一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36865及应用制造技术

一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36865为一种纤维小体对接蛋白DocA，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，进行定点突变，获得适用于低钙离子浓度的对接蛋白组合突变体36865，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述对接蛋白突变体适用于低钙离子浓度为10

A novel fibrosome docking protein combination mutant 36865 suitable for low calcium concentration and its application

【技术实现步骤摘要】
一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36865及应用
本专利技术属于基因工程和酶工程领域，具体涉及一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36865及应用。
技术介绍
纤维小体是厌氧生物产生的能够高效彻底的降解天然纤维素的一种胞外多酶复合体，包含纤维素酶、半纤维素酶等酶类以及相关的辅助因子，这些辅助因子依靠特定的折叠亚单位与酶相连[侯爱华,吴斌辉.细菌纤维小体的结构和功能[J].纤维素科学与技术,2002(01):50-56.]。纤维小体主要由两部分组成：含有酶或其他辅助蛋白的对接蛋白(dockerin，Doc)和含有结构蛋白的粘连蛋白(cohesin，Coh)。现有技术研究发现纤维小体元件Doc中存在一段富含亲水性氨基酸的序列D1D/N3D/N5D/N9D12，并且通过突变其中的S688–T689和S720–T721之间的序列可以改变来自于不同产生物种的Doc和Coh相互之间的亲和能力，参见文献[Page`s.PROTEINS:Structure,Function,andGenetics,1997,29:517本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36865，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白DocA，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，进行定点突变，获得适用于低钙离子浓度的对接蛋白组合突变体36865，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36865，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白DocA，核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，进行定点突变，获得适用于低钙离子浓度的对接蛋白组合突变体36865，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36865，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白DocA，氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，进行定点突变，获得适用于低钙离子浓度的对接蛋白组合突变体36865，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.如权利要求1-2任一项所述突变体36865的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
以上述对接蛋白中的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，进行定点突变，获得对接蛋白组合突变体36865，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示为基础，设计定点突变引物，以携带纤维小体对接蛋白基因的pET28a(+)载体为模板，进行PCR，构建重组突变质粒，并将突变质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，挑选阳性克隆进行发酵，发酵结束后收集菌体，对菌体进行破碎，纯化获得纤维小体对接蛋白突变体。


4.如权利要求3所述突变体36865的制备方法，其特征在于，所述制备方法中，由对接蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，突变为对接蛋白组合突变体36865，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


5.如权利要求3所述突变体36865的制备方法，其特征在于，发酵结束后离心收集菌体，对菌体进行超声破碎，经亲和色谱纯化获得纤维小体对接蛋白突变体。


6.如权利要求3所述突变体36865的制备方法，其特征在于，对接蛋白组合突变体36865的PCR扩增，将质粒分为AB段和BA段，AB段扩增引物为SEQIDNO.9和SEQIDNO.12，BA段扩增引物为SEQIDNO.10和SEQIDNO.11，使用所述扩增引物分别对AB段和BA段进行扩增。


7.如权利要求6所述突变体36865的制备方法，其特征在于，PCR反应体系：
质粒DocA-pET28a载体模板1μL，正向突变引物F1/F22μL，反向突变引物R2/R12μL，2×MaxBuffer25μL，dNTP4μL，DNAPolymerase1μL，ddH2O15μL；
优选的...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪俊卿，姜彦君，李楠，薛乐，范翰，王瑞明，田文卓，杨翠平，王大涛，王子睿，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37