GRSF1在判断脓毒症患者严重程度及预后方面的应用制造技术

本发明专利技术公开一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为GRSF1。本发明专利技术还公开一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的试剂盒，其特征在于，包括检测GRSF1相对表达量以下器材及试验材料：含EDTA的抗凝管、1.5ml无酶离心管、1.5mL的EP管、Trizol、氯仿、异丙醇、75%乙醇、1.5mL的去酶EP管。本发明专利技术另外还提供GRSF1在判断脓毒症患者严重程度及预后方面的应用，一种判断脓毒症严重程度及预后的生物标志物GRSF1，GRSF1能够在健康人群和患者的外周血中被检测到，在脓毒症患者中呈现低表达，且表达越低提示患者疾病严重程度越高，预后越差。

【技术实现步骤摘要】
GRSF1在判断脓毒症患者严重程度及预后方面的应用
本专利技术属于医学生物技术研究领域，具体涉及一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的生物标志物、一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的试剂盒、GRSF1在判断脓毒症患者严重程度及预后方面的应用。
技术介绍
脓毒症是一种复杂而严重的疾病，表现为宿主对感染的反应失调，造成炎症反应级联失控形成炎症因子风暴，最终导致急性多器官功能障碍直至死亡。脓毒症患者数量约占重症监护病房住院患者总数的10%。多项回顾性临床研究指出脓毒症的死亡率达34%~56%。近年来，脓毒症的定义、诊断和治疗均在实践中不断摸索改进，但其预后仍然很差，远未达到理想水平。目前临床上对于脓毒症的诊治难点集中于病情的评估、预后的判断及相应治疗措施在恰当治疗时机的合理应用，但到目前为止仍缺乏能够预测病情严重程度的生物标记物以及直接有效的干预治疗手段。富含鸟嘌呤的RNA序列结合因子1（GRSF1），它是一种特殊的核糖核酸蛋白(RNP)复合物，并且它与线粒体基质中的长非编码（lnc）RNARMRP的相互作用，能够在线粒体中保留RMRP并增强线粒体氧化磷酸化。GRSF1的缺失还导致了一种关键的衰老相关因子-促炎症细胞因子IL6的产生。在感染性炎症的早期阶段，IL6由单核细胞和巨噬细胞产生，随后刺激Toll样受体，进一步引发炎症反应放大直至失控。因此，GRSF1与炎症因子的分泌密切相关，在生理及疾病中发挥着重要作用。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在问题或不足，本专利技术提供一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的生物标志物、一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的试剂盒、GRSF1在判断脓毒症患者严重程度及预后方面的应用，GRSF1在脓毒症患者外周血中呈现低表达且与APACHEII评分和SOFA评分呈负相关；通过检测脓毒症患者外周血中的GRSF1表达水平，能够早期鉴别脓毒症的严重程度和进行预后判断。为实现上述专利技术目的，本专利技术的实施例提供一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为GRSF1。进一步的，检测脓毒症患者外周血中的生物标志GRSF1表达水平，早期鉴别脓毒症的严重程度和进行预后判断。本专利技术的实施例还提供一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的试剂盒，其特征在于，包括检测GRSF1相对表达量以下器材及试验材料：含EDTA的抗凝管、1.5ml无酶离心管、1.5mL的EP管、Trizol、氯仿、异丙醇、75%乙醇、1.5mL的去酶EP管。进一步的，还包括逆转录试剂盒和实时荧光定量PCR试剂盒的材料。本专利技术的实施例另外还提供GRSF1在判断脓毒症患者严重程度及预后方面的应用，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）使用含EDTA的抗凝管抽取外周静脉血3ml，混匀后立即将全血置于4℃或冰盒中正立放置；（2）离心机设置4℃，1000rpm离心10分钟；（3）使用移液器将上层血清移至1.5ml无酶离心管中，-80℃保存；（4）剩余部分按照每250mL标本加入750mL的Trizol，混匀，转移至1.5mL的EP管中；（5）每1mL匀浆中加入0.2ml的氯仿，加盖好后用振荡仪剧烈摇晃15秒，充分混匀，室温静置2分钟，然后离心：15000×g，10分钟，4℃；离心后分成三层，下面的红色为酚-氯仿相，一个中间层，最上层无色的水相；RNA只存在于水相层中；（6）将上层水相转移到去酶1.5mL的去酶EP管中，加入0.5ml异丙醇，上下颠倒混匀，室温静置10minutes，然后离心12000×g，10minutes，4℃；离心后可以在管的侧壁和底部看到絮状胶样沉淀，这就是RNA沉淀；（7）去上清，加入1ml75%乙醇洗涤RNA沉淀，摇晃后静置5min，离心7500×g，5minutes，4℃；重复3次；（8）去上清，置真空或空气中5-10分钟，干燥RNA沉淀，用无RNase水重悬RNA沉淀，用枪头反复吹打几次；测浓度后-80℃长期保存；（9）按照逆转录试剂盒所提供步骤将RNA逆转录为cDNA，存于-20℃中备用；（10）按照实时荧光定量PCR试剂盒提供步骤进行扩增，获得循环阈值；（11）利用统计学计算GRSF1的相对表达量。本专利技术的上述技术方案的有益效果如下：本专利技术提供一种判断脓毒症严重程度及预后的生物标志物GRSF1，GRSF1是一种RNA结合蛋白，是线粒体RNA颗粒的一个重要组成部分。GRSF1能够在健康人群和患者的外周血中被检测到，在脓毒症患者中呈现低表达，且表达越低提示患者疾病严重程度越高，预后越差。本专利技术的实施例通过检测健康体检者与脓毒症患者中GRSF1的相对表达量，验证了生物标志物GRSF1作为判断脓毒症严重程度及预后的生物标志物的可靠性，并通过GRSF1相对表达量与SOFA评分、APACHEII评分之间的相关性来进行进一步验证。附图说明图1为本专利技术的实施例中实时荧光定量PCR法测定GRSF1在健康体检者与脓毒症患者中的相对表达量情况图。图2为本专利技术的实施例中GRSF1相对表达量与SOFA评分的相关性分析图，r=−0.472，P=0.011。图3为本专利技术的实施例中GRSF1相对表达量与APACHEII评分的相关性分析：r=−0.465，P=0.013。具体实施方式为使本专利技术要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的生物标志物，所述生物标志物为GRSF1；检测脓毒症患者外周血中的生物标志GRSF1表达水平，早期鉴别脓毒症的严重程度和进行预后判断。一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的试剂盒，包括检测GRSF1相对表达量以下器材及试验材料：含EDTA的抗凝管、1.5ml无酶离心管、1.5mL的EP管、Trizol、氯仿、异丙醇、75%乙醇、1.5mL的去酶EP管。在进一步的实施例中，一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的试剂盒还包括逆转录试剂盒和实时荧光定量PCR试剂盒中的所有材料用于逆转录和荧光定量PCR。GRSF1在判断脓毒症患者严重程度及预后方面的应用，具体包括以下步骤：（1）使用含EDTA的抗凝管抽取外周静脉血约3ml，混匀后立即将全血置于4℃或冰盒中正立放置；（2）离心机设置4℃，1000rpm离心10分钟；（3）使用移液器将上层血清移至1.5ml无酶离心管中，-80℃保存。（4）剩余部分按照每250mL标本加入750mL的Trizol（新型总RNA抽提试剂），混匀，转移至1.5mL的EP管中。（5）每1mL匀浆中加入0.2ml的氯仿，加盖好后用振荡仪剧烈摇晃15秒，充分混匀，室温静置2分钟，然后离心：15000×g，10分钟，4℃。离心后分成三层，下面的红色为酚-氯仿相，一个中间层，最上层无色的水相。RNA只存在于水相层中。（6）将上层本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为GRSF1。/n

【技术特征摘要】
1.一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为GRSF1。


2.根据权利要求1所述的一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的生物标志物，其特征在于，检测脓毒症患者外周血中的生物标志GRSF1表达水平，早期鉴别脓毒症的严重程度和进行预后判断。


3.一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的试剂盒，其特征在于，包括检测GRSF1相对表达量以下器材及试验材料：含EDTA的抗凝管、1.5ml无酶离心管、1.5mL的EP管、Trizol、氯仿、异丙醇、75%乙醇、1.5mL的去酶EP管。


4.根据权利要求3所述的一种判断脓毒症患者严重程度及预后情况的试剂盒，其特征在于，还包括逆转录试剂盒和实时荧光定量PCR试剂盒的材料。


5.GRSF1在判断脓毒症患者严重程度及预后方面的应用，其特征在于，具体包括以下步骤：
使用含EDTA的抗凝管抽取外周静脉血3ml，混匀后立即将全血置于4℃或冰盒中正立放置；
（2）离心机设置4℃，1000rpm离心10分钟；
（3）使用移液器将上层血清移至1.5ml无酶离心管中，-80℃保存；
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【专利技术属性】
技术研发人员：祁雷，蒋海燕，吴瑶，董岩松，吴若，梁桂文，毛国敏，黄中伟，黄春霞，袁芳，
申请(专利权)人：南通大学附属医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32