一种通过检测RNA降解程度判断法医学中血痕形成时间的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过检测RNA降解程度判断法医学中血痕形成时间的方法。本发明专利技术选择18S rRNA为基础，分别以44bp的短片段，149bp的中片段以及305bp长片段为靶序列设计引物。运用短中长这三种引物，进行实时荧光定量PCR(qPCR)检测。对梯度稀释的标准品进行qPCR反应，构建标准曲线。通过qPCR扩增检测得到Ct值，代入标准曲线可以对起始模版拷贝数进行定量。随着时间的增加，长片段目的序列扩增成功的概率最低，中片段次之，短片段相对稳定扩增成功概率较高。通过计算长片段与短片段起始拷贝数的比值以及中片段与短片段起始拷贝数的比值，判断人血痕样本中RNA的完整度。通过分析RNA完整度与时间的线性关系，从而为研究血痕存留时间、死亡时间以及损伤时间等提供技术手段。

【技术实现步骤摘要】
一种通过检测RNA降解程度判断法医学中血痕形成时间的方法
本专利技术涉及一种用于检测人血痕样本中RNA降解程度的特异性引物组合及利用其检测RNA降解程度从而推断血痕形成时间的方法，属于法医学、法庭科学以及分子生物学检测

技术介绍
血痕形成时间一直是法医学领域重要的研究课题之一。在一些暴力犯罪案件的案发现场，经常可以看到血痕作为生物物证出现。通过科学解读犯罪现场出现的血痕，研究案件现场血痕的分布、形状等情况，可以罪犯行动轨迹以及动作行为，判断案件性质。血液离开人体后，就会发生降解，离开机体的时间越长，核酸等物质降解的越严重。通过检测人血痕中RNA降解程度可以为推断血痕形成时间、死亡时间以及损伤时间等问题作出贡献。在法医学领域，研究RNA降解时序性的方法通常有两种：第一种为对某一种RNA的靶序列拷贝数进行绝对定量；第二种方式采用相对定量的方式对目的基因和内参基因拷贝数的比值进行分析，通过两种RNA拷贝数的比值推断降解程度。但是，这两种方式都有各自的弊端。由于个体之间的差异性，即使是研究相同的基因，其在不同人血液中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于法医学领域检测RNA降解程度的特异性引物组合，其特征在于，所述的引物组合由一对短引物、一对中引物以及一对长引物组成，其中，所述的一对短引物的核苷酸的序列如SEQ IDNO.1以及SEQ ID NO.2所示；所述的一对中引物的核苷酸的序列如SEQ ID NO.3以及SEQ IDNO.4所示；所述的一对长引物的核苷酸的序列如SEQ ID NO.5以及SEQ ID NO.6所示。/n

【技术特征摘要】
1.用于法医学领域检测RNA降解程度的特异性引物组合，其特征在于，所述的引物组合由一对短引物、一对中引物以及一对长引物组成，其中，所述的一对短引物的核苷酸的序列如SEQIDNO.1以及SEQIDNO.2所示；所述的一对中引物的核苷酸的序列如SEQIDNO.3以及SEQIDNO.4所示；所述的一对长引物的核苷酸的序列如SEQIDNO.5以及SEQIDNO.6所示。


2.权利要求1所述的特异性引物组合在检测人血痕中RNA降解程度、判断法医学中血痕形成时间中的应用。


3.一种通过检测RNA降解程度判断法医学中血痕形成时间的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)从人血痕样本中提取RNA；
(b)RNA反转录得到人血痕样本cDNA；
(c)以人DNA为模板，使用权利要求1中所述的一对短引物、一对中引物以及一对长引物分别进行PCR扩增，得到的产物分别连接到同一载体，构建标准品质粒用于实时荧光定量PCR扩增，以标准品质粒Ct值为纵坐标，起始拷贝数的对数为横坐标，制作对应的标准曲线；
(d)以反转录得到的人血痕样本cDNA为模板，使用权利要求1中所述的一对短引物、一对中引物以及一对长引物分别进行实时荧光定量PCR扩增，分别得到各自的Ct值，根据标准曲线计算扩增产物的起始拷贝数，进而得到RNA完整度：
RNA完整度＝中片段起始拷贝数/短片段起始拷贝数；以及
RNA完整度＝长片段起始拷贝数/短片段起始拷贝数；
(e)判定
根据RNA完整度判定人血痕中RNA的降解程度，即长片段起始拷贝数/短片段起始拷贝数的值与中片段起始拷贝数/短片段起始拷贝数的值越小，则表示RNA完整度越差，RNA降解程度越严重...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵东，刘锦媛，
申请(专利权)人：中国政法大学，
类型：发明
国别省市：北京;11