利用无血清Vero细胞和狂犬病病毒rPV-2061制备狂犬病疫苗的工艺制造技术

本发明专利技术公开了利用无血清Vero细胞和狂犬病病毒rPV‑2061制备狂犬病疫苗的工艺。本发明专利技术的工艺包括：以美国标准菌种保藏中心(ATCC)编号为CCL‑81.5的Vero细胞为病毒培养的宿主，接种狂犬病病毒rPV‑2061株，培养，制备成狂犬病病毒疫苗。本发明专利技术的特定宿主、病毒组合，可在无血清培养中大量扩增病毒；疫苗制备过程中，无需添加牛血清、胰酶、明胶和右旋糖酐，能达到极高的生产效率，且疫苗具有很高的效价和热稳定性。

Preparation of rabies vaccine from serum-free Vero cells and rabies virus rpv-2061

【技术实现步骤摘要】
利用无血清Vero细胞和狂犬病病毒rPV-2061制备狂犬病疫苗的工艺
本专利技术属于疫苗领域。
技术介绍
狂犬病是一种致死性疾病，一旦发病，其死亡率接近100％。主要表现为一种急性侵袭性病毒性脑炎，通过暴露于传染性病毒的涎液或其它途径传播，疾病可以从动物传播给动物，或者从动物传播给人类。绝大部分人类狂犬病的发生均源于犬咬伤，但猫、猴也是重要的病毒携带者。狂犬病疫苗是预防和治疗狂犬病的最有效手段之一。目前我国国内生产使用的人用狂犬病疫苗主要有Vero细胞、原代地鼠肾细胞、人二倍体细胞3种细胞基质；液体和冻干两种成品剂型；1.0ml/剂和0.5ml/剂两种规格，主要使用的毒种为aG、CTN-1V、PV-2061、PM株，其中PM株主要用于人二倍体细胞狂犬病疫苗的生产，aG、CTN-1V、PV-2061株主要用于Vero细胞狂犬病疫苗的生产。目前上市销售的冻干人用狂犬病疫苗通常在细胞的培养、细胞传代、病毒收获或成品配制过程中添加牛血清、动物源性胰酶、人血白蛋白、明胶及右旋糖酐等添加物。其中牛血清添加于细胞培养基，动物源性胰酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备狂犬病疫苗的工艺，其特征在于：所述工艺包括：/n以美国标准菌种保藏中心(ATCC)编号为CCL-81.5的Vero细胞为病毒培养的宿主，接种狂犬病病毒rPV-2061株，培养，制备成狂犬病病毒疫苗。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备狂犬病疫苗的工艺，其特征在于：所述工艺包括：
以美国标准菌种保藏中心(ATCC)编号为CCL-81.5的Vero细胞为病毒培养的宿主，接种狂犬病病毒rPV-2061株，培养，制备成狂犬病病毒疫苗。


2.如权利要求1所述的工艺，其特征在于：所述工艺包括原液配制步骤：
(1)细胞培养：在生物反应器内无血清培养基灌流培养Vero细胞至0.6～0.7×107cells/ml，开始病毒接种；
(2)病毒接种：将狂犬病病毒rPV-2061按0.0025～0.01MOI接种到细胞，培养6h以上，开始使用无血清病毒维持液灌流培养；
(3)收毒：病毒接种后，从第3天开始收获病毒，得病毒收获液；
(4)灭活：使用β-丙内酯灭活病毒；
(5)酶切：使用核酸酶对Vero细胞宿主DNA进行酶切；
(6)纯化：分子筛层析纯化病毒；
(7)配制原液：加入终浓度0.5～3％(m/v)人血白蛋白和终浓度3～5％(m/v)的麦芽糖作为稳定剂，即为原液；
步骤(1)所述无血清培养液的组成为：
Vero细胞无血清培养基15.0～17.6g/L，谷丙二肽2～4mmol/L，果糖0.5～2.0g/L，Tricine0.5～2.0g/L；
步骤(2)所述无血清病毒维持液的组成为：
Vero细胞无血清培养基15.0～17.6g/L，谷丙二肽2～...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁智杰，黄林，崔利凯，陈坤，
申请(专利权)人：成都柏奥特克生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51