一种活疫苗培养基及其应用、牦牛副伤寒活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术涉及兽医生物制品领域，特别是涉及一种活疫苗培养基及其应用、牦牛副伤寒活疫苗及其制备方法。本发明专利技术提供了一种活疫苗培养基，包括胰蛋白胨、酵母提取粉、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和葡萄糖。本发明专利技术提供的活疫苗培养基具有质量稳定、制备简单、省时省力的优点。

A live vaccine culture medium and its application, yak paratyphoid live vaccine and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种活疫苗培养基及其应用、牦牛副伤寒活疫苗及其制备方法
本专利技术涉及兽医生物制品领域，特别是涉及一种活疫苗培养基及其应用、牦牛副伤寒活疫苗及其制备方法。
技术介绍
牦牛副伤寒(Yakparatyphoid)又称牦牛沙门氏菌病(Salmonellosisofyaks)，主要是由沙门氏菌(Salmonella)引起的以牦牛的消化道和呼吸道为主要症状的急性或慢性传染病，目前主要通过接种疫苗进行预防。现阶段，我国兽医生物制品中，制苗用的菌液生产多采用传统的天然培养基。生产牦牛副伤寒活疫苗采用的肉汤培养基均采用新鲜牛肉制成牛肉汤，再添加蛋白胨、氯化钠等营养物质制成；在制备过程中不可控的因素多且程序繁琐、品质影响因素多、费时、费力、成本高，且没有现成的培养基供使用，并且肉汤培养基主要成分牛肉浸液受牛的品种、年龄、牛肉来源及新鲜程度、牛肉消化程度等因素影响大，造成疫苗的质量不稳定。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种活疫苗培养基及其应用、牦牛副伤寒活疫苗及其制备方法，本专利技术提供的活疫苗培养基具有质量稳定、制备简单、省时省力的优点。为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术提供了一种活疫苗培养基，包括胰蛋白胨、酵母提取粉、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和葡萄糖；每100mL活疫苗培养基含胰蛋白胨1～3g、酵母提取粉1～4g、氯化钠0.5g、磷酸二氢钾0.2542g、磷酸氢二钠0.6818g和葡萄糖0.5～0.25g。本专利技术提供了上述技术方案所述培养基在培养都柏林沙门氏菌STM8002-550株上的应用，所述应用包括：将都柏林沙门氏菌STM8002-550株接种于上述技术方案所述培养基中培养，得到菌液。优选的，所述都柏林沙门氏菌STM8002-550株的接种量为培养基体积的1％～3％。优选的，所述培养的pH值为7.2～7.4，所述培养模式包括发酵培养或通气培养；所述通气培养包括静置培养和通气培养两个阶段；所述通气培养的通气量为0.5kg/cm2～3.5kg/cm2。优选的，所述发酵培养的时间为16h～20h，温度为37℃～38℃；所述通气培养的时间为16h～20h，温度为38℃～39℃；所述静置培养的时间为3h～5h，温度为38℃～39℃。本专利技术提供了一种牦牛副伤寒活疫苗，包括上述技术方案所述应用制备得到的菌液。优选的，所述菌液中都柏林沙门氏菌STM8002-550株的活菌数＞1.0×1010CFU/mL。本专利技术提供了上述技术方案所述牦牛副伤寒活疫苗的制备方法，包括：将上述技术方案所述应用制备得到的菌液离心，得到菌泥；将菌泥与生理盐水混合后，得到制苗用菌液；将制苗用菌液与冻干保护剂混合，干燥，得牦牛副伤寒活疫苗。优选的，所述离心的转速为3500r/min～12000r/min，时间为10min～20min；所述干燥包括真空冷冻干燥；所述真空冷冻干燥的程序为：所述真空冷冻干燥包括第一冷冻干燥、第二冷冻干燥和第三冷冻干燥；所述第一冷冻干燥的温度为-40℃以下，真空度为0mpa，时间为1.5～4h；所述第二冷冻干燥的温度为-15～-4℃，真空度为10～25mpa，时间为12h～18h；所述第三冷冻干燥的温度为20～28℃，真空度为10～25mpa，时间为7～10h。本专利技术提供了一种活疫苗培养基，包括胰蛋白胨、酵母提取粉、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和葡萄糖；每100mL活疫苗培养基含胰蛋白胨1～3g、酵母提取粉1～4g、氯化钠0.5g、磷酸二氢钾0.2542g、磷酸氢二钠0.6818g和葡萄糖0.5～0.25g。本专利技术提供的活疫苗培养基中，蛋白胨含有丰富的氮源、氨基酸等；酵母提取粉主要成分为多肽、氨基酸、核苷酸、B族维生素及微量元素；本专利技术所述培养基在蛋白胨、酵母提取粉和葡萄糖的配合下，能够提供细菌生长繁殖所需的能量，保证细胞的生长所述养分，同时还能够促进发育和细胞的再生。氯化钠是一种电解质补充药物，对维持正常的血液和细胞外液的容量和渗透压起着非常重要的作用。磷酸二氢钾和磷酸氢二钠是两种可溶性的盐，二者构成磷酸盐缓冲体系，可延缓细菌的代谢产物而致培养液酸碱度升高或降低，使细菌生长繁殖在一个较为稳定的环境中。试验结果表明，本专利技术提供的培养基能够满足制造牦牛副伤寒活疫苗的菌种生长繁殖和活菌菌数的营养因子的需求，具有质量稳定、制备简便、省时省力和培养菌数高的优势。具体实施方式本专利技术提供了一种活疫苗培养基，包括胰蛋白胨、酵母提取粉、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和葡萄糖；每100mL活疫苗培养基含胰蛋白胨1～3g、酵母提取粉1～4g、氯化钠0.5g、磷酸二氢钾0.2542g、磷酸氢二钠0.6818g和葡萄糖0.5～0.25g。本专利技术对所用原料无特殊要求，均为本领域技术人员常规购买的生化药品即可。以100mL活疫苗培养基计，本专利技术提供的活疫苗培养基的原料包括1～3g胰蛋白胨，优选为2g。以所述蛋白胨的质量为基准，本专利技术提供的活疫苗培养基的原料包括1～4g酵母提取粉，优选为2～4g，更优选为4g。以所述蛋白胨的质量为基准，本专利技术提供的活疫苗培养基的原料包括0.5g氯化钠。以所述蛋白胨的质量为基准，本专利技术提供的活疫苗培养基的原料包括0.2542g磷酸二氢钾。以所述蛋白胨的质量为基准，本专利技术提供的活疫苗培养基的原料包括0.6818g的磷酸氢二钠。以所述蛋白胨的质量为基准，本专利技术提供的活疫苗培养基的原料包括0.5～2.5g葡萄糖，优选为1g。在本专利技术中，所述活疫苗生产培养基优选为液态培养基。本专利技术提供的活疫苗培养基中，在蛋白胨、酵母提取粉和葡萄糖的配合下，能够提供细菌生长繁殖所需的能量，保证细胞的生长所需养分，同时还能够促进发育和细胞的再生。氯化钠是一种电解质补充药物，对维持正常的血液和细胞外液的容量和渗透压起着非常重要的作用。磷酸二氢钾和磷酸氢二钠是两种可溶性的盐，二者构成磷酸盐缓冲体系，可延缓细菌的代谢产物而致培养液酸碱度升高或降低，使细菌生长繁殖在一个较为稳定的环境中。本专利技术提供了上述技术方案所述培养基在培养都柏林沙门氏菌STM8002-550株(张晓明，兀征，李惠菊，李光喜，程艳书.牦牛副伤寒弱毒菌株培育及其免疫的研究,中国兽医科技，1991)上的应用，所述应用包括：将都柏林沙门氏菌STM8002-550株接种于上述技术方案所述培养基中培养，得到菌液。在本专利技术中，所述都柏林沙门氏菌STM8002-550株的接种量优选为培养基体积的1％～3％，更优选为1％；所述培养的pH值为7.2～7.4，更优选为7.2。在本专利技术中，所述都柏林沙门氏菌STM8002-550株(张晓明，兀征，李惠菊，李光喜，程艳书.牦牛副伤寒弱毒菌株培育及其免疫的研究,中国兽医科技，1991)优选由甘肃省畜牧兽医研究所保存并提供。在本专利技术中，所述培养基优选采用氢氧化钠调节pH。在本专利技术中，所述培养过程中的碳源补充液优选为40％的葡萄糖。在本专利技术中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种活疫苗培养基，其特征在于，包括胰蛋白胨、酵母提取粉、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和葡萄糖；每100mL活疫苗培养基含胰蛋白胨1～3g、酵母提取粉1～4g、氯化钠0.5g、磷酸二氢钾0.2542g、磷酸氢二钠0.6818g和葡萄糖0.5～0.25g。/n

【技术特征摘要】
1.一种活疫苗培养基，其特征在于，包括胰蛋白胨、酵母提取粉、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和葡萄糖；每100mL活疫苗培养基含胰蛋白胨1～3g、酵母提取粉1～4g、氯化钠0.5g、磷酸二氢钾0.2542g、磷酸氢二钠0.6818g和葡萄糖0.5～0.25g。


2.权利要求1所述培养基在培养都柏林沙门氏菌STM8002-550株上的应用，其特征在于，所述应用包括：将都柏林沙门氏菌STM8002-550株接种于权利要求1所述培养基中培养，得到菌液。


3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述都柏林沙门氏菌STM8002-550株的接种量为培养基体积的1％～3％。


4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述培养的pH值为7.2～7.4，所述培养的模式包括发酵培养或通气培养；所述通气培养培养包括静置培养和通气培养两个阶段；
所述通气培养的通气量为0.5kg/cm2～3.5kg/cm2。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述发酵培养的时间为16h～20h，温度为37℃～38℃；所述通气培养的时间为16h～20h，温度为38℃～39℃；所述静置培养的时间为3h～5h，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈伯祥，赵子惠，李元新，成伟伟，杨明，
申请(专利权)人：甘肃省畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62