【技术实现步骤摘要】
改良的Csy4序列、改良方法及应用
本专利技术涉及改良的Csy4序列、改良方法及其在斑马鱼中的优化及在多基因敲除中的应用，属于分子生物学领域。
技术介绍
利用ZFN、TALEN及CRISPR/Cas9技术已经在多个物种中实现了单个基因的定向敲除，但是，对于家族基因、基因之间相互作用及多基因调控相关方面的研究，需要在一个个体中对两个甚至多个基因同时进行研究，这时候多基因突变体的获得就显得尤为重要。通过基因编辑技术进行单基因多次编辑或单基因突变体的杂交也可以获得多基因突变体，但是工作量繁重，难度加大，而且对于一些连锁基因不能够通过杂交的方法来实现。CRISPR/Cas9技术在多基因多位点打靶方面具有很大的优势，人们相继开发了多种基于CRISPR/Cas9技术的多基因编辑技术。其中Csy4介导的多基因编辑技术是发展较快应用较广的一种。Csy4又称为Cas6f，是在原始CRISPR/Cas9系统crRNA生成过程中行使功能的一种RNA酶，但是这种RNA酶的特别之处在于，其只能识别并切割一种特异性的RNA序列，而且在这种序列的...
【技术保护点】
1.一种改良的Csy4序列，其特征在于，是在Csy4序列起始密码子的5’端增加了Kozak序列，Kozak的碱基序列为：gccgccacc。/n
【技术特征摘要】
1.一种改良的Csy4序列，其特征在于，是在Csy4序列起始密码子的5’端增加了Kozak序列，Kozak的碱基序列为：gccgccacc。
2.根据权利要求1所述的改良的Csy4序列，其特征在于，在Kozak序列的5’端增加了β-globin5’mRNA序列，β-globin5’mRNA的碱基序列如SEQIDNO.2所示。
3.根据权利要求2所述的改良的Csy4序列，其特征在于，其碱基序列如SEQIDNO.1所示。
4.一种改良的Csy4序列的改良方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）根据密码子的偏好性、GC含量、mRNA二级结构及顺势作用元件，对Csy4序列进行优化改良；
（2）在改良的Csy4碱基序列的起始密码子的5’端增加了Kozak序列：gccgccacc，同时，为了增加mRNA的稳定性，在Kozak序列5’端增加了β-globin5’mRNA序列，优化后的Csy4称之为GKCsy4，GKCsy4的碱基序列如SEQIDNO.1所示；
（3）方便载体构建，在GKCsy4序列两端分别添加ClaI和AvaI酶切位点。
5.一种改良的Csy4序列在斑马鱼中的优化及在多基因敲除中的应用，其特征在于，所述改良的Csy4序列为GKCsy4。
6.如权利要求5所述的改良的Csy4序列在斑马...
【专利技术属性】
技术研发人员：张运生，杨品红，刘良国，
申请(专利权)人：湖南文理学院，
类型：发明
国别省市：湖南;43
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。