促进蛋白胞外表达的信号肽制造技术

本发明专利技术公开了促进蛋白胞外表达的信号肽，属于基因工程及酶工程技术领域。本发明专利技术以枯草芽孢杆菌为宿主，通过对枯草芽孢杆菌内源信号肽Ggt、YweA、YolA进行同义突变，高通量筛选选择高和低荧光值的单克隆，经测序鉴定后，突变信号肽后，将变体接种到摇瓶发酵验证，得到能使胞外蛋白量显著提高的同义突变序列，在保证蛋白正常翻译的同时，又能提高蛋白的表达量。Ggt、YweA、YolA信号肽的同义突变序列分别能使胞外酶活较野生型提高1.45、0.59、1.04倍，从而为酶的胞外高效表达提供一种新策略。

【技术实现步骤摘要】
促进蛋白胞外表达的信号肽
本专利技术涉及促进蛋白胞外表达的信号肽，属于基因工程及酶工程

技术介绍
普鲁兰酶(Pullulanase，EC3.2.1.41)是一种被广泛使用的淀粉脱支酶，它可以水解淀粉多糖如普鲁兰多糖、支链淀粉、α-糊精、β-糊精、糖原和相关多糖中的α-1，6糖苷键。普鲁兰酶已经被广泛的应用于乙醇燃料、环糊精、抗性淀粉、麦芽三糖糖浆等产品的生产中。因为其水解多糖的性质，普鲁兰酶的表达体系最好能在食品级表达系统中构建。枯草芽孢杆菌在食品工业、抗体生产和畜牧业中均具有重要的应用。但是，目前在枯草芽孢杆菌中普鲁兰酶的表达量很低，而且需要检测细胞生长状态，在合适的时机添加昂贵的蔗糖诱导剂，因此有必要进一步优化普鲁兰酶的产量。在目前的研究中主要是通过添加信号肽或对普鲁兰酶进行突变，以期能够提高酶的胞外表达量。对于普鲁兰酶本身的突变，虽然可以提高其胞外的表达量，但是常会使其本身的催化性质发生改变；而信号肽的添加虽然可提高酶的胞外表达量，但是其提高量仍然有限。因此，需要提供一种新的方法来保证普鲁兰酶本身性质不发生改变的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.信号肽，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1～3所示任一。/n

【技术特征摘要】
1.信号肽，其特征在于，核苷酸序列如SEQIDNO.1～3所示任一。


2.一种提高枯草芽孢杆菌胞外蛋白表达量的方法，其特征在于，在编码蛋白的核苷酸序列的N端添加SEQIDNO.1或SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示信号肽。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在目的蛋白的N端添加所述信号肽，并构建重组质粒，将重组质粒导入枯草芽孢杆菌。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述目的蛋白为任意枯草芽孢杆菌分泌至胞外的蛋白。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述目的蛋白包括普鲁兰酶和sfGFP；所述普鲁兰酶的NCBI登录号为AMQ67157。

【专利技术属性】
技术研发人员：佟毅，刘松，徐奎栋，李江华，陈坚，
申请(专利权)人：吉林中粮生化有限公司，江南大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22