贝类亲本性别鉴定的方法技术

贝类亲本性别鉴定的方法，采用直径为０．６ｍｍ的电钻，根据要鉴定贝的种类，确定贝类亲本的性腺位置，在贝类亲本的壳上深入性腺部位钻孔，用消毒过的微型注射器取出精或卵，在显微镜下采用水滴法，加入少许海水，进行性别鉴定，卵在海水中发散，在显微镜下为圆形或梨形；精子在海水中为烟雾状，显微镜下为蝌蚪状。本发明专利技术具有简单易行，识别率高的特点。针对外观上无法识别的雌雄异体型贝类亲本具有普遍的通用性，且经过鉴定的贝类可以正常繁殖，这为开展贝类的近缘、远缘杂交，家系建立，尤其为群体杂交和大规模生产奠定了良好的基础，对贝类的遗传改良具有重要的指导意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，具体为一种无繁殖损伤的贝类亲本 性别鉴定的方法。
技术介绍
贝类多为雌雄异体，雌雄同体种类也相当普遍。贝类虽分为雌雄异体和雌 雄同体，但这种区分并不是恒定不变的，雌雄异体的种类可以发生性逆转而互 换性别，雌雄同体种类也能因性变而成为雌雄异体。在雌雄异体的种类中，除 少数种类为雌雄异形即两性第二性征比较鲜明，可根据外部性征鉴别雌雄外， 绝大多数的雌雄异体的贝类为雌雄同形即两性第二性征不明显，故很难根据外 部性征识别雌雄。由于对雌雄异体型贝类亲本的性别鉴定困难，使得海产工作 者在开展贝类的近缘、远缘杂交，家系建立，尤其是群体杂交、大规模生产时 遇到了很大的困难。目前，对贝类的性别方面的研究中，张国范等(2003)采用雌雄同体的海 湾扇贝建立了自交系；在雌雄异体型贝类方面，授权公告号为CN1263374C的中 国专利技术专利公开了一种雌雄异体型贝类自交系的建立方法，该专利技术专利的目的 在于在雌雄异体的贝类中寻找雌雄同体的贝类，建立子代纯系，可以加快基因 纯化速度，淘汰致死基因，大大加快雌雄异体型贝类的品种选育速度；而如何 辨别雌雄异体的贝类，也是一个亟待解决的难题。授权公告号为CN100382683C的中国专利公开了一种栉孔扇贝的判性系及制 备方法和应用。根据贝壳颜色来判断性别，建立判性系，该专利技术制备方法简单、 易行，不需要专用的设备，容易在生产中推广。然而，该专利技术的判性系具有品 种单一，识别率低的缺点。
技术实现思路
本专利技术旨在解决以往对雌雄异体型贝类亲本性别鉴定困难的问题，提供一 种，经该方法鉴定好的亲贝，可以正常产卵排精，针 对外观上无法识别的雌雄异体型贝类亲本具有普遍的通用性。本专利技术的技术方案是采用直径为0.6mm的电钻，根据要鉴定贝的种类， 确定贝类亲本的性腺位置，在贝类亲本的壳上钻孔直至深入至性腺部位，用消 毒过的微型注射器取出精或卵，在显微镜下采用水滴法，加入少许海水，进行 性别鉴定，卵在海水中发散，在显微镜下为圆形或梨形；精子在海水中为烟雾 状，显微镜下为蝌钭状。本专利技术的工艺过程包括以下步骤第一步、电钻钻头直径的选择电钻钻头直径的大小，直接决定了贝类的 受损伤程度。钻头直径越小，贝类的受损程度越小。但是由于钻头的坚硬程度 的限制，直径过小的钻头在对贝壳钻孔时，会发生折断、碎裂等现象，故一般 选用钻头的最小直径规格为0.6腿。贝类的精子很小，卵径大多集中40-90Mm， 这样可以取出成熟的精或卵。第二步、贝类性腺部位的确定大多数的双壳贝类，其性腺在内脏团中， 而每种贝类的性腺所在部位不同，需先确定好性腺的位置，然后采用电钻小心 谨慎进行钻孔。第三步、微型注射器的处理对微型注射器的要采取严格的消毒，尤其是 针头部位，切忌给贝类带来外来的病原菌，使贝类不能够正常产卵排精。在所 述消毒过程中采用青霉素来消毒效果最佳。第四步、显微镜下性别鉴定将取好的样品放置在昆虫培养皿中，采用水 滴法，加入少许海水，进行性别区分。若果是卵，在海水中发散，在显微镜下 为圆形或梨形；若果是精子，在海水中为烟雾状观察，显微镜下为蝌钭状；如 果是精卵同时存在，显微镜下为雌雄同体型；若果是存在寄生虫的亲本，显微 镜下可以看见多种寄生虫。本专利技术的有益效果是针对外观上无法识别的雌雄异体型贝类亲本具有普 遍的通用性，识别率在98%以上，且经该方法鉴定好的亲贝可以正常繁殖，产 卵排精率在95%以上，这为开展贝类的近缘、远缘杂交，家系建立，尤其是群 体杂交，大规模生产奠定了良好的基础。这对贝类的遗传育种具有重要的指导 意义。具体实施例方式下面以菲律宾蛤仔、宽壳全海笋、青蛤、四角蛤蜊、中国蛤蜊、薄片镜蛤的亲本性别鉴定作为实施例进一步说明本专利技术，但不构成对本专利技术的限制 实施例1第一步、电钻钻头直径的选择于2001-2003年，开始选用电钻对菲律宾 蛤仔莆田群体和大连群体亲本进行性别鉴定。选用的直径为0.6mm的钻头，菲 律宾蛤仔的卵径为64-72Mm，这样可以取出成熟精或卵。第二步、贝类性腺部位的确定菲律宾蛤仔的性腺在内脏团中，先解剖若 干个成熟的亲贝确定性腺部位，然后采用电钻小心谨慎进行钻孔。第三步、微型注射器的处理采用青霉素对微型注射器的进行严格的消毒， 尤其是针头部位，切忌给贝类带来外来的病原菌，使贝类不能够正常产卵排精。第四步、显微镜下性别鉴定将取好的样品放置在昆虫培养皿中，采用水 滴法，加入少许海水，进行观察。卵在海水中发散，在显微镜下为圆形或梨形； 精子在海水中为烟雾状，显微镜下为蝌蚪状；染病个体在显微镜下有许多生虫。经过该方法鉴定的菲律宾蛤仔，性别识别率高达98%以上，且鉴定好的亲本， 可以正常繁殖，亲本产卵排精率在95%以上。 实施例2第一步、电钻钻头直径的选择于2006年，开始选用电钻对大连庄河的宽 壳全海笋亲本进行性别鉴定。选用直径为0.6ram的钻头，宽壳全海笋的卵径为 40-42Mm，这样可以取出成熟的精或卵。第二步、贝类性腺部位的确定宽壳全海箅的性腺在内脏团中，先解剖若 干个成熟的亲贝确定性腺部位，然后采用电钻小心谨慎进行钻孔。第三步、微型注射器的处理采用青霉素对微型注射器的进行严格的消毒， 尤其是针头部位，切忌给贝类带来外来的病原菌，使贝类不能够正常产卵排精。第四步、显微镜下性别鉴定将取好的样品放置在昆虫培养皿中，采用水 滴法，加入少许海水，进行观察。卵在海水中发散，在显微镜下为梨形；精子 在海水中为烟雾状，显微镜下为蝌蚪状。经过该方法鉴定的宽壳全海笋，性别识别率高达100%，且鉴定好的亲本， 可以正常繁殖，亲本产卵排精率为100%。 实施例3第一步、电钻钻头直径的选择于2007年，开始选用电钻对大连庄河的青蛤亲本进行性别鉴定。选用直径为0.6mm的钻头，青蛤的卵径为90陶左右，这 样可以取出成熟的精或卵。第二步、贝类性腺部位的确定青蛤的性腺在内脏团中，先解剖若干个成 熟的亲贝确定性腺部位，然后采用电钻小心谨慎进行钻孔。第三步、微型注射器的处理采用青霉素对微型注射器的进行严格的消毒， 尤其是针头部位，切忌给贝类带来外来的病原菌，使贝类不能够正常产卵排精。第四步、显微镜下性别鉴定将取好的样品放置在昆虫培养皿中，采用水 滴法，加入少许海水，进行观察。卵在海水中发散，在显微镜下为圆形或梨形； 精子在海水中为烟雾状，显微镜下为蝌蚪状。经过该方法鉴定的青蛤，性别识别率高达100%，且鉴定好的亲本，可以正 常繁殖，亲本产卵排精率为95%。 实施例4第一步、电钻钻头直径的选择于2007年，开始选用电钻对大连庄河的四 角蛤蜊亲本进行性别鉴定。选用直径为0.6mm的钻头，四角蛤蜊的卵径为50Mm 左右，这样可以取出成熟的精或卵。第二步、贝类性腺部位的确定四角蛤蜊的性腺在内脏团中，先解剖若干 个成熟的亲贝确定性腺部位，然后采用电钻小心谨慎进行钻孔。第三歩、微型注射器的处理采用青霉素对微型注射器的进行严格的消毒， 尤其是针头部位，切忌给贝类带来外来的病原菌，使贝类不能够正常产卵排精。第四步、显微镜下性别鉴定将取好的样品放置在昆虫培养皿中，采用水 滴法，加入少许海水，进行观察。卵在海水中发散，在显微镜下为圆形或梨形； 精子在海水中为烟雾状，显微镜下为蝌蚪状。经过该方法鉴定的四角蛤蜊，性别识别率高达9讽，且鉴定好的亲本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种贝类亲本性别鉴定的方法，包括以下步骤：采用直径为０．６ｍｍ的电钻，根据要鉴定贝的种类，确定贝类亲本的性腺位置，在贝类亲本的壳上钻孔直至深入至性腺部位，将微型注射器消毒，用消毒过的微型注射器取出精或卵，在显微镜下采用水滴法，加入少许海水，进行性别鉴定；卵在海水中发散，在显微镜下为圆形或梨形；精子在海水中为烟雾状，显微镜下为蝌蚪状。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：闫喜武，杨凤，张国范，张跃环，霍忠明，赵越，
申请(专利权)人：大连水产学院，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]