一种dapB基因改造的重组菌株及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种核苷酸序列以及包括该多核苷酸序列的重组菌株，是对谷氨酸棒杆菌中的dapB基因的启动子区域序列进行点突变形成，突变后的启动子区域基因序列如SEQ ID NO:2所示。该重组菌株与未突变的菌株相比，提高了L‑赖氨酸产量，且菌株稳定性好，作为L‑赖氨酸生产菌株能够进一步降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种dapB基因改造的重组菌株及其构建方法与应用
本专利技术属于基因工程和微生物
，具体涉及一种dapB基因启动子的改进，以及由此获得的改造的重组菌株、其构建方法与在L-赖氨酸生产上的应用。
技术介绍
L-赖氨酸是人体和动物所不能合成的八种必需氨基酸中最重要的一种。目前，赖氨酸是目前全球使用量最大的氨基酸类饲料添加剂，约90％的L-赖氨酸产品用于饲料添加剂，约5％用作食品添加剂，其余5％用作医药中间体。如豆粕中添加适量的L-赖氨酸可以大大提高蛋白质的利用率，促进禽畜生长。由于国内饲料工业惊人的发展速度，L-赖氨酸的市场需求与日俱增。但由于发酵产酸水平较低，生产规模较小，致使生产成本较高，难于同进口产品竞争。因此，很有必要选育L-赖氨酸高产菌，使我国的赖氨酸工业具有国际竞争力。最早，生产L-赖氨酸的方法是蛋白质水解法，后来发展的化学合成法使用剧毒原料，存在严重的环保问题，酶法因酶活性不稳定、规模小成本高等被慢慢淘汰，直到1960年日本采用微生物直接发酵生产赖氨酸获得成功，才真正推动了赖氨酸的规模生产。直接发酵法是目前广泛采用的赖氨酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种启动子核苷酸序列，其包括SEQ ID NO:1所示的启动子区域第-49位、第-51位、第-54～-58位的碱基发生突变形成的核苷酸序列；/n优选，SEQ ID NO:1所示的启动子区域的第-49位核苷酸胞嘧啶(C)突变为腺嘌呤(A)、第-51位的核苷酸鸟嘌呤(G)突变为胸腺嘧啶(T)、第-54～-58位的核苷酸CTGCA突变为GGTGT。/n

【技术特征摘要】
1.一种启动子核苷酸序列，其包括SEQIDNO:1所示的启动子区域第-49位、第-51位、第-54～-58位的碱基发生突变形成的核苷酸序列；
优选，SEQIDNO:1所示的启动子区域的第-49位核苷酸胞嘧啶(C)突变为腺嘌呤(A)、第-51位的核苷酸鸟嘌呤(G)突变为胸腺嘧啶(T)、第-54～-58位的核苷酸CTGCA突变为GGTGT。


2.如权利要求1所述的启动子核苷酸序列，其特征在于，所述启动子核苷酸序列如下所述：
(a)SEQIDNO:2所示的核苷酸序列；或者是，
(b)与SEQIDNO:2所示的核苷酸序列具有90％以上，优选的具有95％以上、或98％以上同一性的核苷酸序列，且其保留(a)所述启动子的增强活性，并且第-49位核苷酸保持为腺嘌呤(A)、第-51位的核苷酸保持为胸腺嘧啶(T)、第-54～-58位的核苷酸保持为GGTGT。


3.一种启动子的表达盒，其特征在于，所述表达盒包含权利要求1-2任一项所述的启动子核苷酸序列，和可操纵地连接在所述启动子后的编码序列；
优选，所述编码序列为dapB基因的编码序列。


4.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求1-2任一项所述的启动子核苷酸序列；
优选，所述启动子核苷酸序列与pK18mobsacB质粒相连接来构建所述重组载体。


5.一种重组菌株，其特征在于，包含权利要求1-2任一项所述的启动子核苷酸序列，或包含权利要求3所述的表达盒，或包含权利要求4所述的重组载体；
优选，所述重组菌株的宿主菌株是YP97158。


6.权利要求5所述重组菌株的构建方法，包括如下步骤：
(1)改造如SEQIDNO:1所示的启动子区域，使其第-49位、第-51位和第-54～-58位碱基发生突变，得到包含突变的启动子区域的核苷酸序列；
(2)将所述突变的启动子区域核苷酸序列与质粒连接，构建重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏爱英，孟刚，贾慧萍，高晓航，马风勇，周晓群，
申请(专利权)人：黑龙江伊品生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23