瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相色谱指纹图谱测试方法技术

本发明专利技术公开了一种瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相色谱指纹图谱的测试方法，其步骤为：（１）将瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液制成样品溶液；（２）分别吸取瓜氨酸水溶液和样品溶液注入液相色谱仪，依次用含邻苯二甲醛的溶液和含一氯甲酸芴甲酯的溶液进行柱前衍生化；（３）液相色谱测定。本发明专利技术的测试方法为首次公开的瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相色谱指纹图谱测试方法，且精密度高、稳定性好、重现性好，可作为一种较好的控制产品质量的分析测试方法应用于产品质量测试。采用本发明专利技术的测试方法首次获得了瓜蒌皮和瓜蒌皮注射液的高效液相色谱对照指纹图谱，如图１、图２所示。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种产品质量测试方法，尤其涉及一种瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相色谱指纹图谱的测试方法。
技术介绍
瓜蒌皮为葫芦科植物栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim)或双边栝楼(Trichosanthes rosthomii Harms)的干燥成熟果皮，收载于中国药典2005版一部。其主要含有氨基酸，及少量挥发油等。瓜蒌皮注射液是上海第一生化药业有限公司在国内首创的唯一有批准文号的瓜蒌皮药用制剂，收载于国家标准产品。其是以瓜蒌皮为原料，经水提醇沉，再通过上海树脂厂的“732”型阳离子交换树脂，而制成的灭菌水溶液。现有技术中，尚未有关于瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的高效液相色谱指纹图谱测试方法的文献报道。瓜蒌皮的主要成分为氨基酸，但由于氨基酸本身没有紫外吸收，不能直接进行测定。但是，一级氨基酸与邻苯二甲醛(OPA)、二级氨基酸与9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)衍生化后能产生共轭基团，可在紫外或荧光检测器上产生响应。
技术实现思路
本专利技术的目的是公开一种瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相色谱指纹图谱的测试方法。本专利技术的测试方法包括以下步骤(1)将瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液制成样品溶液。本专利技术中，当测试对象为瓜篓皮时，所述的步骤(1)的制备步骤为将瓜篓皮制成粉，过筛，加水配制成溶液，称重，加热回流，冷却后称重，用水补足减失重量，摇匀，离心，取上清液即得。其中，所述的过筛步骤所用的筛较佳的为二号筛；所述的加水配制步骤采用的比例较佳的为1g瓜篓皮/20ml水；所述的加热回流的时间较佳的为30分钟；所述的离心步骤采用的转速较佳的为5000-10000转/分钟。本专利技术中，当测试对象为瓜篓皮注射液时，所述的步骤(1)的制备步骤为将瓜篓皮注射液用水稀释制得样品溶液。其中，所述的用水稀释步骤采用的比例较佳的为瓜篓皮注射液比水1∶5。(2)分别吸取瓜氨酸水溶液和样品溶液注入液相色谱仪，依次用含邻苯二甲醛的溶液和含一氯甲酸芴甲酯的溶液进行柱前衍生化。本专利技术中，由于瓜氨酸为瓜蒌皮中的主要成分之一，其色谱峰面积在指纹图谱中所占比例较大且较稳定，因此选其作为参照物，并用水作溶剂，测定结果显示该方法可行。当测试对象为瓜篓皮时，步骤(2)所述的瓜氨酸水溶液的浓度较佳的为1mg/ml；当测试对象为瓜篓皮注射液时，步骤(2)所述的瓜氨酸水溶液的浓度较佳的为0.5mg/ml。本专利技术中，所述的步骤(2)中，吸取的瓜氨酸水溶液和样品溶液的体积都较佳的为1μl。本专利技术中，步骤(2)所述的柱前衍生化步骤所采用的进样程序为①吸取硼酸盐缓冲液、含邻苯二甲醛的溶液、样品溶液，在空气中混合。其中，所述的含邻苯二甲醛的溶液中，邻苯二甲醛的浓度较佳的为0.01g/ml。该溶液可由下述方法制得每80mg邻苯二甲醛，取pH10.2的0.4mol/L硼酸盐缓冲液7ml，乙腈1ml，巯基丙酸125μl，混匀即得。其中，所述的硼酸盐缓冲液较佳的为pH10.2的0.4mol/L硼酸盐缓冲液。该溶液可由下述方法制得0.4mol/L硼酸水溶液，用0.4g/ml氢氧化钠水溶液调节pH值至10.2即得。步骤①中，所述的硼酸盐缓冲液所吸取的体积较佳的为5μl，所述的含邻苯二甲醛的溶液所吸取的体积较佳的为1μl，所述的样品溶液所吸取的体积较佳的为1μl。所述的空气中混合的次数较佳的为10次，所述的空气中混合的体积较佳的为7μl。②再吸取含一氯甲酸芴甲酯的溶液，在空气中混合。其中，所述的含一氯甲酸芴甲酯的溶液中，一氯甲酸芴甲酯的浓度较佳的为0.005g/ml。该溶液可由下述方法制得每50mg一氯甲酸芴甲酯，用适量乙腈使其溶解，用水稀释至10ml即得。步骤②中，所述的含一氯甲酸芴甲酯的溶液所吸取的体积较佳的为1μl。所述的空气中混合的次数较佳的为30次，所述的空气中混合的体积较佳的为8μl。③再吸取水，在空气中混合。步骤③中，所述的水所吸取的体积较佳的为32μl。所述的空气中混合的次数较佳的为2次，所述的空气中混合的体积较佳的为20μl，所述的空气中混合的速度较佳的为仪器最大速度。④进样。(3)液相色谱测定。本专利技术中，所述的液相色谱较佳的为高效液相色谱。本专利技术中，高效液相色谱的理论板数按瓜氨酸峰计算，应不低于20000。本专利技术中，所述的高效液相色谱所采用的色谱柱较佳的为以十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)为填充剂的色谱柱，如美国Hypersil公司的ODS产品，即孔径为5μm，直径为4.6mm，长度为20cm的色谱柱。本专利技术中，所述的高效液相色谱所采用的流动相较佳的为流动相A，可由下述方法制得取醋酸钠10.88g，加水4000ml使溶解，加三乙胺0.8ml，四氢呋喃24ml，混匀，用2％冰醋酸溶液调节pH值至7.20，即得。流动相B，可由下述方法制得取醋酸钠10.88g，加水800ml使溶解，用2％冰醋酸溶液调节pH值至7.20，加乙腈1400ml，甲醇1800ml，混匀即得。本专利技术中，所述的高效液相色谱所采用的洗脱程序较佳的如表1所示表1高效液相色谱洗脱程序 本专利技术中，所述的高效液相色谱所采用的检测波长较佳的为338nm，所采用的柱温较佳的为25℃。采用本专利技术的测试方法分别对9批瓜蒌皮样品进行了测试。9批瓜蒌皮样品的高效液相色谱指纹图谱相似度均在0.94以上，且共有峰基本一致。因此，以该9批瓜蒌皮样品经“中药色谱分析和数据管理系统”计算机软件(中国药物生物制品鉴定所开发)模拟生成了瓜蒌皮高效液相色谱对照指纹图谱，如图1所示。采用本专利技术的测试方法分别对9批瓜蒌皮注射液进行了测试。9批瓜蒌皮注射液样品的高效液相色谱指纹图谱相似度均在0.95以上，且共有峰基本一致。因此，以该9批瓜蒌皮注射液样品经“中药色谱分析和数据管理系统”计算机软件(中国药物生物制品鉴定所开发)模拟生成了瓜蒌皮注射液高效液相色谱对照指纹图谱，如图2所示。本专利技术的实例中，采用本专利技术的测试方法测得瓜蒌皮和瓜蒌皮注射液中的氨基酸主要为瓜氨酸、精氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸等。本专利技术的积极进步效果在于本专利技术为首次公开的瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的高效液相色谱指纹图谱测试方法。本方法有较强的专属性，且精密度高、稳定性好、重现性好，可作为一种较好的控制产品质量的分析测试方法应用于产品质量测试。采用本专利技术的测试方法首次获得了瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的高效液相色谱对照指纹图谱，如图1、图2所示。附图说明图1为瓜蒌皮高效液相色谱对照指纹图谱，图中峰S为参照物瓜氨酸的色谱峰。图2为瓜蒌皮注射液高效液相色谱对照指纹图谱，图中峰S为参照物瓜氨酸的色谱峰。图3为瓜篓皮高效液相色谱指纹图谱，图中峰S为参照物瓜氨酸的色谱峰，指纹图谱中1号峰～7号峰分别为丝氨酸、瓜氨酸、丙氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸和亮氨酸。图4为9批瓜篓皮样品高效液相色谱指纹图谱。图5为瓜篓皮注射液高效液相色谱指纹图谱，图中峰S为参照物瓜氨酸的色谱峰，指纹图谱中1号峰～7号峰分别为丝氨酸、瓜氨酸、丙氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸和亮氨酸。图6为9批瓜篓皮注射液样品高效液相色谱指纹图谱。图7为测试方法精密度试验中6次进样的瓜篓皮高效液相色谱指纹图谱。图8为测试方法精密度试验中6次进样的瓜篓皮注射液高效液相色谱指纹图谱。图9为测试方法稳定性试验中连本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相色谱指纹图谱的测试方法，其步骤为：（１）将瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液制成样品溶液；（２）分别吸取瓜氨酸水溶液和样品溶液注入液相色谱仪，依次用含邻苯二甲醛的溶液和含一氯甲酸芴甲酯的溶液进行柱前衍生化；　 　（３）液相色谱测定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陆琛，黄臻辉，
申请(专利权)人：上海第一生化药业有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]