γ-谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种γ一谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ检测试剂盒，其特征是：有盒体，盒体中装有电泳胶板及电泳缓冲液剂容器，还装有底物及底物液容器和呈色液容器、示踪剂容器、对照剂容器及醋酸纤维膜。其有益效果为：大大简化了检测操作过程，并能保证检测结果有良好的质控。运用本实用新型专利技术进行测定，方法简便、技术要求低、重复性好，因此在临床有广泛的应用前景。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及医学技术，是一种医用检测中使用的试剂盒，具体地说，是一种用来检测和诊断肝癌的γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒。
技术介绍
γ一谷氨酰转肽酶同工酶II(GGT-II)是一个重要的肝癌标志物，对于AFP≤400μg/L的肝癌的诊断有重要临床价值，现已被定为我国肝癌临床诊断的重要指标之一。然而，目前检测GGT II的方法繁琐，技术要求高，迄今为止国内仅有很少几家大医院能开展此项检测。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种检测操作过程简化，检测结果有良好的质控，方法简便、技术要求低、重复性好的γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒。本技术的技术解决方案是一种γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒，其特征是有盒体，盒体中装有电泳胶板及电泳缓冲液剂容器，还装有底物及底物液容器和呈色液容器、示踪剂容器、对照剂容器及醋酸纤维膜。本技术中所述的电泳胶板上有上样孔。电泳胶板凝胶按聚丙烯酰胺浓度自上而下分为四层。电泳缓冲液剂容器包括阴极缓冲液粉剂袋和阳极缓冲液粉剂袋。阴极缓冲液粉剂袋为袋装Tris 1.37g、硼酸2.7g粉。阳极缓冲液粉剂袋为袋装Tris 2.27g粉。底物及底物液容器包括底物9.6mg的γ-L-谷氨酰对硝基苯胺盐酸容器两支；底物液0.1mmol/L Tris-双甘肽溶液容器。醋酸纤维膜的尺寸为10×10cm。本技术的有益效果为大大简化了检测操作过程，并能保证检测结果有良好的质控。运用本技术进行测定，方法简便、技术要求低、重复性好，因此在临床有广泛的应用前景。附图说明附图为本技术的一种γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒。以下结合附图和实施例对本技术作进一步说明具体实施方式 附图描述了本技术的一个实施例，在该例中，有盒体1，盒体1中装有电泳胶板2及电泳缓冲液剂容器3、4，还装有底物及底物液容器5、6和呈色液容器7、示踪剂容器8、对照剂容器9及醋酸纤维膜10。所述的电泳胶板2上有上样孔11。电泳胶板2的凝胶按聚丙烯酰胺浓度自上而下分为四层。电泳缓冲液剂容器包括阴极缓冲液粉剂袋3和阳极缓冲液粉剂袋4。阴极缓冲液粉剂袋3为袋装Tris 1.37g、硼酸2.7g粉。阳极缓冲液粉剂袋4为袋装Tris 2.27g粉。底物及底物液容器包括底物59.6mg的γ-L-谷氨酰对硝基苯胺盐酸容器两支；底物液60.1mmol/L Tris-双甘肽溶液容器。醋酸纤维膜10的尺寸为10×10cm。本技术所成功建立的GGT II电泳检测试剂盒，省略了常规电泳必须进行的制胶、电泳缓冲液、基质缓冲液、基质反应液和呈色液的配制。不但大大简化了操作过程，同时由于试剂盒制备过程的标准化而保证检测结果有良好的质控。运用该检测试剂盒进行测定，方法简便、技术要求低、重复性好。试剂盒组成一、电泳胶板主要由30.8％的聚丙烯酰胺、0.57mol/L的Tris-HCl分离胶缓冲液、0.41mol/L的Tris-HCl浓缩胶缓冲液及0.14％过硫酸铵配制。凝胶分为四层，聚丙烯酰胺浓度自上而下分别为4.6％，7.7％，11.6％和15.4％。二、电泳缓冲液粉剂1、阴极缓冲液粉剂袋装Tris 1.37g、硼酸2.7g粉(临用前以蒸馏水溶解至300ml)。2、阳极缓冲液粉剂袋装Tris 2.27g粉(临用前以蒸馏水溶解，并加1N HCL 15ml，最后加水至300ml)。三、底物1、底物9.6mg的γ-L-谷氨酰对硝基苯胺盐酸容器(两支)；2、底物液B0.1mmol/L Tris-双甘肽溶液(含N-萘乙烯二胺盐酸盐)。四、呈色液10％三氯醋酸100ml，甘油2500ml，NaNO21g，加水配至1000ml。五、示踪剂40％的蔗糖溴酚兰溶液。六、对照剂阳性对照。七、醋酸纤维膜大小为10×10cm。检测方法1、将电泳胶板插入电泳槽，短的玻璃面相对，压紧胶板，分别加入稀释好的阴、阳极电泳缓冲液。2、以微量加样器分别取示踪剂5微升及待测血清20微升，混匀，加入电泳胶板的上样孔内。同时做阳性、弱阳性、及阴性对照，取示踪剂5微升分别与20微升阳性、弱阳性、及阴性对照剂混匀上样。3、加好样后，接上电极，以恒压60V电泳50分钟后，改恒压100V电泳4小时，结束电泳。4、从电泳槽中取出电泳胶板，短玻璃面向上平放于操作台面，以小镊子从右下角轻轻撬起短玻璃板，取去短玻璃板，将长玻璃板连同凝胶一起放入直径15cm的玻璃培养皿中。5.将底物用0.2ml 1N HCL溶解后倒入另一直径16cm的玻璃培养皿，再加底物液2ml，混匀后，以此液打湿一张醋酸纤维膜。6、将以底物液打湿的醋酸纤维膜敷于凝胶上，注意两者间不能留有气泡，将直径16cm的玻璃培养皿盖于15cm的玻璃培养皿上，37℃卵育1小时。7、取一干净培养皿，加入呈色液10ml，取出醋酸纤维膜浸于其中，必须完全浸人，1分钟后取出醋酸纤维膜，观察膜上呈色结果。权利要求1.一种γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒，其特征是有盒体，盒体中装有电泳胶板及电泳缓冲液剂容器，还装有底物及底物液容器和呈色液容器、示踪剂容器、对照剂容器及醋酸纤维膜。2.根据权利要求1所述的γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒，其特征是电泳胶板上有上样孔。3.根据权利要求1或2所述的γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒，其特征是电泳胶板凝胶按聚丙烯酰胺浓度自上而下分为四层。4.根据权利要求1或2所述的γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒，其特征是电泳缓冲液剂容器包括阴极缓冲液粉剂袋和阳极缓冲液粉剂袋。5.根据权利要求4所述的γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒，其特征是阴极缓冲液粉剂袋为袋装Tris 1.37g、硼酸2.7g粉。6.根据权利要求4所述的γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒，其特征是阳极缓冲液粉剂袋为袋装Tris 2.27g粉。7.根据权利要求1或2所述的γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒，其特征是底物及底物液容器包括底物9.6mg的γ-L-谷氨酰对硝基苯胺盐酸容器两支；底物液0.1mmol/L Tris-双甘肽溶液容器。8.根据权利要求1或2所述的γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒，其特征是醋酸纤维膜的尺寸为10×10cm。专利摘要本技术公开了一种γ一谷氨酰转肽酶同工酶II检测试剂盒，其特征是有盒体，盒体中装有电泳胶板及电泳缓冲液剂容器，还装有底物及底物液容器和呈色液容器、示踪剂容器、对照剂容器及醋酸纤维膜。其有益效果为大大简化了检测操作过程，并能保证检测结果有良好的质控。运用本技术进行测定，方法简便、技术要求低、重复性好，因此在临床有广泛的应用前景。文档编号G01N33/68GK2758765SQ200420078660公开日2006年2月15日 申请日期2004年8月10日 优先权日2004年8月10日专利技术者钱坤艳, 倪润洲, 肖明兵 申请人:钱坤艳, 倪润洲, 肖明兵本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种γ一谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ检测试剂盒，其特征是：有盒体，盒体中装有电泳胶板及电泳缓冲液剂容器，还装有底物及底物液容器和呈色液容器、示踪剂容器、对照剂容器及醋酸纤维膜。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：钱坤艳，倪润洲，肖明兵，
申请(专利权)人：钱坤艳，倪润洲，肖明兵，
类型：实用新型
国别省市：32[中国|江苏]