表达NTNG1基因的细胞株的构建方法和应用技术

本发明专利技术属于细胞生物技术领域，具体公开了一种表达NTNG1基因的细胞株的构建方法和应用。以肝癌细胞为目标系统，通过NTNG1过表达慢病毒感染，获得稳定过表达NTNG1基因的肝癌细胞。以肝癌细胞为目标系统，通过NTNG1干扰慢病毒感染，获得稳定敲低NTNG1基因的肝癌细胞。通过对本发明专利技术构建的细胞株的运用，研究NTNG1对肝癌增殖、生长、凋亡、侵袭、迁移和小鼠成瘤的影响，为肝癌发生与发展的分子机制和预后判断提供实验基础，为临床应用提供依据。

【技术实现步骤摘要】
表达NTNG1基因的细胞株的构建方法和应用
本专利技术涉及细胞生物
，具体涉及表达NTNG1基因的细胞株的构建方法和应用。
技术介绍
肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC，以下简称肝癌)是全球第六大最普遍的癌症，也是第三大最常见相关死亡原因的癌症。根据2018年的癌症统计数据，全世界每年有841,000新的HCC病例，约55％的HCC患者来自中国。近年来，肝癌也是我国癌症死亡的主要原因之一，其死亡率更高居第2位。由于缺乏有效的临床诊断靶标，且肝癌恶性程度极高，侵袭性强，进展迅速，大部分患者就诊时已达中晚期，即使接受规范的系统治疗，中位OS往往不超过14个月，导致肝癌仍是死亡率最高的消化系统恶性肿瘤。因此，寻找一些准确的生物标志物在肝癌的诊断或预后中具有重要的临床意义。NTNG1位于1号染色体1p13.3区，编码539个氨基酸，由10个外显子组成，长度大约60.5kDa，属于层粘连蛋白相关蛋白Netrin家族的一员。Netrin最早于1990年在秀丽隐杆线虫中发现，Netrins作为一类自分泌蛋白或者膜结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝细胞癌的分子标记物，所述分子标志物为NTNG1基因或NTNG1基因的表达产物。/n

【技术特征摘要】
1.一种肝细胞癌的分子标记物，所述分子标志物为NTNG1基因或NTNG1基因的表达产物。


2.一种稳定过表达NTNG1基因的细胞株，其特征在于，所述细胞株是以肝癌细胞为目标系统，通过序列如SEDIDNO：4所示的NTNG1过表达慢病毒感染，获得稳定过表达NTNG1基因的肝癌细胞。


3.一种稳定过表达NTNG1基因细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)分别用限制性内切酶EcoRI和BamHI酶切序列如SEDIDNO：1所示的慢病毒载体，电泳获得序列如SEDIDNO：2所示的线性化的载体；
(b)从新鲜组织标本中提取组织总RNA，经反转录成cDNA，PCR扩增获得序列如SEDIDNO：3所示的NTNG1基因片段；
(c)将线性化的载体与NTNG1基因片段用DNA连接酶连接获得NTNG1过表达慢病毒载体；
(d)利用NTNG1过表达慢病毒载体包装制备序列如SEDIDNO：4所示的NTNG1过表达慢病毒；NTNG1过表达慢病毒感染肝癌细胞株，利用抗生素进行药物筛选，获得稳定过表达NTNG1基因的细胞株。


4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述慢病毒载体为Plv...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁嵘，林燕，叶甲舟，李永强，刘志辉，黎倩，骆敏，黄宇，
申请(专利权)人：梁嵘，
类型：发明
国别省市：广西;45