一种NT-proBNP重组蛋白的保存液及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种NT‑proBNP重组蛋白的保存液及其制备方法，所述保存液以质量分数计包括5％～20％胎牛血清、1％～5％PVP10000、1％～10％乙二醇、1％～3％普鲁兰多糖、0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽、0.1％～1％BSA、0.02％～0.06％防腐剂、pH7～8的PBS缓冲液。该保存液使得NT‑proBNP重组蛋白生物活性能在37℃稳定7天，2～8℃稳定100天，‑20℃稳定150天，生物活性没有降解，仍然维持在原水平。

A preservation solution of NT proBNP recombinant protein and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种NT-proBNP重组蛋白的保存液及其制备方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种NT-proBNP重组蛋白的保存液及其制备方法。
技术介绍
1988年，日本学者首次从猪脑内分离得到一种具有强力的利钠、利尿、扩血管和降压作用的多肽，命名为脑钠肽或称钠尿肽(BrainNatriureticPeptide，BNP)。当心肌细胞受刺激后，会产生含134个氨基酸的B型利钠肽原前体(pre-proBNP)，随后在相关酶的作用下切掉N端的信号肽序列，形成含108个氨基酸的BNP前体(proBNP)，后者在内切酶的作用下裂解为含有76个氨基酸、无生物活性的N端产物--N末端B型脑利钠肽前体(NT-proBNP)和含有32个氨基酸、有活性的C端产物--B型利钠肽(BNP)。美国在2004年和2008年分别发表了BNP临床应用专家共识和国际NT-proBNP专家共识，系统阐述了BNP和NT-proBNP的生物学和临床应用，已经被各级医院和医师广泛用于临床实践，成为心血管病尤其是心力衰竭诊断和评估十分有用的生物标志物。但BNP半衰期短(22min)，体外稳定性差，而NT-proBNP半衰期相对较长(120min)，体外稳定性相对更强，在心力衰竭患者中的浓度也较BNP高，在有些情况下更有利于心力衰竭的诊断。天然的NT-proBNP具有76个氨基酸，分子量小，原核重组表达的蛋白缺乏糖基化，其稳定性较天然蛋白更差。因此，NT-proBNP试剂盒开发和使用过程中，对校准品的稳定性要求较高。因此，如何开发一种稳定保护NT-proBNP，防止其发生降解的稀释液，使得NT-proBNP重组蛋白的保存时间长，成为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种NT-proBNP重组蛋白的保存液及其制备方法，可延长NT-proBNP重组蛋白的保存时间，该保存液使得NT-proBNP重组蛋白生物活性能在37℃稳定7天，2～8℃稳定100天，-20℃稳定150天，生物活性没有降解，仍然维持在原水平。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种NT-proBNP重组蛋白的保存液，所述保存液以质量分数计包括5％～20％胎牛血清、1％～5％PVP10000、1％～10％乙二醇、1％～3％普鲁兰多糖、0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽、0.1％～1％BSA、0.02％～0.06％防腐剂、pH7～8的PBS缓冲液。进一步地，所述BSA的质量分数为0.1％。进一步地，所述PBS缓冲液的pH为7.4。进一步地，所述普鲁兰多糖的质量分数为2％。进一步地，所述保存液以质量分数计包括5％胎牛血清、2.5％PVP10000、5％乙二醇、2％普鲁兰多糖、0.25％还原型谷胱甘肽、0.1％BSA、0.05％防腐剂、pH7.4的PBS缓冲液。进一步地，所述保存液以质量分数计包括5％胎牛血清、5％PVP10000、5％乙二醇、2％普鲁兰多糖、0.1％还原型谷胱甘肽、0.1％BSA、0.05％防腐剂、pH7.4的PBS缓冲液。进一步地，述保存液以质量分数计包括10％胎牛血清、5％PVP10000、1％乙二醇、2％普鲁兰多糖、0.5％还原型谷胱甘肽、0.1％BSA、0.05％防腐剂、pH7.4的PBS缓冲液。进一步地，所述防腐剂包括Proclin300、叠氮钠中的至少一种。进一步地，所述保存液还包括摩尔浓度为100mM～200mM盐类，所述盐类为NaCl。本专利技术还提供了一种NT-proBNP重组蛋白的保存液的制备方法，采用所述的配方配制而得。本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：本专利技术提供的一种NT-proBNP重组蛋白的保存液，在pH7～8的PBS缓冲液体系下，添加1％～5％PVP10000防冻剂，0.02％～0.06％防腐剂，1％～10％乙二醇+1％～3％普鲁兰多糖+0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽+0.1％～1％BSA起到协同增效的作用，稳定保护NT-proBNP重组蛋白，防止其发生降解，其中，1％～10％乙二醇保持蛋白表面的水分，1％～3％普鲁兰多糖可以防止氧化，0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽可以对抗氧化剂对蛋白巯基的破坏。该保存液使得NT-proBNP重组蛋白生物活性能在37℃稳定7天，2～8℃稳定100天，-20℃稳定150天，生物活性没有降解，仍然维持在原水平。具体实施方式下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本专利技术，本专利技术的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得。本申请实施例的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：根据本专利技术一种典型的实施方式，提供一种NT-proBNP重组蛋白的保存液，所述保存液以质量分数计包括5％～20％胎牛血清、1％～5％PVP10000、1％～10％乙二醇、1％～3％普鲁兰多糖、0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽、0.1％～1％BSA、0.02％～0.06％防腐剂、pH7～8的PBS缓冲液。本专利技术经过试验发现，在pH7～8的PBS缓冲液体系下，添加1％～5％PVP10000低温保存剂，0.02％～0.06％防腐剂，1％～10％乙二醇+1％～3％普鲁兰多糖+0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽+0.1％～1％BSA起到协同增效的作用，稳定保护NT-proBNP重组蛋白，防止其发生降解，其中，1％～10％乙二醇能保持蛋白表面的水分，1％～3％普鲁兰多糖可以防止氧化，0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽能保护蛋白的巯基不被破坏。该保存液使得NT-proBNP重组蛋白生物活性能在37℃稳定7天，2～8℃稳定100天，-20℃稳定150天，生物活性没有降解，仍然维持在原水平。若所述乙二醇的质量分数小于1％，对蛋白起不到稳定保护效果；若大于5％，对浓度测值大小有影响若所述普鲁兰多糖的质量分数小于1％，对蛋白起不到稳定保护效果；若大于3％，溶液粘度增大，测试精密度(CV)变差。若所述还原型谷胱甘肽的质量分数小于0.1％，对蛋白起不到稳定保护效果；若大于0.5％，不利于稳定性若所述BSA的质量分数小于0.1％，对蛋白起不到稳定保护效果；若大于1％，在37℃保存条件下稳定性变差。表明1％～10％乙二醇+1％～3％普鲁兰多糖+0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽+0.1％～1％BSA能起到最佳的协同增效作用，任何一种组分过大或过小均不利于起到协同增效的作用，来稳定保护NT-proBNP重组蛋白，防止其发生降解。作为一种可选的实施方式，所述BSA的质量分数为0.1％。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NT-proBNP重组蛋白的保存液，其特征在于，所述保存液以质量分数计包括5％～20％胎牛血清、1％～5％PVP10000、1％～10％乙二醇、1％～3％普鲁兰多糖、0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽、0.1％～1％BSA、0.02％～0.06％防腐剂、pH7～8的PBS缓冲液。/n

【技术特征摘要】
1.一种NT-proBNP重组蛋白的保存液，其特征在于，所述保存液以质量分数计包括5％～20％胎牛血清、1％～5％PVP10000、1％～10％乙二醇、1％～3％普鲁兰多糖、0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽、0.1％～1％BSA、0.02％～0.06％防腐剂、pH7～8的PBS缓冲液。


2.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP重组蛋白的保存液，其特征在于，所述BSA的质量分数为0.1％。


3.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP重组蛋白的保存液，其特征在于，所述PBS缓冲液的pH为7.4。


4.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP重组蛋白的保存液，其特征在于，所述普鲁兰多糖的质量分数为2％。


5.根据权利要求1所述的一种NT-proBNP重组蛋白的保存液，其特征在于，所述保存液以质量分数计包括5％胎牛血清、2.5％PVP10000、5％乙二醇、2％普鲁兰多糖、0.25％还原型谷胱甘肽、0.1％BSA、0.05％防腐剂、pH7.4的PBS缓冲液。


6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李兰芝，来祥兵，赵愿安，舒芹，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42