一种新生儿进行性肌营养不良症的筛查试剂盒及其方法技术

本发明专利技术具体公开了一种适用于新生儿进行性肌营养不良症筛查的双抗体夹心免疫分析法体外诊断试剂，特异性的检测肌酸激酶同工酶CK‑MM。本发明专利技术采用滤纸干血片校准品和滤纸干血片样本，不受溶血时红细胞释放出AK的影响，使新生儿进行性肌营养不良症筛查实现普及性，本发明专利技术公布的滤纸干血片校准品制作方法，解决校准品的不稳定性，防止了肌酸激酶同工酶和/或亚型被血浆中的羧基肽酶的水解。本发明专利技术公布的一种特殊的滤纸干血片样本洗脱液，解决样本检测时待测物的稳定性，减少外界因素干扰。本发明专利技术可以早期诊断肌营养不良并采取适宜治疗措施后，可大大延缓病情的进展，提高患者的生活质量，也可避免患者盲目求医而造成的巨大花费。

【技术实现步骤摘要】
一种新生儿进行性肌营养不良症的筛查试剂盒及其方法
本专利技术涉及筛查试剂盒制备
，具体涉及一种新生儿进行性肌营养不良症的筛查试剂盒及其方法。
技术介绍
进行性肌营养不良症是一组遗传性骨骼肌变性疾病，病理上以骨骼肌纤维变性、坏死为主要特点，临床上以缓慢进行性发展的肌肉萎缩、肌无力为主要表现，部分类型还可累及心脏、骨骼系统。传统上分为假性肥大型肌营养不良(pseudohypertrophicmusculardystrophy)、面肩肱型肌营养不良(facioscapulohumeralmusculardystrophy,FSHD)、肢带型肌营养不良(limbgirdlemusculardystrophy,LGMD)、Emery-Dreifuss肌营养不良、眼咽型肌营养不良(oculopharyngealmusculardystrophy,OPMD)、眼型肌营养不良、远端型肌营养不良和先天型肌营养不良(congenitalmusculardystrophy,CMD)。按照遗传方式可分为性连锁隐性遗传型、常染色体显性遗传和常染色体隐性遗传型。以假本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适用于新生儿进行性肌营养不良症筛查的试剂，其特征在于，主要成分包括：1)包被有特异性捕获抗体的固相载体；2)滤纸干血片校准品；3)特异性检测抗体标记物；4)样本洗脱液；5)实验缓冲液；6)清洗液以及7)信号转换液，所述信号转换液：包括以下的一种或几种，如底物液、终止液、增强液、发光底物液、发光剂；/n所述试剂检测的是肌酸激酶同工酶(CK-MM)。/n

【技术特征摘要】
1.一种适用于新生儿进行性肌营养不良症筛查的试剂，其特征在于，主要成分包括：1)包被有特异性捕获抗体的固相载体；2)滤纸干血片校准品；3)特异性检测抗体标记物；4)样本洗脱液；5)实验缓冲液；6)清洗液以及7)信号转换液，所述信号转换液：包括以下的一种或几种，如底物液、终止液、增强液、发光底物液、发光剂；
所述试剂检测的是肌酸激酶同工酶(CK-MM)。


2.权利要求1所述的试剂，其特征在于：选择双抗体夹心二步法进行检测。


3.权利要求2所述的试剂，其特征在于，所述双抗体夹心二步法进行检测方法为：
在捕获抗体固相载体中的相应位置加入校准品或待测样本；孵育；校准品或待测样本中待测物与固相载体上的捕获抗体和检测抗体标记物形成“固相捕获抗体-待测物”复合物；通过洗涤固相载体洗去多余的血液样本其他成分；再加入适量的检测抗体标记物工作液；孵育；固相载体上的“固相捕获抗体-待测物”复合物和检测抗体标记物形成“固相捕获抗体-待测物-检测抗体标记物”复合物；通过洗涤固相载体洗去多余的检测抗体标记物；再通过后续的处理使标记物转化为可测量的信号物质；通过计数器进行检测，分析结果。


4.权利要求1-3任一项所述的试剂，所述捕获抗体包括：针对CK-MM的鼠单克隆抗体6811817(IgG2b)、鼠单克隆抗体123125(IgG1)、鼠单克隆抗体M18073101、鼠单克隆抗体18121502、鼠单克隆抗体M52213、鼠单克隆抗体2111851、兔多克隆抗体CR75和山羊多克隆抗体CG75；经过优选实验，优选配对抗体为针对人骨骼肌CK-MM的特异性鼠单克隆抗体M18073101、鼠单克隆抗体18121502。


5.权利要求1-3任一项所述的试剂，其中试剂的主要成分1)所述包被有特异性捕获抗体的固相载体具有以下特点：
将捕获抗体用常规包被缓冲液(可以使用50mmol/L，pH9.6的碳酸缓冲液、20mmol/L，pH4.5的磷酸盐缓冲液、50mmol/L，pH7.8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液或50mmol/L，pH4.5的柠檬酸盐缓冲液等)稀释至最适浓度，在固相上进行包被，将固相洗涤1次，然后再用封闭液进行封闭，将固相甩干，晾干，真空包装，2～8℃保存备用；
其中捕获抗体是采用特异性针对人骨骼肌肌酸激酶同工酶(CK-MM)特异性单克隆抗体；捕获抗体的浓度均选择在1～7μg/mL间，最适工作浓度为5μg/mL。


6.权利要求1-5任一项所述的试剂，其中，试剂的主要成分2)所述滤纸干血片校准品具有以下特点：
将肝素抗凝血浆采用42～60℃灭活1～3h，期间要每隔15min轻轻摇晃一次，使血浆内的CK总酶活性和/或其他酶类活性失活；灭活后在血浆中加入20ppm的硫柳汞和0.01％的叠氮钠作为防腐剂，两种防腐剂可以起到协同保护作用；为防止添加入的校准品原料CK-MM及其亚型被血浆中的残存的羧基肽酶水解降低，进一步提高校准品的稳定性，在血浆中加入苯甲酰精氨酸甲酯、6-氨基己酸的一种或两种作为抑制剂，抑制剂均为浓度为1～5mmol/L；并为了进一步提高校准品的热稳定性和延长有效期，在血浆中加入0.5％～2％的海藻糖；将红细胞用生理盐水洗涤3～5次，去除CK总酶和其他酶类；然后将灭活的血浆和洗涤过的红细胞恢复成50％-55％的血细胞比容的全血；然后将校准品原料加入到以上全血中，形成一系列梯度浓度的校准品，充分混匀，用S&S903采血滤纸作为载体，用磁力搅拌器不断搅匀，用移液器将校准品点加至滤纸上，每个校准品血斑滴加全血量为50μL；滤纸血片经室温自然阴干后过塑。


7.权利要求1-6任一项所述的试剂，其中，所述主要成分3)所述特异性检测抗体标记物具有以下特点：
特异性检测抗体标记物的检测抗体与捕获抗体的位点不同，能与相应的抗原形成双抗体夹心检测，组织特异性检测抗体是采用针对人骨骼肌CK-MM特异性单克隆抗体；
酶联免疫分析法所采用的标记物为辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶(β-Gal)等中的一种或几种；
化学发光免疫分析法所采用的标记物为吖啶酯、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶等中的一种或几种；
时间分辨荧光免疫分析法所采用的标记物为镧系元素中铕(Eu)、铽(Tb)、钐(Sm)、镝(Dy)的双功能基团结构螯合物的一种或几种。


8.权利要求1-7任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭玉华，冯建明，廖三川，冯淑怡，邢晓敏，江燚，梁天铖，罗海坤，陈梅欣，周晓姗，刘远，
申请(专利权)人：广州市丰华生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44