一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36863及应用制造技术

一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36863为一种纤维小体对接蛋白DocA，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，进行定点突变，获得适用于低钙离子浓度的对接蛋白组合突变体36863，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述对接蛋白突变体适用于低钙离子浓度为10

【技术实现步骤摘要】
一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36863及应用
本专利技术属于基因工程和酶工程领域，具体涉及一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36863及应用。
技术介绍
纤维小体是一种通过细胞粘附蛋白附着在厌氧生物表面的一种大的、多酶系的蛋白质，分子量2.0′106～2.5′106D，结合于细菌细胞壁上，生长后期部分脱离细胞并释放到培养液中与底物结合，以胞外多酶复合体的形式存在，功能上类似真菌线粒体，主要由含多种类型粘连模块的非催化亚基脚手架蛋白和含多种类型对接模块的催化亚基酶蛋白两部分组装而成。纤维小体主要由两部分组成：含有酶或其他辅助蛋白的对接蛋白(dockerin，Doc)和含有结构蛋白的粘连蛋白(cohesin，Coh)。纤维小体中已经发现的酶包括内切纤维素酶、外切纤维素酶、纤维二糖水解酶等在内的12种纤维素降解酶，3种以上的木聚糖酶，以及1种地衣多糖酶等，另外，纤维小体还可以通过相互之间锚定作用，形成多聚纤维小体，并包裹一层糖蛋白外衣，形成细胞表面的突起结构。现有技术研究发现纤维小体元件Doc中存在一段富本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36863，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白DocA，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，进行定点突变，获得适用于低钙离子浓度的对接蛋白组合突变体36863，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36863，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白DocA，核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，进行定点突变，获得适用于低钙离子浓度的对接蛋白组合突变体36863，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白组合突变体36863，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白DocA，氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，进行定点突变，获得适用于低钙离子浓度的对接蛋白组合突变体36863，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.如权利要求1-2任一项所述突变体36863的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
以上述对接蛋白中的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，进行定点突变，获得对接蛋白组合突变体36863，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示为基础，设计定点突变引物，以携带纤维小体对接蛋白基因的pET28a(+)载体为模板，进行PCR，构建重组突变质粒，并将突变质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，挑选阳性克隆进行发酵，发酵结束后收集菌体，对菌体进行破碎，纯化获得纤维小体对接蛋白突变体。


4.如权利要求3所述突变体36863的制备方法，其特征在于，所述制备方法中，由对接蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，突变为对接蛋白组合突变体36863，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


5.如权利要求3所述突变体36863的制备方法，其特征在于，发酵结束后离心收集菌体，对菌体进行超声破碎，经亲和色谱纯化获得纤维小体对接蛋白突变体。


6.如权利要求3所述突变体36863的制备方法，其特征在于，对接蛋白组合突变体36863的PCR扩增，将质粒分为AB段和BA段，AB段扩增引物为SEQIDNO.9和SEQIDNO.12，BA段扩增引物为SEQIDNO.11和SEQIDNO.10，使用所述扩增引物分别对AB段和BA段进行扩增。


7.如权利要求6所述突变体36863的制备方法，其特征在于，PCR反应体系：
质粒DocA-pET28a载体模板1μL，正向突变引物F1/F22μL，反向突变引物R2/R12μL，2×MaxBuffer25μL，dNTP4μL，DNAPolymerase1μL，ddH2O15μL；
优选的...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪俊卿，张丽华，李楠，范翰，王瑞明，肖静，杨翠平，王大涛，姜彦君，薛乐，刘思奇，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37