一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒及检测方法，技术方案为：一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒及检测方法，通过引物优化筛选，采用3对通用引物联合检测，利用物种的熔解温度Tm作为特征值建立标准库，可以快速、简便地检测肉及肉制品中黄牛、水牛、牦牛、山羊、绵羊、兔、马、驴、猪、狗、猫、鼠、狐、貂、貉15种动物源性成分。本发明专利技术简便快速，无需琼脂糖电泳避免了交叉污染，不需要针对每个物种设计相应的特异性引物；借鉴统计学上PCA、LDA的分析方法使得检测结果更加可视化；与传统的多种PCR技术相比，克服了引物之间的竞争问题，大大提高了检测效率，降低了反应成本。

【技术实现步骤摘要】
一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于肉及肉制品安全检测领域，具体涉及一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
随着社会经济的快速发展，受暴利驱使的食品掺假犯罪活动日益增多。近年来，由于欧洲“马肉事件”，沃尔玛“驴肉掺假”等食品欺诈问题层出不穷，引起了人们对肉制品安全的高度重视。目前我国市场上肉制品掺假按掺假形式主要分为三类，第一类是商家将一些低价肉（猪、鸡、鸭肉）掺杂到高价肉（牛羊肉）当中，经过一些加工处理手段让人难以从感官上分辨出来；第二类是用一些不可食用的肉物种（狐狸肉、貂肉等）进行掺假；第三类是用一些来源不明的物种（鼠肉、猫肉等）进行冒充，这类现象常常出现在流动摊贩，也是行为最恶劣的一种。因此随着掺假物种的种类增多，一种高通量鉴别检测方法对于维护消费者合法权益、保障食品安全以及促进肉类行业的健康发展至关重要。随着分子生物学的发展，目前针对肉制品中动物源性成分检测方法主要形成了以蛋白检测和DNA分析两个不同的检测方向。由于核酸的稳定性和种间多态性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒，其特征在于：/n包括5对通用性引物、PCR反应混合液、饱和荧光染料、双蒸水、动物源性成分的基因组DNA及哺乳动物鉴别标准图谱；/n所述的通用性引物具体序列为：/n97bp对应的引物序列为：/n上游引物：5'- CAGACATCTGGTTCTTTCTTCAGGGC -3'；/n下游引物：5'-GGGCTGATTAGTCATTAGTCCAT -3'；/n100bp对应的引物序列为：/n上游引物：5'-AGGATCCATTGGAGGGCAAGT-3'；/n下游引物：5'-TCCAACTACGAGCTTTTTAACTGCA-3'；/n140bp对...

【技术特征摘要】
1.一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒，其特征在于：
包括5对通用性引物、PCR反应混合液、饱和荧光染料、双蒸水、动物源性成分的基因组DNA及哺乳动物鉴别标准图谱；
所述的通用性引物具体序列为：
97bp对应的引物序列为：
上游引物：5'-CAGACATCTGGTTCTTTCTTCAGGGC-3'；
下游引物：5'-GGGCTGATTAGTCATTAGTCCAT-3'；
100bp对应的引物序列为：
上游引物：5'-AGGATCCATTGGAGGGCAAGT-3'；
下游引物：5'-TCCAACTACGAGCTTTTTAACTGCA-3'；
140bp对应的引物序列为：
上游引物：5'-TCCCAGTACGAAAGGACAAGA-3'；
下游引物：5'-CAATTACCGGGCTCTGCCA-3'；
180bp对应的引物序列为：
上游引物：5'-AGCCTGAGAAACGGCTACC-3'；
下游引物：5'-TGCTGGCACCAGACTTGCC-3'；
230bp对应的引物序列为：
上游引物：5'-ACAAGACGAGAAGACCC-3'；
下游引物：5'-GATTGCGCTGTTATCCC-3'。


2.根据权利要求1所述的一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解检测试剂盒，其特征在于：所述动物源性成分的基因组DNA为黄牛、水牛、牦牛、山羊、绵羊、兔、马、驴、猪、狗、猫、鼠、狐、貂、貉。


3.一种15种动物源性成分的PCR高分辨熔解的检测方法，其特征在于：
具体包括以下步骤：
1）参考黄牛、水牛、牦牛、山羊、绵羊、兔、马、驴、猪、狗、猫、鼠、狐、貂、貉15种哺乳动物的基因序列，设计筛选5对通用引物，所述的通用性引物具体序列为：
97bp对应的引物序列为：
上游引物：5'-CAGACATCTGGTTCTTTCTTCAGGGC-3'；
下游引物：5'-GGGCTGATTAGTCATTAGTCCAT-3'；
100bp对应的引物序列为：
上游引物：5'-AGGATCCATTGGAGGGCAAGT-3'；
下游引物：5'-TCCAACTACGAGCTTTTTAACTGCA-3'；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐秦峰，闵红卫，曹云刚，李敏康，蔡露阳，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61