【技术实现步骤摘要】
一种基于磁微粒化学发光免疫法检测DNASE1L3的方法
本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种基于磁微粒化学发光免疫法检测DNASE1L3的方法。
技术介绍
DNASE1L3即DNA酶1样蛋白3，是DNASE超家族中一个的核酸内切酶，主要是由树突细胞和巨噬细胞等髓性细胞产生而进入血液的一种分泌蛋白，具有DNA水解活性，能够对单链和双链DNA切割，且也能将染色质切割成核小体单位，并切割核小体和脂质体包被的DNA。目前，研究已证实DNASE1L3缺陷可导致人和小鼠的抗DNA反应和自身免疫，并且血液DNASE1L3通过增强片段化并影响末端基序频率而参与循环血浆DNA稳态。DNASE1L3水平减少或缺乏与系统性红斑狼疮(SLE)的发病及临床特征和疾病的活动有关，并且DNASE1L3酶可作为治疗系统性红斑狼疮等自身免疫疾病。此外，有研究发现DNASE1L3还是肝细胞肝癌独立的预后因子。因此，外周血液中DNASE1L3定量测定不仅有利于SLE的临床辅助诊断和疗效评价，还可以评估肝细胞肝癌的预后，是一个重要的生物标志物。目前...
【技术保护点】
1.一种基于磁微粒化学发光免疫法检测DNASE1L3的方法，其特征在于，所述方法包括：/n生物素化抗DNASE1L3抗体制备：/n酶标记的抗DNASE1L3抗体制备：/n将生物素化抗DNASE1L3抗体与待测样品中抗DNASE1L3抗体结合，形成生物素化抗DNASE1L3抗体抗原复合物；加入链霉亲和素包被磁性微粒，反应后在磁力作用下洗涤，除去未结合物；加入酶标记的抗DNASE1L3抗体，反应后在磁力作用下洗涤，除去未结合物，得磁微粒-DNASE1L3抗原抗体复合物；向磁微粒-DNASE1L3抗原抗体复合物中加入缓冲液、发光底物溶液进行反应，在发光仪上检测发光强度，以同样方法...
【技术特征摘要】
1.一种基于磁微粒化学发光免疫法检测DNASE1L3的方法，其特征在于，所述方法包括：
生物素化抗DNASE1L3抗体制备：
酶标记的抗DNASE1L3抗体制备：
将生物素化抗DNASE1L3抗体与待测样品中抗DNASE1L3抗体结合，形成生物素化抗DNASE1L3抗体抗原复合物；加入链霉亲和素包被磁性微粒，反应后在磁力作用下洗涤，除去未结合物；加入酶标记的抗DNASE1L3抗体，反应后在磁力作用下洗涤，除去未结合物，得磁微粒-DNASE1L3抗原抗体复合物；向磁微粒-DNASE1L3抗原抗体复合物中加入缓冲液、发光底物溶液进行反应，在发光仪上检测发光强度，以同样方法检测标准品，以标准品各浓度的发光强度来纵坐标，浓度为横坐标，制作标准曲线，计算出样本中DNASE1L3的浓度。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，生物素化抗DNASE1L3抗体制备方法为：将鼠抗人抗DNASE1L3抗体用缓冲液进行稀释、透析，加入N-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液磁力搅拌1-2h，加入氯化铵溶液，继续搅拌10-20min后进行透析；将透析后的样品过分子筛柱，收集生物素化抗DNASE1L3抗体；生物素化抗DNASE1L3抗体加入含叠氮钠、牛血清白蛋白的PBS溶液液中，4℃，避光保存。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，鼠抗人抗DNASE1L3抗体用硼酸缓冲液稀释至浓度0.5-2mg/mL，并用硼酸缓冲液进行透析；
优选地，所述硼酸缓冲液浓度为0.5-1.0mmol/L，溶液pH值为8.0-8.6。
4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，N-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液浓度为0.5-1.0mg/mL，溶剂为二甲亚砜；
优选地，鼠抗人抗DNASE1L3抗体溶液与N-羟基琥珀酰亚胺生物素溶液按体积比1：0.1-0.5；
优选地，所用氯化铵溶液浓度为0.5-1.0mol/L，氯化铵溶液加入量为鼠抗人抗DNASE1L3抗体溶液体积的8-10‰；
优选地，加入氯化铵溶液后...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭永灿，程渝，杨加贝，奚宇戈，
申请(专利权)人：西南医科大学附属中医医院，
类型：发明
国别省市：四川;51
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