一种胶体金标记方法及其产品技术

本发明专利技术公开了一种胶体金标记方法，包括以下步骤：制备待用胶体金溶液并调节pH值满足：pI+0.4<pH<pI+0.6，获得标准胶体金溶液；向标准胶体金溶液中添加表面活性剂；后添加待标记蛋白或待标记抗体的溶液；再添加封闭剂，得到包含有待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液；将包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液离心，弃去上清液，取沉淀物；将沉淀物经胶体金复溶液复溶后得到金标复合物溶液；筛选金标复合物溶液的最佳稀释倍数；将所述金标复合物溶液按照最佳稀释倍数进行稀释，得到金标复合物稀释液，采用所述金标复合物稀释液制备金垫；本发明专利技术所提供的方法减少了由胶体金粒径大小、pH等因素而对胶体金标记效率产生的不利影响。

【技术实现步骤摘要】
一种胶体金标记方法及其产品
本专利技术属于生物
，具体涉及一种胶体金标记方法及其产品。
技术介绍
胶体金标记技术是指以胶体金作为显色示踪粒子的标记技术。胶体金对待标记蛋白或待标记抗体的吸附主要取决于其pH值。其中，当胶体金的pH值接近待标记蛋白(或待标记抗体)的等电点(pI)或略偏碱性的条件下，胶体金和待标记蛋白容易形成牢固的结合物；当胶体金的pH值低于待标记蛋白的等电点时，则胶体金和待标记蛋白会发生聚集而失去结合能力；当胶体金的pH值远大于待标记蛋白的等电点时，则胶体金和待标记蛋白的结合能力变弱，胶体金和待标记蛋白均呈游离状态，难以形成金标复合物。此外，由于胶体金颗粒粒径的不一致，在标记蛋白的时候，即使将不同粒径的胶体金溶液调整至相同的pH条件下，但是由于各胶体金颗粒的粒径差异太大，则会出现以下情况：一部分胶体金在标记蛋白后可以很稳定；一部分胶体金在标记蛋白后，蛋白构象因为胶体金粒径的影响而产生翻转等变化，使得胶体金颗粒与待标记蛋白相互吸附聚集，导致标记蛋白的胶体金溶液状态很不稳定，则标记蛋白的胶体金溶液快速会逐步变色变暗甚至产生沉淀，最终导致胶体金标记失败。此外，在制备待标记蛋白溶液时，需要添加一些蛋白保护剂来提高待标记蛋白的稳定性及活性。蛋白保护剂常为离子型化合物，其产生的电荷作用会给胶体金溶液的稳定性带来很大程度的负面影响。具体而言，这类蛋白保护剂在胶体金溶液中会破坏胶体金胶粒表面的水化膜、双离子层结构，导致胶体金溶液状态很不稳定。鉴于上述问题，为保证胶体金标记效果，需要不断的优化和摸索标记工艺，以保证最终产品的质量。因此，亟需研制一种胶体金标记方法，以减少由胶体金粒径大小、pH等因素而对胶体金标记效率产生的不利影响，从而提高胶体金标记过程的稳定性，并降低胶体金标记失败的风险。
技术实现思路
鉴于现有技术中的不足，本专利技术提供了一种胶体金标记方法及其产品。本专利技术所提供的胶体金标记方法减少了由胶体金粒径大小、pH等因素而对胶体金标记效率产生的不利影响，此外还提高了胶体金标记过程的稳定性，并降低了胶体金标记失败的风险。本专利技术用于实现上述目的的技术方案如下：在本专利技术的一个方面，提供了一种胶体金标记方法，其包括以下步骤：制备待用胶体金溶液；调节所述待用胶体金溶液的pH值，获得标准胶体金溶液；向所述标准胶体金溶液中添加表面活性剂，搅拌混匀；后添加待标记蛋白或待标记抗体的溶液，搅拌混匀；再添加封闭剂，搅拌混匀；得到包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液；将所述包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液离心，弃去上清液，取沉淀物；将所述沉淀物经胶体金复溶液复溶后得到金标复合物溶液；筛选所述金标复合物溶液的最佳稀释倍数；将所述金标复合物溶液按照所述最佳稀释倍数进行稀释，得到金标复合物稀释液，采用所述金标复合物稀释液制备金垫；其中，所述调节所述待用胶体金溶液的pH值，包括：调节所述待用胶体金溶液的pH值至满足：pI+0.4<pH<pI+0.6；并且其中，所述pI为所述待标记蛋白或待标记抗体的等电点。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，所述筛选所述金标复合物溶液的最佳稀释倍数，包括以下步骤：将所述金标复合物溶液稀释成至少三种浓度，得到不同浓度的金标复合物溶液稀释液；将所述不同浓度的金标复合物溶液稀释液分别制备成金垫，分别用于待测质控品的测试，后根据所述待测质控品的测试结果，确定所述金标复合物溶液的最佳稀释倍数。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，所述待标记蛋白或待标记抗体的溶液可以为：含有所述待标记蛋白或待标记抗体的缓冲溶液；其中所述缓冲溶液可以选自磷酸盐缓冲溶液、Tris-HCL缓冲溶液或者硼酸盐缓冲溶液中的一种或两种以上；所述缓冲溶液的浓度可以为0.005mol/L至0.2mol/L。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，所述将所述金标复合物溶液分别稀释成至少三种浓度，包括：将所述金标复合物溶液分别用胶体金复溶液稀释5倍、6倍和7倍；或者将所述金标复合物溶液分别用胶体金复溶液稀释5倍、6倍、7倍、8倍和9倍。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，所述制备待用胶体金溶液，包括：烧制一定批次的胶体金溶液；分别测定各批次的所述胶体金溶液的特征波长值；将所述各批次中的特征波长值相近的所述胶体金溶液合并，得到所述待用胶体金溶液；其中，所述特征波长值相近是指各所述特征波长值之间的差值在1～10nm范围内。在本专利技术的一些实施方式中，对各批次胶体金溶液进行分组分类，并将各批次中的特征波长值相近的胶体金溶液合并，所述特征波长值相近还可以指特征波长值之间的差值为5nm，或者所述特征波长值相近还可以指特征波长值之间的差值为3nm。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，所述烧制胶体金溶液，可以包括：将加热至沸腾的质量分数为0.01～0.04％的氯金酸水溶液与质量分数为10％的柠檬酸钠溶液混合，继续煮沸，冷却后得到待用胶体金溶液；其中，所述氯金酸与所述柠檬酸钠的质量比为1:1.2。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，采用碳酸钾溶液、碳酸钠溶液或氢氧化钠溶液中的一种或两种以上来调节所述待用胶体金溶液的pH；其中，所述碳酸钾溶液、碳酸钠溶液或氢氧化钠溶液的浓度为0.05～1.0M。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，采用碳酸钾溶液、碳酸钠溶液或氢氧化钠溶液中的一种或两种以上来调节所述待用胶体金溶液的pH；其中，所述碳酸钾溶液、碳酸钠溶液或氢氧化钠溶液的浓度为0.05～0.5M。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，所述表面活性剂(向所述标准胶体金溶液中添加的表面活性剂)选自TritonX-45、TRITONX-100、TRITONX-305、吐温20、吐温60、吐温80、Brij-35、Tetronic1307、ON-870、PEG20000或PVP中的一种或两种以上；按质量分数计，所述标准胶体金溶液包含：所述表面活性剂0.001％～0.1％。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，所述待标记蛋白或待标记抗体的质量与所述标准胶体金溶液的体积的比例为：(1～100)ug:1ml。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，所述封闭剂(向所述标准胶体金溶液中添加的封闭剂)选自BSA、PEG20000、酪蛋白、酪蛋白钠盐、脱脂奶粉、胎牛血清、明胶或蛋白胨中的一种或两种以上；所述封闭剂的质量与所述包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液的体积的比例为：(1～50)mg:1ml。在本专利技术的一些实施方式中，所述胶体金标记方法中，所述金标复合物溶液与所述包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液的体积比为(1～50):50；优选1:10。在本专利技术的另一个方面，提供了本专利技术所述的胶体金标记方法制备得到的检测用试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胶体金标记方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n制备待用胶体金溶液；/n调节所述待用胶体金溶液的pH值，获得标准胶体金溶液；/n向所述标准胶体金溶液中添加表面活性剂，搅拌混匀；后添加待标记蛋白或待标记抗体的溶液，搅拌混匀；再添加封闭剂，搅拌混匀；得到包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液；/n将所述包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液离心，弃去上清液，取沉淀物；将所述沉淀物经胶体金复溶液复溶后得到金标复合物溶液；/n筛选所述金标复合物溶液的最佳稀释倍数；/n将所述金标复合物溶液按照所述最佳稀释倍数进行稀释，得到金标复合物稀释液，采用所述金标复合物稀释液制备金垫；/n其中，所述调节所述待用胶体金溶液的pH值，包括：调节所述待用胶体金溶液的pH值至满足：pI+0.4<pH<pI+0.6；并且其中，所述pI为所述待标记蛋白或待标记抗体的等电点。/n

【技术特征摘要】
1.一种胶体金标记方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
制备待用胶体金溶液；
调节所述待用胶体金溶液的pH值，获得标准胶体金溶液；
向所述标准胶体金溶液中添加表面活性剂，搅拌混匀；后添加待标记蛋白或待标记抗体的溶液，搅拌混匀；再添加封闭剂，搅拌混匀；得到包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液；
将所述包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液离心，弃去上清液，取沉淀物；将所述沉淀物经胶体金复溶液复溶后得到金标复合物溶液；
筛选所述金标复合物溶液的最佳稀释倍数；
将所述金标复合物溶液按照所述最佳稀释倍数进行稀释，得到金标复合物稀释液，采用所述金标复合物稀释液制备金垫；
其中，所述调节所述待用胶体金溶液的pH值，包括：调节所述待用胶体金溶液的pH值至满足：pI+0.4<pH<pI+0.6；并且其中，所述pI为所述待标记蛋白或待标记抗体的等电点。


2.根据权利要求1所述的胶体金标记方法，其特征在于，所述筛选所述金标复合物溶液的最佳稀释倍数，包括以下步骤：
将所述金标复合物溶液稀释成至少三种浓度，得到不同浓度的金标复合物溶液稀释液；
将所述不同浓度的金标复合物溶液稀释液分别制备成金垫，分别用于待测质控品的测试，后根据所述待测质控品的测试结果，确定所述金标复合物溶液的最佳稀释倍数。


3.根据权利要求1或2所述的胶体金标记方法，其特征在于，所述制备待用胶体金溶液，包括：
烧制一定批次的胶体金溶液；
分别测定各批次的所述胶体金溶液的特征波长值；
将所述各批次中的特征波长值相近的所述胶体金溶液合并，得到所述待用胶体金溶液；
其中，所述特征波长值相近是指各所述特征波长值之间的差值在1～10nm范围内。


4.根据权利要求1或2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文叶，杨文，刘红，黄玲，赵愿安，舒芹，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42