一种羰基还原酶及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种羰基还原酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。其编码DNA序列如SEQ ID NO.1所示。上述羰基还原酶可用于以乙酰丙酸酯为底物制备γ‑戊内脂，该羰基还原酶可还原乙酰丙酸酯，并经过pH调节发生酯交换反应合成γ‑戊内脂，转化率达90％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种羰基还原酶及其应用
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种羰基还原酶及其编码基因和应用。
技术介绍
由于羰基还原酶广泛存在于自然界动植物体内，具有易得、性质稳定的特点。大多是通过多重筛选、显色法、基于辅酶衍生物的筛选方法和基于辅酶荧光的筛选方法等进行筛选。因为以上方法成本较高且检测不易，不适应于做高通量筛选，因此不适用于获取耐受乙酰丙酸酯(特别是乙酰丙酸乙酯)的目标羰基还原酶。因此，我们通过提取土壤样品的总DNA并纯化，将纯化后的总DNA经BamHI酶切，连接到克隆载体pUC19上，电击转化大肠杆菌DH5α高效感受态，建立宏基因组文库，通过96孔板法高通量筛选得到阳性克隆子。对阳性克隆子进行测序和BLAST比较并设计引物，从而克隆到目的片段。在反应过程中，过高浓度的产物会使反应向正向移动的速度变得缓慢，导致产物的产率较低。为了减少水相中产物对正向反应的抑制，采用有机相(例如乙酸乙酯)-水两相反应体系，底物缓慢释放到水中与酶反应，而生成的产物则被抽提到有机相，促使反应向内脂合成的方向进行。两相反应可以有效提高还原反应的得率。与单相水本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种羰基还原酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种羰基还原酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


2.权利要求1所述的羰基还原酶的编码基因。


3.权利要求2所述的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


4.权利要求1所述的羰基还原酶在制备γ-戊内脂中的应用。


5.γ-戊内脂的制备方法，其特征在于，使用权利要求1所述的羰基还原酶，将乙酰丙酸酯的酮羰基进行还原反应，并添加10M盐酸溶液进行酯交换反应，从而获得γ-戊内脂；
优选地，在所述还原反应中，使用二级醇作为氢源。


6.根据权利要求5所述的制备方法，其中所述乙酰丙酸酯选自乙酰丙酸甲酯、乙酰丙酸乙酯、乙酰丙酸丁酯或乙酰丙酸异丙酯。


7.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述还原反应的温度为10...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅尧，何鑫，刘孝龙，
申请(专利权)人：中国科学技术大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34