一种基于环状RNA的肿瘤标志物、特异性检测引物及分子检测方法和在胃癌诊断中的应用技术

本发明专利技术公开一种基于环状RNA的肿瘤标志物、特异性检测引物及分子检测方法和在胃癌诊断中的应用，环状RNA的肿瘤标志物为circCEACAM5，其核酸全序列如SEQ ID NO:1所示；circCEACAM5正向引物的序列如SEQ ID NO:2所示，circCEACAM5反向引物的序列如SEQ ID NO:3所示；分子检测方法包括RNA提取、cDNA逆转录、qPCR检测。本发明专利技术circCEACAM5是闭合成环的单链RNA分子，其对核糖核酸酶耐受，故不易被核糖核酸酶降解，适用于不同条件下保存的临床标本的检测。由于其环状结构，检测方法特异性好，因此检测结果更加准确。

【技术实现步骤摘要】
一种基于环状RNA的肿瘤标志物、特异性检测引物及分子检测方法和在胃癌诊断中的应用
本专利技术涉及肿瘤分子检测
具体地说是一种基于环状RNA的肿瘤标志物、特异性检测引物及分子检测方法和在胃癌诊断中的应用。
技术介绍
肿瘤标志物是肿瘤发生发展过程中特异性出现的DAN、RNA、蛋白质、代谢物等，其在血液、尿液、穿刺标本中的含量会发生改变。肿瘤标志物可以由肿瘤细胞产生，也可以由肿瘤微环境中的免疫细胞、纤维细胞、内皮细胞、平滑肌细胞等产生。因此，肿瘤标志物可以被广泛地应用于临床的肿瘤检测和诊断。目前，临床上常用的肿瘤标志物的检测方法有放射免疫分析、化学发光免疫分析、酶联免疫吸附试验、免疫传感器、分子生物学方法、液体活检等。其中，RealtimePCR(realtimepolymerasechainreaction，实时荧光定量聚合酶链式反应)作为分子生物学的经典技术，它具有安全、简单、灵敏、特异、高效等优点。因此，该技术已被广泛应用于肿瘤标志物的检测，如RT-PCR(逆转录PCR)被用于口咽癌、结直肠癌、前列腺癌、肺癌等肿本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于环状RNA的肿瘤标志物，其特征在于，环状RNA的肿瘤标志物为circCEACAM5，其核酸全序列如SEQ ID NO:1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于环状RNA的肿瘤标志物，其特征在于，环状RNA的肿瘤标志物为circCEACAM5，其核酸全序列如SEQIDNO:1所示。


2.一种基于环状RNA的肿瘤标志物的特异性检测引物，其特征在于，包括circCEACAM5正向引物和circCEACAM5反向引物，circCEACAM5正向引物的序列如SEQIDNO:2所示，circCEACAM5反向引物的序列如SEQIDNO:3所示。


3.一种基于环状RNA的肿瘤标志物的分子检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)RNA的提取；
(2)cDNA逆转录：在cDNA逆转录过程中加入权利要求2所述的circCEACAM5反向引物；
(3)qPCR检测：在qPCR检测过程中加入权利要求2所述的circCEACAM5正向引物和circCEACAM5反向引物。


4.根据权利要求3所述的基于环状RNA的肿瘤标志物的分子检测方法，其特征在于，在步骤(1)中：
(1-1)取新鲜或冻存的胃癌组织块5mm3置于1.5mL的离心管中，加1mLTRIzon(Cat:15596026,Invitrogen,U.S.A.)，用组织研磨器研磨成混悬液；
(1-2)向离心管中加入200μL的氯仿，盖好盖子，用涡旋仪剧烈震荡15sec，室温放置10min；
(1-3)于4℃下，14000rpm,离心10min，样品会分成三层，转移最上层溶液约500μL至一个新的1.5mL离心管中，操作时避免触动中间层和下层溶液；
(1-4)在得到的上层液中加入等体积的异丙醇500μL，充分混匀，室温放置10min；
(1-5)于4℃下，14000rpm,离心15min，弃上清液；
(1-6)加入1mL质量分数为75％的乙醇水溶液，于4℃下，10000rpm,离心2min，弃上清液，不要吸走沉淀，质量分数为75％的乙醇由DEPC水配制；
(1-7)重复步骤(1-6)一次；
(1-8)室温放置晾干5min；

【专利技术属性】
技术研发人员：彭音，金哲，张小静，朱晓辉，袁媛，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东;44