一种人参游离小孢子诱导培养方法技术

本发明专利技术提供了一种人参游离小孢子诱导培养方法，包括下列步骤：（1）花蕾的选择、预处理和灭菌：在人参初花期，采集单核靠边期的花蕾，将花蕾置于4℃低温预处理1~2d后灭菌；（2）小孢子分离与纯化；（3）热激预处理：将小孢子用诱导培养基重新悬浮，分装，将培养皿置于32℃黑暗条件下培养3d；（4）诱导培养：将培养皿转移至25℃黑暗条件下静置培养，当肉眼可见胚状体时，转移至摇床继续培养。本发明专利技术还提供了一种人参游离小孢子诱导培养基，该培养基中通过添加一些特定成分对于人参小孢子的胚胎发生有显著的促进作用。本发明专利技术首次对人参游离小孢子的诱导方法进行探讨，通过诱导培养获得了人参小孢子胚状体，为建立人参游离小孢子培养体系奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
一种人参游离小孢子诱导培养方法
本专利技术涉及一种人参游离小孢子诱导培养方法，属于药用植物生物

技术介绍
人参（PanaxginsengC.A.Mey）又名黄参、地精、神草等，为五加科人参属植物，其根和地上植株均可入药。人参产于中国、韩国和日本等地，味甘，性温，喜阴凉，具有大补元气、调补五脏，祛除邪气，明目益智、复脉固脱等功效，是“百草之王”，也被称之为“东北三宝”之一。人参含有多种人参皂苷、氨基酸、多肽、多糖人参酶等成分，具有大补元气，补脾益肺，滋补安神，增强记忆力等功效。现代研究发现，人参具有降低氧化应激反应、减缓抑郁、防治老年痴呆、改善动脉粥样硬化、提高成骨细胞存活率、抑制肿瘤细胞生长等方面的药理学作用。随着人们生活水平的提高，人参不仅作为药材使用，在药膳，饮品，保健，化妆品等多个领域都有广泛的应用。人参是我国名贵中药材，在我国具有悠久的栽培历史。在长期的生产实践中，人们积累了丰富的栽培经验，但在育种工作中，因缺乏行之有效的技术手段，至今仍无法打破传统育种的屏障，极大阻碍了人参育种工作的进程。人参属植物虽然类型较多，但变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人参游离小孢子诱导培养方法，其特征在于：包括下列步骤：/n（1）花蕾的选择、预处理和灭菌：在人参初花期，采集单核靠边期的花蕾，并在显微镜下进一步确定小孢子发育时期；将花蕾保湿并置于4℃冰箱中静置1~2d后灭菌；/n（2）小孢子分离与纯化：将灭菌后的花蕾用吸水纸沥干水分后放入研钵，加入少量B

【技术特征摘要】
1.一种人参游离小孢子诱导培养方法，其特征在于：包括下列步骤：
（1）花蕾的选择、预处理和灭菌：在人参初花期，采集单核靠边期的花蕾，并在显微镜下进一步确定小孢子发育时期；将花蕾保湿并置于4℃冰箱中静置1~2d后灭菌；
（2）小孢子分离与纯化：将灭菌后的花蕾用吸水纸沥干水分后放入研钵，加入少量B5-13提取液，用研磨棒轻轻挤压，使小孢子游离到提取液中，经400目尼龙网过滤至10ml离心管，800r/min离心3min，弃上清，沉淀物再加入少量B5-13提取液，摇匀，800r/min离心3min，重复两次；弃上清液，所得沉淀物即为纯净小孢子；
（3）热激预处理：将纯化后的小孢子用诱导培养基重新悬浮并调整密度，分装入直径60mm的无菌培养皿内，每皿2.5~3.5ml，Parafilm膜封口；将培养皿置于32℃黑暗条件下培养3d；
（4）诱导培养：将热激后的培养皿转移至25℃黑暗条件下静置培养，当肉眼可见胚状体时，转移至摇床继续培养。


2.根据权利要求1所述的一种人参游离小孢子诱导培养方法，其特征在于：所述步骤（1）中单核靠边期花蕾对应的长度为1.1mm-1.5mm，直径2.1mm-2.8mm，花药颜色为绿色或黄绿色。


3.根据权利要求1所述的一种人参游离小孢子诱导培养方法，其特征在于：所述步骤（1）中灭菌的方法为：将人参花蕾转移入超净工作台无菌烧杯中，倒入70%酒精进行表面消毒，浸泡1min后倒掉酒精，再加入0.1%氯化汞溶液浸泡消毒10min，然后用无菌水冲洗3次。


4.根据权利要求1所述的一种人参游离小孢子诱导培养方法，其特征在于：所述步骤（3）中小孢子密度调整为1.0×105~2.0×105个/ml。


5.根据权利要求1所述的一种人参游离小孢子诱导培养方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁江，
申请(专利权)人：梁江，
类型：发明
国别省市：吉林;22