表达抗CD22嵌合抗原受体和PD-L1阻断蛋白的细胞的制备方法、表达载体及应用技术

本发明专利技术公开了表达抗CD22嵌合抗原受体和PD‑L1阻断蛋白的细胞的制备方法、表达载体及应用，涉及医药生物技术领域。表达载体插入有编码抗CD22嵌合抗原受体的第一核酸和编码PD‑L1阻断蛋白的第二核酸。利用CD22靶标和PD‑L1靶标，通过靶向CD22的抗体或其片段，本发明专利技术的T细胞可高效、特异性地靶向表达抗原CD22的肿瘤细胞；PD‑L1阻断蛋白可以与内源表达的PD‑1竞争结合靶细胞上的PD‑L1，从而阻断PD‑1/PD‑L1信号通路，延长了本发明专利技术上述T细胞的作用时间，提高了肿瘤杀伤作用，由此缓解了实体瘤对CAR T细胞疗法的免疫耐受性的问题。

【技术实现步骤摘要】
表达抗CD22嵌合抗原受体和PD-L1阻断蛋白的细胞的制备方法、表达载体及应用
本专利技术涉及医药生物
，具体而言，涉及表达抗CD22嵌合抗原受体和PD-L1阻断蛋白的细胞的制备方法、表达载体及应用。
技术介绍
在肿瘤治疗领域，嵌合抗原受体T细胞疗法越来越受到人们的关注。嵌合抗原受体T细胞(CART细胞)是被基因改造而具有嵌合抗原受体的T细胞，用于免疫治疗。嵌合抗原受体(CAR)是一种人工构建的融合基因编码的跨膜分子，可将T细胞特异性靶向癌细胞表面的抗原，以消除靶癌细胞。CAR由胞外结构域(比如，抗体的单链抗体，scFv)、跨膜结构域和胞内结构域组成。胞外结构域的scFv负责特异性抗原的识别。胞内结构域负责信号的传导。当胞外结构域和抗原特异性结合之后，胞内结构域启动细胞活化所需的信号，从而促进T细胞的增殖、细胞因子的释放等。跨膜结构域将胞外结构域和胞内结构域连接。第一代CAR将scFv与胞内信号传导域，比如CD3ζ连接，以诱导抗原特异性T细胞活化。随后的CAR并入单个(第二代)或多个(第三代)其他共刺激信号，比如C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体插入有编码抗CD22嵌合抗原受体的第一核酸和编码PD-L1阻断蛋白的第二核酸；所述PD-L1阻断蛋白为缺乏PD-1跨膜区和胞内信号区的PD-L1，所述抗CD22嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述PD-L1阻断蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体插入有编码抗CD22嵌合抗原受体的第一核酸和编码PD-L1阻断蛋白的第二核酸；所述PD-L1阻断蛋白为缺乏PD-1跨膜区和胞内信号区的PD-L1，所述抗CD22嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，所述PD-L1阻断蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述第一核酸的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，所述第二核酸的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。


3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为慢病毒表达载体；
优选地，所述慢病毒表达载体为pLVX-IRES-Zsgreen慢病毒表达载体。


4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，在所述表达载体上，所述第一核酸和所述第二核酸均串联有跨膜结构域；
优选地，所述跨膜结构域选自T细胞受体亚基，CD4，CD8或CD28的跨膜结构域；
优选地，所述T细胞受体亚基为α亚基、β亚基或δ亚基。


5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体上还包括：胞外结构域和胞内结构域；
优选地，所述胞外结构域包括铰链；所述胞内结构域包括共刺激信号分子和胞内信号...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵琦，刘婕，
申请(专利权)人：澳门大学，
类型：发明
国别省市：澳门;82