离为单体，从而改善荧光微球层析中微球聚集和层析膜堵塞现象，进而提高荧光层析试剂的精密度及准确性。一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP·HCl)和还原型谷胱甘肽(GSH)，用量为0.006mg/cm2～1.2mg/cm2。另一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽，用量分别为0.006mg/cm2～0.6mg/cm2。另一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐、还原型谷胱甘肽，以及试纸条，试纸条包括样本结合垫，三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽吸附于样本结合垫上用量分别为0.006mg/cm2～0.6mg/cm2。另一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其为样本垫处理液，包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽，浓度为0.01w/w％～2w/w％。另一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其为样本垫处理液，包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐，以及还原型谷胱甘肽，浓度分别为0.01w/w％～1w/w％。另一种用于荧光微球层析试纸的组合物，其为样本垫处理液，包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐，浓度为0.01w/w％～1w/w％，还原型谷胱甘肽，浓度为0.01w/w％～1w/w％，以及试纸条，试纸条包括样本结合垫，用样本垫处理液润湿样本结合垫，使得吸附于样本垫上的三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽的量分别为0.006mg/cm2～0.6mg/cm2。本专利技术提供的组合物，还包括牛血清白蛋白、吐温-20、磷酸缓冲盐溶液和防腐剂Proclin-300等。将本专利技术提供的组合物用于检测乙肝表面抗体阳性血清，经验证，在样本结合垫中添加0.006mg/cm2～1.2mg/cm2的本专利技术的用于荧光微球层析试纸的组合物，可将IgM五聚体解离为单体，从而改善荧光微球层析中微球聚集和层析膜堵塞现象，可降低至10％以下，进而显著提高荧光层析试剂的精密度及准确性。一种荧光层析试纸，包括样本结合垫，三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽吸附于样本垫上，三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽用量分别为0.006mg/cm2～0.6mg/cm2。具体实施方式以下详细描述本专利技术的技术方案。本专利技术实施例仅用以说明本专利技术的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本专利技术进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本专利技术的权利要求范围中。实施例1分别将2-巯基乙醇(2-ME)、二硫苏糖醇(DTT)、TCEP·HCl和GSH按0.006mg/cm2～0.6mg/cm2的用量加入荧光检测试纸的样本垫中，并以荧光检测试纸的样本垫作为空白对照，用于检测低浓度样本，其浓度为20mIU的乙肝表面抗体阳性血清具体检测结果详见表1。表1表中，*表示p＜0.05。从表1可见，2-ME、DTT、TCEP·HCl和GSH等四种还原剂单独加入样本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种巯基还原组合物，其特征在于包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽，用量为0.006mg/cm

【技术特征摘要】
1.一种巯基还原组合物，其特征在于包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽，用量为0.006mg/cm2～1.2mg/cm2。


2.根据权利要求1所述的巯基还原组合物，其特征在于所述的三(2-羧乙基)膦盐酸盐用量为0.006mg/cm2～0.6mg/cm2。


3.根据权利要求1所述的巯基还原组合物，其特征在于还原型谷胱甘肽用量为0.006mg/cm2～0.6mg/cm2。


4.根据权利要求1所述的巯基还原组合物，为样本垫处理液，其特征在于包括三(2-羧乙基)膦盐酸盐和还原型谷胱甘肽，浓度为0.01w/w％～2w/w％。


5.根据权利要求4所述的巯基还原组合物，其特征在于所述的三(2-羧乙基)膦盐酸盐浓度为0.01w/w％～1w/w％。


6.根据权利要求4所述的巯基还原组合物，其特征在于所述的还原型谷胱甘肽的浓度为0.01w/w％～1w/w％。


7.根据权利要求4所述的巯基还原组合物，其特征在于所述的三(2-羧乙基)膦盐酸盐，浓度为0.01w/w％～1w/w％，所述的还原型谷胱甘肽，浓度为0.01w/...

【专利技术属性】
技术研发人员：田洁，朱绍荣，张成林，
申请(专利权)人：上海荣盛生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31