革兰氏阳性菌表达系统在表达腐败梭菌毒素中的应用、腐败梭菌α毒素的制备方法和疫苗技术方案

本发明专利技术提供了一种革兰氏阳性菌表达系统在表达腐败梭菌毒素中的应用、腐败梭菌α毒素的制备方法和疫苗，涉及生物技术领域。采用革兰氏阳性菌表达系统表达腐败梭菌毒素实现了腐败梭菌毒素的胞外分泌表达，离心收集上清，就可以获得表达量高且纯度较好的目的蛋白，降低目的蛋白纯化和内毒素去除工艺生产成本。

【技术实现步骤摘要】
革兰氏阳性菌表达系统在表达腐败梭菌毒素中的应用、腐败梭菌α毒素的制备方法和疫苗
本专利技术涉及生物制品
，尤其是涉及一种革兰氏阳性菌表达系统在表达腐败梭菌毒素中的应用、腐败梭菌α毒素的制备方法和疫苗。
技术介绍
腐败梭菌(Clostridiumseptium)是一种革兰氏阳性厌氧杆菌，可引起动物和人的恶性水肿病、肌肉坏死、气性坏疽及坏死性肠炎等疾病，也是引发羊快疫的病原菌。腐败梭菌可分泌α、β和γ等多种外毒素，其中α毒素是其主要致病性毒力因子和免疫保护性抗原。腐败梭菌α毒素是气溶素家族穿孔毒素的一种，是腐败梭菌的主要致死性毒力因子，具有溶血、致死和坏死的作用。腐败梭菌分泌的α毒素具有良好的免疫原性，由其制备的类毒素可有效抵抗腐败梭菌的感染。目前制备腐败梭菌α毒素疫苗有两种方法。一种是传统菌苗，用腐败梭菌(C55-1株)接种到厌气肉肝汤中厌氧培养24h，提取α毒素，测定毒力后加入甲醛灭活，然后按照一定比例与氢氧化铝佐剂混合制成。传统菌苗中主要活性成分腐败梭菌(C55-1株)采用厌气肉肝汤培养，厌气肉肝汤培养基成分复杂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.革兰氏阳性菌表达系统在表达腐败梭菌毒素中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.革兰氏阳性菌表达系统在表达腐败梭菌毒素中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阳性菌表达系统包括葡萄球菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统或谷氨酸棒状杆菌表达系统。


3.一种腐败梭菌α毒素的制备方法，其特征在于，包括使用革兰氏阳性菌表达系统表达腐败梭菌α毒素。


4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述革兰氏阳性菌表达系统包括葡萄球菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统或谷氨酸棒状杆菌表达系统。


5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，包括将含有编码腐败梭菌α毒素的基因克隆至载体，得到重组载体；然后将重组载体转化至大肠杆菌，筛选后将重组载体阳性克隆经金黄色葡萄球菌RN4220转化，将重组载体转化进入表皮葡萄球菌中，然后经诱导表达得到腐败梭菌α毒素；
优选地，所述载体包括pYL质粒载体，所述pYL质粒载体是将Xyl/tet片段、ori区域和Erm抗性基因插入pRB373质粒的多克隆位点及抗性区域中，得到的重组pYL质粒载体；
优选地，所述诱导表达为使用诱导剂ATC在36～38℃条件下诱导16～24h，所述诱导剂的终浓度为300～700ng/mL；
优选地，所述诱导表达为使用诱导剂ATC在37℃条件下诱导24h，所述诱导剂的终浓度为500ng/mL；
优选地，补料碳源包括葡萄糖和/或甘油；和/或，种子液的接种量为0.1％～5％(v/v)；
优选地，补料碳源为甘油；
优选地，种子液的接种量为1％(v/v)。


6.根据权利要求3-5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述腐败梭菌α毒素为腐败梭菌α毒素突变体；
优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，王钢，张飞，何海，丁占强，周婷婷，韩瑞凯，杜晓杰，李延涛，
申请(专利权)人：天康生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65