猴耳环多肽的制备方法和猴耳环多肽脂质体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种猴耳环多肽的制备方法，包括以下步骤：S1、取猴耳环，灭菌后移至发酵罐；S2、往发酵罐中加入酵母菌粉、乳酸菌粉和适量水后，密封发酵；S3、将纤维素酶、果胶酶分别加入4～5倍猴耳环重量的水中，真空抽取酶液至发酵罐中，使发酵罐中的混合液在40～50℃保温18～36h；S4、往发酵罐中加入酸液调节混合液的pH为3～5，过滤得到滤液；S5、将滤液进行浓缩、干燥，得到猴耳环多肽干粉。通过酶解法破坏猴耳环的细胞壁，避免细胞壁吸附猴耳环多肽和多酚从而影响得率，利用表面活性剂吐温80，解决了脂质体难成膜且容易溶散的问题，且得到的猴耳环多肽脂质体包封率高。

【技术实现步骤摘要】
猴耳环多肽的制备方法和猴耳环多肽脂质体的制备方法
本专利技术涉及中药制药领域，尤其涉及一种猴耳环多肽的制备方法和猴耳环多肽脂质体的制备方法。
技术介绍
耳环，学名名围涎树，民间又叫婆劈树、鸡心树、三不正、尿桶公、洗头树、落地金钱等，是多年生乔本植物，1984年7月由华南植物研究所分类室鉴别原植物为含羞草科，后由国际卫生组织将其归到豆科、猴耳环属，学名为Pithecellobiumclypearia(属多年生乔木围廷树)。猴耳环性味苦涩寒，功效清热解毒、收湿敛疮，是治疗多种热毒症候独特的南方药材。目前对猴耳环的提取多为有机物提取法，例如申请号为2013103140324的中国专利技术专利，公开猴耳环提取物的制备方法，通过用水或乙醇或乙醇水溶液进行提取得到浸膏，然而这种制备方法猴耳环多肽的得率低。另外就是定向合成或者通过特定的蛋白水解，定向合成与蛋白水解需要特定药学中间体以及特定的蛋白质，对原料要求极高。因此，亟需一种得率高、对原料要求低的猴耳环多肽的制备方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术旨在提供一种猴耳环多肽的制备方法。一种猴耳环多肽的制备方法，包括以下步骤：S1、取猴耳环，灭菌后移至发酵罐；S2、往发酵罐中加入酵母菌粉、乳酸菌粉和适量水后，密封发酵72～108h；酵母菌粉重量为猴耳环重量的0.1％～1％，乳酸菌粉重量为猴耳环重量的0.1％～0.5％；S3、将纤维素酶、果胶酶分别加入4～5倍猴耳环重量的水中，真空抽取酶液至发酵罐中，使发酵罐中的混合液在40～50℃保温18～36h；S4、往发酵罐中加入酸液调节混合液的pH为3～5，过滤得到滤液；S5、将滤液进行浓缩、干燥，得到猴耳环多肽干粉。在本专利技术的其中一种具体实施方式中，步骤S5中先将滤液浓缩至密度为1.15～1.35g/cm3，再喷雾干燥至干粉。将滤液浓缩至对应的密度，能保证步骤S5的喷雾干燥顺畅进行，避免喷头堵塞。在本专利技术的其中一种具体实施方式中，步骤S3中纤维素酶和果胶酶的加入量均为猴耳环重量的0.01％～0.02％。在本专利技术的其中一种具体实施方式中，步骤S4中的酸液为酒石酸或柠檬酸。采用酒石酸或柠檬酸调节pH除可以调节pH外，残留的酒石酸或柠檬酸可以不用除去直接制药。在本专利技术的其中一种具体实施方式中，步骤S4调节pH之前，先使发酵罐中的混合液冷却至室温。避免过滤的过程中由于温度的降低导致猴耳环多肽的析出。在本专利技术的其中一种具体实施方式中，步骤S2中酵母菌粉和乳酸菌粉预先溶解于水中。将酵母菌粉和乳酸菌粉预先溶解于水中，有助于酵母菌粉和乳酸菌粉的分散，保证发酵罐中发酵程度的一致性。基于本专利技术的猴耳环多肽制备方法，本专利技术进一步提出一种猴耳环多肽脂质体的制备方法，在步骤S1～S5的基础上，还包括以下步骤：S6、将猴耳环多肽干粉粉碎至500～800目，得到猴耳环多肽细粉，将猴耳环多肽细粉加入含有吐温80的丙二醇中溶解，吐温80的重量为猴耳环多肽细粉重量的0.01％～0.08％；S7、用乙醚溶解大豆磷脂和液态胆固醇；大豆磷脂的重量为猴耳环多肽细粉重量的1％～5％；液态胆固醇的重量为猴耳环多肽细粉重量的1％～5％；S8、将步骤S6的丙二醇溶液与乙醚溶液混合均匀，加入羟丙甲基纤维素后混合均匀，喷雾干燥后得到猴耳环多肽脂质体；羟丙甲基纤维素的重量为为猴耳环多肽细粉重量的0.1％～1％。在本专利技术的其中一种具体实施方式中，步骤S8中将丙二醇溶液和乙醚溶液搅拌混合均匀，至无乙醚味，再加入羟丙甲基纤维素。保证乙醚无大量残留，防止由于乙醚与羟丙甲基纤维素不互溶而影响猴耳环多肽脂质体的成型。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：通过酶解法破坏猴耳环的细胞壁，避免细胞壁吸附猴耳环多肽和多酚从而影响得率，且在过滤之前调节pH，提高猴耳环多肽在发酵液中的溶解度，避免过多的猴耳环多肽随着猴耳环残渣被滤去。利用表面活性剂吐温80，解决了脂质体难成膜且容易溶散的问题，且得到的猴耳环多肽脂质体包封率高。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的技术方案作进一步的说明。实施例1一种猴耳环多肽的制备方法，包括以下步骤：S1、取猴耳环，灭菌后移至发酵罐；S2、往发酵罐中加入酵母菌粉、乳酸菌粉和适量水后，酵母菌粉、乳酸菌粉提前溶解在水中，密封发酵72h；酵母菌粉重量为猴耳环重量的0.3％，乳酸菌粉重量为猴耳环重量的0.1％；S3、将纤维素酶、果胶酶分别加入5倍猴耳环重量的水中，真空抽取酶液至发酵罐中，使发酵罐中的混合液在40℃保温18h，纤维素酶和果胶酶的加入量均为猴耳环重量的0.012％，冷却至室温；S4、往发酵罐中加入酒石酸调节混合液的pH为5，过滤得到滤液；S5、将滤液进行浓缩、干燥，得到猴耳环多肽干粉。步骤S5中先将滤液浓缩至密度为1.15g/cm3，再喷雾干燥至干粉。基于本实施例的猴耳环多肽制备方法，进一步提出一种猴耳环多肽脂质体的制备方法，在步骤S1～S5的基础上，还包括以下步骤：S6、将猴耳环多肽干粉粉碎至500目，得到猴耳环多肽细粉，将猴耳环多肽细粉加入含有吐温80的丙二醇中溶解，吐温80的重量为猴耳环多肽细粉重量的0.02％；S7、用乙醚溶解大豆磷脂和液态胆固醇；大豆磷脂的重量为猴耳环多肽细粉重量的2％；液态胆固醇的重量为猴耳环多肽细粉重量的2％；S8、将步骤S6的丙二醇溶液与乙醚溶液混合均匀，至无乙醚味，加入羟丙甲基纤维素后混合均匀，喷雾干燥后得到猴耳环多肽脂质体；羟丙甲基纤维素的重量为为猴耳环多肽细粉重量的0.5％。本实施例得到的猴耳环多肽脂质体呈多孔状均一的囊材，囊材可塑性高。实施例2一种猴耳环多肽的制备方法，包括以下步骤：S1、取猴耳环，灭菌后移至发酵罐；S2、往发酵罐中加入酵母菌粉、乳酸菌粉和适量水后，酵母菌粉、乳酸菌粉提前溶解在水中，密封发酵108h；酵母菌粉重量为猴耳环重量的0.1％，乳酸菌粉重量为猴耳环重量的0.1％；S3、将纤维素酶、果胶酶分别加入4倍猴耳环重量的水中，真空抽取酶液至发酵罐中，使发酵罐中的混合液在50℃保温36h，纤维素酶和果胶酶的加入量均为猴耳环重量的0.012％，冷却至室温；S4、往发酵罐中加入酒石酸调节混合液的pH为3，过滤得到滤液；S5、将滤液进行浓缩、干燥，得到猴耳环多肽干粉。步骤S5中先将滤液浓缩至密度为1.35g/cm3，再喷雾干燥至干粉。基于本实施例的猴耳环多肽制备方法，进一步提出一种猴耳环多肽脂质体的制备方法，在步骤S1～S5的基础上，还包括以下步骤：S6、将猴耳环多肽干粉粉碎至800目，得到猴耳环多肽细粉，将猴耳环多肽细粉加入含有吐温80的丙二醇中溶解，吐温80的重量为猴耳环多肽细粉重量的0.05％；S7、用乙醚溶解大豆磷脂和液态胆固醇；大豆磷脂的重量为猴耳环多肽细粉重量的2％；液态胆固醇的重本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猴耳环多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、取猴耳环，灭菌后移至发酵罐；/nS2、往所述发酵罐中加入酵母菌粉、乳酸菌粉和适量水后，密封发酵72～108h；所述酵母菌粉重量为所述猴耳环重量的0.1％～1.0％，所述乳酸菌粉重量为所述猴耳环重量的0.1％～0.5％；/nS3、将纤维素酶、果胶酶分别加入4～5倍所述猴耳环重量的水中，真空抽取酶液至所述发酵罐中，使所述发酵罐中的混合液在40～50℃保温18～36h；/nS4、往所述发酵罐中加入酸液调节混合液的pH为3～5，过滤得到滤液；/nS5、将滤液进行浓缩、干燥，得到猴耳环多肽干粉。/n

【技术特征摘要】
1.一种猴耳环多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取猴耳环，灭菌后移至发酵罐；
S2、往所述发酵罐中加入酵母菌粉、乳酸菌粉和适量水后，密封发酵72～108h；所述酵母菌粉重量为所述猴耳环重量的0.1％～1.0％，所述乳酸菌粉重量为所述猴耳环重量的0.1％～0.5％；
S3、将纤维素酶、果胶酶分别加入4～5倍所述猴耳环重量的水中，真空抽取酶液至所述发酵罐中，使所述发酵罐中的混合液在40～50℃保温18～36h；
S4、往所述发酵罐中加入酸液调节混合液的pH为3～5，过滤得到滤液；
S5、将滤液进行浓缩、干燥，得到猴耳环多肽干粉。


2.根据权利要求1所述猴耳环多肽的制备方法，其特征在于，步骤S5中先将滤液浓缩至密度为1.15～1.35g/cm3，再喷雾干燥至干粉。


3.根据权利要求1所述猴耳环多肽的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述纤维素酶和果胶酶的加入量均为所述猴耳环重量的0.01％～0.02％。


4.根据权利要求1所述的猴耳环多肽的制备方法，其特征在于，步骤S4中的所述酸液为酒石酸或柠檬酸。


5.根据权利要求1所述猴耳...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈东明，孙葵英，龙孝军，
申请(专利权)人：广东态合堂实业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44