提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球、制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及高分子微球材料技术领域，具体公开了一种提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球的制备方法，包括将含有氯氧基的对4‑氯甲氧基苯乙烯作为原料混合，通入氮气搅拌预乳化后，加入过硫酸钾，升温，继续搅拌反应，得到所述胶乳微球的悬浮液；滴加氯化锂水溶液破乳，减压抽滤，洗涤，离心得到胶乳微球。在聚合原料选择中添加带有氯甲氧基的苯乙烯衍生物能够提高其聚合转化率，降低胶乳微球的水化直径和表明负电荷，从而提高微球的稳定性。本发明专利技术提供的胶乳微球制备的胶乳试剂，在免疫比浊检测时的效果更佳，稳定性更优。

Latex microspheres, preparation method and application for improving the stability of latex immunoturbidimetric method

【技术实现步骤摘要】
提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球、制备方法及应用
本专利技术涉及高分子微球材料
，具体涉及一种提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球、制备方法及应用。
技术介绍
目前，胶乳增强免疫比浊法可广泛应用于特种蛋白、肿瘤标志物等方面的检测，是极具开发前景的新一代实用免疫测定技术。市场上常有的胶乳增强免疫比浊法的体外诊断生化产品主要有CysC、RBP、β2-MG、Lp(a)、hsCRP、ASO、RF等检测试剂盒。胶乳试剂是液体，它的各项性能指标对其稳定性具有较高的要求，这也是胶乳试剂开发的一个重点和难点。胶乳试剂的稳定性主要包含两个方面，一方面是胶乳微球的稳定性，一方面是连接在胶乳微球上的抗体或抗原的稳定性。胶乳溶液它是一个高度分散的多相体系，有巨大的界面能，因而是热力学不稳定体系，但在一定条件下又能相对稳定地存在相当长的时间；连接在胶乳微球上的抗体或抗原的稳定性，主要包含抗体或抗原本身的稳定性和抗体或抗原能否稳定地连接在胶乳微球上。对比文件CN110836965A中公开了一种液态芯片的封闭液及其方法，所述的封闭液包括：磷酸缓冲液、蛋白、氨基酸、表活活性剂和防腐剂，可以减少非特异性结合、提高灵敏度和精密度，但是该文献中封闭剂不完全适用于胶乳免疫比浊法；对比文件CN101046473A中公开了一种改进胶乳结合抗原或抗体稳定性的方法，所述的方法是向试剂中加入封闭剂和稳定性，该方法可以让试剂在长期储存中的试剂吸光度值变化小，但是此方法制备的试剂会随着时间的延长，灵敏度、准确度和精密度的性能逐步降低。>
技术实现思路
在现有技术中均未公开对胶乳微球稳定性的改进技术，而胶乳微球的稳定性对于提高整个胶乳试剂稳定性和胶乳免疫比浊检测稳定性均起到决定性作用。为实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：一种提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球的制备方法，包括如下步骤：S1：将十二烷基苯磺酸钠、氢氧化钠、对4-氯甲氧基苯乙烯、苯乙烯和水混合得到料液A，按重量分数计，所述各成份在原材料中的配比为，苯乙烯:对4-氯甲氧基苯乙烯:十二烷基苯磺酸钠:氢氧化钠:水＝(15～20):(10～15):(10～15):(55～65)；S2：通入氮气搅拌预乳化30min后，加入过硫酸钾，升温60℃，继续通氮气搅拌反应6～8h，得到所述胶乳微球的悬浮液；S3：向所述悬浮液中滴加10％的氯化锂水溶液破乳，破乳后的悬浮液减压抽滤，得到的胶乳微球颗粒用蒸馏水和乙醇交替洗涤，离心后得到最终产品的所述胶乳微球。一种提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球。一种胶乳微球在提高胶乳免疫比浊法稳定性中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果包括：1、在聚合原料选择中添加带有氯甲氧基的苯乙烯衍生物能够提高其聚合转化率，聚合更彻底，微球均一性也得到提高。本专利技术提供的胶乳微球形成了大量的氯甲氧基支链，负电荷增多，能够提高其与抗体蛋白偶联形成的免疫胶乳的电泳速率，从而提高其稳定性；并且，大量的氯甲氧基支链分布也能减少其产生桥絮凝效应的机会，降低胶乳微球的水化直径，从而提高微球的稳定性。2、进一步通过将本专利技术提供的胶乳微球制备胶乳试剂，检测肌红蛋白，结果表明，本专利技术提供的胶乳微球制备的胶乳试剂，在免疫比浊检测时的效果更佳；本专利技术提供的胶乳微球制备的胶乳试剂的稳定性更优。附图说明图1是本专利技术实施例提供的胶乳试剂的免疫比浊检测中空白吸光度稳定性图。图2是本专利技术实施例提供的胶乳试剂的免疫比浊检测中灵敏度稳定性图。图3是本专利技术实施例提供的胶乳试剂的免疫比浊检测中准确度稳定性图。图4是本专利技术实施例提供的胶乳试剂的免疫比浊检测中精密度稳定性图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。主要试剂：苯乙烯(分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司)；对4-氯甲氧基苯乙烯(分析纯，美国ACROS公司)；十二烷基苯磺酸钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)、氢氧化钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)、过硫酸钾(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)、氯化锂(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)。胶乳微球的制备本专利技术提供一种提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球的制备方法，包括如下步骤：S1：将十二烷基苯磺酸钠、氢氧化钠、对4-氯甲氧基苯乙烯、苯乙烯和水混合得到料液A，按重量分数计，所述各成份在原材料中的配比为，苯乙烯:对4-氯甲氧基苯乙烯:十二烷基苯磺酸钠:氢氧化钠:水＝(15～20):(10～15):(10～15):(55～65)；S2：通入氮气搅拌预乳化30min后，加入过硫酸钾，升温60℃，继续通氮气搅拌反应6～8h，得到所述胶乳微球的悬浮液；S3：向所述悬浮液中滴加10％的氯化锂水溶液破乳，破乳后的悬浮液减压抽滤，得到的胶乳微球颗粒用蒸馏水和乙醇交替洗涤，离心后得到最终产品的所述胶乳微球。本专利技术提供的胶乳微球的制备原料中，对4-氯甲氧基苯乙烯聚功能基团氯甲氧基，为胶乳微球自身带来高均一性，降低其聚集成团的可能，为微球粒径控制和提高其制备过程中的转化率；还能为胶乳微球表面带来氯原子、氧原子，使其能够更易于与抗原或抗体的活性基团形成稳定的共价键或氢键，进而提高其应用于免疫比浊检测中的稳定性和特异性灵敏度。具体的实施方式中，S1步骤中，先将十二烷基苯磺酸钠和氢氧化钠溶于水并混合均匀后，再加入苯乙烯和对4-氯甲氧基苯乙烯。具体的实施方式中，所述各成份在原材料中的配比为，苯乙烯:对4-氯甲氧基苯乙烯:十二烷基苯磺酸钠:氢氧化钠:水＝(15～20):(10～15):(10～15):(55～65)，可在此范围中选取，举例如15:10:15:65、18:12:12:65、20:15:10:65、18:10:12:60、18:12:10:60、18:12:10:60、20:10:15:55、20:12:12:55或20:15:10:55。具体的实施方式中，S2步骤中，过硫酸钾加入的质量占所述料液A的体积的百分数为1～5％，可在此范围内任意选取，举例可为1％、1.5％、2％、3％、4％或5％。具体的实施方式中，S3步骤中，10％的氯化锂水溶液加入的体积占所述悬浮液的体积的百分数为10～15％，可在此范围内任意选取，举例可为10％、11％、12％、13％、13.3％、13.6％、13.7％、14％或15％。为对胶乳微球的制备过程进行研究，需考察其制备过程中原料的加入顺序(记为A，其中，苯乙烯和对4-氯甲氧基苯乙烯与其他原料共同加入记为A1，后加入记为A2)，苯乙烯:对4-氯甲氧基苯乙烯:十二烷基苯磺酸钠:氢氧化钠:水的质量配比(记为B)，过硫酸钾加入量(记为C)，10％的氯化锂水溶液加入量(记为D)，具体的各指标考察数值列入表1，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1：将十二烷基苯磺酸钠、氢氧化钠、对4-氯甲氧基苯乙烯、苯乙烯和水混合得到料液A，按重量分数计，所述各成份在原材料中的配比为，苯乙烯:对4-氯甲氧基苯乙烯:十二烷基苯磺酸钠:氢氧化钠:水＝(15～20):(10～15):(10～15):(55～65)；/nS2：通入氮气搅拌预乳化30min后，加入过硫酸钾，升温60℃，继续通氮气搅拌反应6～8h，得到所述胶乳微球的悬浮液；/nS3：向所述悬浮液中滴加10％的氯化锂水溶液破乳，破乳后的悬浮液减压抽滤，得到的胶乳微球颗粒用蒸馏水和乙醇交替洗涤，离心后得到最终产品的所述胶乳微球。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高胶乳免疫比浊法稳定性的胶乳微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：将十二烷基苯磺酸钠、氢氧化钠、对4-氯甲氧基苯乙烯、苯乙烯和水混合得到料液A，按重量分数计，所述各成份在原材料中的配比为，苯乙烯:对4-氯甲氧基苯乙烯:十二烷基苯磺酸钠:氢氧化钠:水＝(15～20):(10～15):(10～15):(55～65)；
S2：通入氮气搅拌预乳化30min后，加入过硫酸钾，升温60℃，继续通氮气搅拌反应6～8h，得到所述胶乳微球的悬浮液；
S3：向所述悬浮液中滴加10％的氯化锂水溶液破乳，破乳后的悬浮液减压抽滤，得到的胶乳微球颗粒用蒸馏水和乙醇交替洗涤，离心后得到最终产品的所述胶乳微球。

【专利技术属性】
技术研发人员：伍卫姣，赵愿安，赵畅，黄爱，陈婷，刘道锦，张雪娇，舒芹，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42