犬源产维生素B12乳酸菌及应用制造技术

本发明专利技术公开了犬源产维生素B12乳酸菌及其应用，该犬源产维生素B12乳酸菌的分类命名为罗伊氏乳杆菌(

【技术实现步骤摘要】
犬源产维生素B12乳酸菌及应用
本专利技术属于生物
，涉及一种犬源产维生素B12乳酸菌及其应用，具体涉及一种具有能够产维生素B12，用于预防和改善犬胃肠道疾病时维生素B12缺乏的菌株NJAULR01，以及其在宠物食品中的应用。
技术介绍
维生素B12在机体中发挥着重要的生理作用，其作为蛋氨酸合成酶和甲基丙二酰辅酶A超氧化物歧化酶的辅助因子，参与同型半胱氨酸代谢、能量代谢和DNA复制，并且在产生和维持神经细胞髓鞘中起着关键作用。事实上，所有组织机能的正常发挥均需要维生素B12，但人类和非反刍动物均无法自身合成维生素B12，需要从富含维生素B12的动物性食品(肉类、肝脏、肾脏、蛋类、牛奶、鱼类和贝壳类)中获得。进食动物性食品后，在胃内酸性条件下，食物中与蛋白质结合维生素B12得到释放，在胃内迅速与称为R结合物的一种糖蛋白结合。在犬中，R结合物在胃中合成，具有耐酸、耐胃蛋白酶的特性，可在维生素B12通过胃时提供保护作用。与R结合物结合的维生素B12到达十二指肠后，在碳酸氢盐存在的环境下，由胰腺蛋白酶将R结合物水解，释放出游离的维生素B12。随后，游离的维生素B12在肠内与内因子结合，形成钴胺素-内因子复合物。内因子合成的位点也因物种而异，在犬中主要由胃和胰腺合成。钴胺素-内因子复合物穿过肠道最终到达回肠末端，与回肠末端的钴胺素-内因子特异性受体结合并被吸收。还有一部分维生素B12通过肝肠循环被吸收。维生素B12缺乏引起的临床症状多种多样，包括巨幼细胞性贫血，伴有白细胞减少和血小板减少，消化粘膜萎缩，以及与神经细胞脱髓鞘有关的精神、认知和本体感觉障碍等神经症状。维生素B12的缺乏可由摄入、消化和吸收三方面中的一个或多个方面出现问题所导致的。目前市场上的宠物日粮通常拥有均衡的营养配比，犬猫一般不会出现维生素B12缺乏。犬猫维生素B12缺乏通常是由于胃肠道功能异常，特别是能够引起回肠和胰腺功能障碍的疾病引起维生素B12的消化吸收障碍。此外，在某些肝脏疾病中也会出现犬猫维生素B12缺乏。引起犬猫维生素B12缺乏最常见的疾病是慢性腹泻，尤其是波及回肠的慢性腹泻，可造成回肠末端的钴胺素-内因子特异性受体功能障碍，使得维生素B12的吸收受到影响。也有研究表明犬小肠细菌过度生长会造成维生素B12的耗竭。Simpson等人的研究表明，61.3％存在慢性腹泻临床症状表现的猫血清钴胺素低于正常值，Kook等人发现同时出现呕吐和腹泻症状的猫更容易出现维生素B12的缺乏。还有报道表明维生素B12缺乏在患脂肪肝的猫中也较为常见，可能是由于潜在的胃肠道疾病或胆管肝炎所引起的。由于胰腺外分泌部是犬猫内因子的主要合成部位，所以胰腺外分泌功能不全的犬猫会出现维生素B12的缺乏。研究表明，在胰腺外分泌功能不全的猫中均出现了较低的血清维生素B12水平。Batchelor等人发现，82.8％患有胰腺外分泌功能不全的犬血清维生素B12水平较低。其他能够引起维生素B12缺乏的疾病包括犬猫的甲状腺机能减退或甲状腺机能亢进、胃肠道淋巴瘤和某些特殊品种的遗传性维生素B12吸收障碍。总而言之，维生素B12缺乏在罹患胃肠道疾病、胰腺疾病、肝脏疾病以及一些内科疾病的犬猫中较为常见。常规犬猫维生素B12缺乏症的治疗主要通过每周皮下注射一次适当剂量的维生素B12，连续补充6周。而在一项最新的研究中发现，口服补充维生素B12也可纠正罹患慢性肠病犬的维生素B12缺乏，表明口服补充维生素B12可以替代慢性肠病和维生素B12缺乏症动物皮下注射的给药方式。并且口服补充维生素B12通常比注射的方式更便宜、简单、减少动物的痛苦并且提高主人的依从性。维生素B12主要通过微生物发酵获得，脱氧假单胞菌和费氏丙酸杆菌是目前工业应用最广的维生素B12生产菌，但这两种菌均为工业用菌，并且对发酵的条件、时间和提取方法等均有严格要求，选择品质优良的维生素B12发酵菌株仍是当前研究的热点。乳酸菌是应用最早、最广泛的益生素，且是国际公认的食品级安全微生物(GRAS)。乳酸菌制剂可以通过调节肠道菌群并且维持肠道的正常微生物平衡来预防和治疗胃肠道疾病，广泛应用于动物医疗和饲料相关领域。乳酸菌作为动物肠道中重要的益生菌群，产生的代谢产物富含有机酸，可通过降低肠道内pH值的方式来抑制肠道中潜在致病菌的生长；通过竞争性抑制病原体定植，调节肠道中的微生物生态平衡；还可提高动物机体免疫力等。近年来研究发现，乳酸菌同样具有产维生素B12的能力。Bhushan等从人类粪便及乳汁中分离的乳酸菌具有产维生素B12的能力。有研究表明，给予缺乏维生素B12的怀孕母鼠口服具有产维生素B12能力的乳酸菌可治疗其因维生素B12缺乏而导致的临床症状。综上所述，鉴于犬猫罹患慢性腹泻、其他消化系统疾病和营养代谢性疾病所引起的维生素B12缺乏较为常见，分离鉴定能够产维生素B12的乳酸菌制备产维生素B12益生菌制剂，该制剂可同时发挥益生作用及补充维生素B12功能，以代替常规治疗手段，既减少了动物的痛苦又提高了主人的依从性。将是防治犬胃肠道疾病及维生素B12缺乏的有效手段。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种犬源产维生素B12乳酸菌NJAULR01，该菌株具有调节肠道微生物平衡，并且能够产生维生素B12以预防和改善犬胃肠道疾病和维生素B12的缺乏，代替常规治疗(皮下注射)手段。本专利技术还要解决的技术问题是提供该犬源产维生素B12乳酸菌NJAULR01在制备维生素B12或肠道益生菌中的应用。本专利技术还要解决的技术问题是提供犬源产维生素B12乳酸菌在犬内定殖中的应用。本专利技术最后要解决的技术问题是提供维生素B12的制备方法。技术方案：本专利技术提供了犬源产维生素B12乳酸菌，该犬源产维生素B12乳酸菌的分类命名为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)，保藏编号为：CGMCCNO.19126，2019年12月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本
技术实现思路
还包括所述的犬源产维生素B12乳酸菌在制备维生素B12中的应用。本
技术实现思路
还包括所述的犬源产维生素B12乳酸菌在制备益生菌中的应用。本
技术实现思路
还包括含有所述的犬源产维生素B12乳酸菌的肠道益生菌。本
技术实现思路
还包括采用所述的维生素B12的制备方法，包括以下步骤：将犬源产维生素B12乳酸菌活化得到活化菌，将活化菌接种到MRS肉汤培养基中，置于恒温培养箱中厌氧静置培养得到菌液，将菌液离心后取上清液置于避光瓶即得维生素B12。其中，所述活化菌接种量为3％～9％，培养时间为24～96h。其中，所述MRS肉汤培养基中还包括猪胆盐，所述猪胆盐浓度为0.1％～0.4％(w/v)。其中，所述MRS肉汤培养基中还包括胰蛋白酶，所述胰蛋白酶浓度为1.0％～1.4％。其中，所述MRS肉汤培养基中还包括Co2+，Co2+浓度为5～20μg/mL。其中，作为优选，所述MRS肉汤培养基的Co2+浓度为10μg/mL。本
技术实现思路
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【技术保护点】
1.犬源产维生素B12乳酸菌，其特征在于，该犬源产维生素B12乳酸菌的分类命名为罗伊氏乳杆菌(

【技术特征摘要】
1.犬源产维生素B12乳酸菌，其特征在于，该犬源产维生素B12乳酸菌的分类命名为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)，保藏编号为：CGMCCNO.19126，2019年12月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。


2.权利要求1所述的犬源产维生素B12乳酸菌在制备维生素B12或益生菌中的应用。


3.权利要求1所述的犬源产维生素B12乳酸菌在犬内定殖中的应用。


4.含有权利要求1所述的犬源产维生素B12乳酸菌的肠道益生菌。


5.采用权利要求1所述的维生素B12的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将犬源产维生素B12乳酸菌活化得到活化菌，将活化菌接种到MRS肉汤培养基中，置于恒温培养箱中厌氧静置培养得到菌液，将菌液离心后取上清液置于避光瓶中即得维生素B12。


6.根据权利要求5所述的犬源...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈兴祥，李本睿，牟佳欣，葛雷，后丽丽，蒋帅，黄克和，潘翠玲，甘芳，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32