一种碳氮同位素检测用桑叶及桑枝的抗菌真空贮存方法技术

本发明专利技术涉及文物检测技术领域，公开了一种碳氮同位素检测用桑叶及桑枝的抗菌真空贮存方法，包括1）制备壳聚糖‑乙酸溶液；2）调节pH值，超声，加入吐温‑80，加热搅拌；3）加入茶树精油溶液、TPP溶液，得到悬液；4）低温超速离心，下层沉淀用生理盐水悬浮，冷冻干燥；5）将微胶囊与生石灰混合；6）将步骤5）所得产物置于无纺布袋中；7）对桑叶和桑枝洁净处理；8）将桑叶和桑枝装入贮存袋中，加入无纺布袋，真空封口。本发明专利技术通过抽真空以及吸湿抗菌作用，解决了对产地的桑叶及桑枝处理之前的贮存问题，可排除微生物对样品的影响，减少碳氮元素的自然分馏，降低产地同位素信息的流失，进而可确保碳氮同位素检测的准确性。

An antibacterial vacuum storage method for mulberry leaves and branches for carbon and nitrogen isotope detection

【技术实现步骤摘要】
一种碳氮同位素检测用桑叶及桑枝的抗菌真空贮存方法
本专利技术涉及文物检测
，尤其涉及一种碳氮同位素检测用桑叶及桑枝的抗菌真空贮存方法。
技术介绍
我国是世界上最早植桑、养蚕、缫丝、织绸的国家，但浩瀚的文献资料只能见证丝绸的生产及传播在古代制造业和奢侈品贸易中独领风骚；而关于丝绸的起源和传播的神话传说却不能令人信服。在这种情况下，我们需要建立一种稳定、有效的、科学的丝绸溯源的方法，而同位素溯源技术目前被证实是非常有效的溯源技术。同位素溯源技术主要是与产地建立联系，既能区分不同种类、不同来源的生物产品，又是判断地域来源比较直接而有效的一种方法。同位素是指原子核中质子数相同，但中子数不同的一系列原子。碳氮稳定同位素作为最常用的轻稳定同位素，可以通过同位素质谱分析法测得。要进行同位素质谱分析法测试的样品需要进行一系列的前处理，从而制备成符合测试条件的样品。而样品的保存好坏与否则会严重的影响轻稳定同位素含量及比例测试的结果。在野外采集新鲜的桑叶桑枝样品后，考虑到自然界中各类微生物(需氧菌、厌氧菌等)会以含碳氮元素的桑叶桑枝作为其生长繁殖所需的碳源氮源，而通常情况下，在采集到新鲜桑枝桑叶样品后又很难马上进行测试，甚至需要放置很多天后才能集中处理，这些新鲜桑枝桑叶很容易就会因会受微生物攻击等原因发生腐败变质，影响同位素数据的准确性。因此在采集到这些样品后，急需当即对样品进行处理，防止微生物(需氧菌、厌氧菌等)对其进行侵蚀，影响样品碳氮同位素的值使同位素溯源数据产生误差，并且减少碳氮同位素的自然分馏，尽可能保留产地信息。因此进行碳氮稳定同位素检测之前，需要先解决样品在处理之前的贮存问题。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种碳氮同位素检测用桑叶及桑枝的抗菌真空贮存方法，本专利技术通过抽真空以及生石灰包裹的茶树精油壳聚糖微胶囊的吸湿抗菌作用，解决了对产地的桑叶及桑枝处理之前的贮存问题，可排除微生物对样品的影响，减少碳氮元素的自然分馏，降低产地同位素信息的流失，进而可确保碳氮同位素检测的准确性。本专利技术的具体技术方案为：一种碳氮同位素检测用桑叶及桑枝的抗菌真空贮存方法，以g和mL计，包括以下步骤：1)称取0.1-0.2g壳聚糖粉末，加入98-196mL去离子水及2-4mL浓度为0.5-1.5wt％的乙酸溶液，搅拌后得澄清溶液，用微孔滤膜过滤，得到壳聚糖-乙酸溶液。2)将壳聚糖-乙酸溶液的pH值调至4-5后，于室温下超声处理，加入0.8-1.2wt％的吐温-80，吐温-80与壳聚糖-乙酸溶液的体积比为1∶8-12，在55-65℃恒温加热搅拌30-40min，得到均一稳定的溶液。3)向上述溶液中逐滴加入2.5-5wt％的茶树精油溶液，步骤2)所得溶液与茶树精油溶液的体积比为8-12∶1，室温搅拌后，以2-3滴/s的速率逐滴添加1-2mg/mLTPP溶液，搅拌1，得到白色乳状液，即茶树精油壳聚糖微胶囊悬液。4)将所得茶树精油壳聚糖微胶囊悬液低温超速离心后，下层沉淀用0.8-1.0wt％的生理盐水悬浮，以2-4wt％的甘露醇为冻干保护剂冷冻干燥后保存，获得茶树精油壳聚糖微胶囊。5)将步骤4)所得茶树精油壳聚糖微胶囊与生石灰在机械力作用下进行物理混合，质量比为茶树精油壳聚糖微胶囊∶生石灰＝1∶(2-2.5)，获得生石灰包裹的茶树精油壳聚糖微胶囊。本专利技术制备的生石灰包裹的茶树精油壳聚糖微胶囊具有少量吸水功能和杀菌效果(壳聚糖)。将其用无纺布包裹后放置在贮存袋中。当真空封口袋中桑叶桑枝有微量水分产生时，由于氧化钙具有出色的吸湿性，因此水分会被氧化钙迅速吸收。进一步的，氧化钙在吸水后释放出热量，导致材料表面升温，促进其内部包裹的茶树精油壳聚糖微胶囊中茶树精油的挥发，从而提高材料总体的杀菌效果(潮湿环境下容易滋生微生物，因此需要加强杀菌效果)，而当水分被吸收后，则氧化钙反应结束，不再放热，茶树精油不被加速释放，从而起到长效杀菌的功能。6)将步骤5)所得产物置于聚丙烯无纺布袋中，热封封口。7)选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶和桑枝，分别对其表面进行洁净处理。选取新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶、桑枝，在相同条件下，相对于有虫蛀，病斑的桑叶桑枝，能够保存更长久，并且对于检测桑叶桑枝本身的碳氮同位素时，可以排除一些外源性的影响，例如虫蛀后的桑叶桑枝的同位素影响和病斑带来的桑叶桑枝自身的同位素变化8)将洁净处理后的桑叶和桑枝装入贮存袋中，加入步骤6)所得聚丙烯无纺布袋，然后利用真空封口机对贮存袋进行真空封口处理。与用自封袋贮存样品进行收集相比，本专利技术用真空封口机进行真空封口后，能够将样品和空气隔绝开来，一方面排除需氧微生物的影响，一方面有利于样品的贮存。在真空状态下，样品的贮存时间会延长，并且内部的桑叶桑枝不易变质导致同位素的变化，影响之后的碳氮稳定同位素的检测。作为优选，步骤1)中，搅拌时间为4-6h，所述微孔过滤膜的孔径为0.4-0.5μm。作为优选，步骤2)中，调节pH的试剂为0.8-1.2mol/L的NaOH溶液，超声时间为10-20min。作为优选，步骤3)中，茶树精油溶液的质量分数为2.5-5wt％，加入茶树精油溶液后搅拌10-15min，加入TPP溶液后搅拌15-25min。步骤2)中溶液与茶树精油溶液的体积比为8-12∶1作为优选，步骤4)中，所述低温超速离心的参数设置为3-5℃，14000-16000r/min，25-35min；冷冻干燥温度为-20～-10℃。作为优选，步骤7)中，洁净处理所用的材料为无尘纸，洁净处理所用溶剂为75％的乙醇。用无尘纸进行除杂操作，顺着桑叶的纹理进行擦拭，能够除去粘附在桑叶表面的灰尘等易除去的杂质，无尘纸柔软不会损伤样品，而且不会在桑叶片上留下微粒和线头等杂质，同时又具有良好的保水效果，而75％的乙醇溶液是医用消毒酒精，用它进行擦拭，能够除去桑叶表面的部分微生物以及一些微小的灰尘。作为优选，步骤8)中，所述真空封口机，包括底座和与底座可翻转连接的上翻盖。所述底座的顶面设有凸起的中控台、储水槽、下密封圈和加热条；所述中控台集成有集成芯片以及与集成芯片联接的抽真空机构、温度控制板、温度显示屏、电量显示屏、真空度检测感应器和操作按钮；所述集成芯片上集成有电池；所述储水槽可拆卸式安装于底座上位于中控台的外侧，储水槽的周侧设有下密封圈；所述抽真空机构的抽气口设于下密封圈的内测边沿；所述加热条设于底座上位于储水槽的外侧，加热条与集成芯片联接。底座的边侧设有与集成芯片联接的充电口和与温度控制板联接的调温旋钮。所述上翻盖的内侧对应中控台的位置为镂空结构、对应下密封圈的位置设有与下密封圈配合的上密封圈、对应加热条的位置设有耐热压条。目前并未有专门适用于户外使用的便携式真空封口机，现有的真空封口机需要连接电源通电使用，并且由于其热封温度不可设置，因此只能配合特定材质的真空封口袋。这对于科研工作者在野外进行易腐败样本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种碳氮同位素检测用桑叶及桑枝的抗菌真空贮存方法，以g和mL计，其特征在于包括以下步骤：/n1）称取0.1-0.2 g壳聚糖粉末，加入98-196 mL去离子水及2-4 mL浓度为0.5-1.5wt%的乙酸溶液，搅拌后得澄清溶液，用微孔滤膜过滤，得到壳聚糖-乙酸溶液；/n2）将壳聚糖-乙酸溶液的pH值调至4-5后，于室温下超声处理，加入0.8-1.2wt%的吐温-80，吐温-80与壳聚糖-乙酸溶液的体积比为1:8-12，在55-65 ℃恒温加热搅拌30-40 min，得到均一稳定的溶液；/n3）向上述溶液中逐滴加入2.5-5wt%的茶树精油溶液，步骤2）所得溶液与茶树精油溶液的体积比为8-12:1，室温搅拌后，以2-3滴/s的速率逐滴添加1-2 mg/mL TPP溶液，搅拌，得到白色乳状液，即茶树精油壳聚糖微胶囊悬液；/n4）将所得茶树精油壳聚糖微胶囊悬液低温超速离心后，下层沉淀用0.8-1.0wt%的生理盐水悬浮，以2-4wt%的甘露醇为冻干保护剂冷冻干燥后保存，获得茶树精油壳聚糖微胶囊；/n5）将步骤4）所得茶树精油壳聚糖微胶囊与生石灰在机械力作用下进行物理混合，质量比为茶树精油壳聚糖微胶囊:生石灰=1:（2-2.5），获得生石灰包裹的茶树精油壳聚糖微胶囊；/n6）将步骤5）所得产物置于聚丙烯无纺布袋中，热封封口；/n7）选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶和桑枝，分别对其表面进行洁净处理；/n8）将洁净处理后的桑叶和桑枝装入贮存袋中，加入步骤6）所得聚丙烯无纺布袋，然后利用真空封口机对贮存袋进行真空封口处理。/n...

【技术特征摘要】
1.一种碳氮同位素检测用桑叶及桑枝的抗菌真空贮存方法，以g和mL计，其特征在于包括以下步骤：
1）称取0.1-0.2g壳聚糖粉末，加入98-196mL去离子水及2-4mL浓度为0.5-1.5wt%的乙酸溶液，搅拌后得澄清溶液，用微孔滤膜过滤，得到壳聚糖-乙酸溶液；
2）将壳聚糖-乙酸溶液的pH值调至4-5后，于室温下超声处理，加入0.8-1.2wt%的吐温-80，吐温-80与壳聚糖-乙酸溶液的体积比为1:8-12，在55-65℃恒温加热搅拌30-40min，得到均一稳定的溶液；
3）向上述溶液中逐滴加入2.5-5wt%的茶树精油溶液，步骤2）所得溶液与茶树精油溶液的体积比为8-12:1，室温搅拌后，以2-3滴/s的速率逐滴添加1-2mg/mLTPP溶液，搅拌，得到白色乳状液，即茶树精油壳聚糖微胶囊悬液；
4）将所得茶树精油壳聚糖微胶囊悬液低温超速离心后，下层沉淀用0.8-1.0wt%的生理盐水悬浮，以2-4wt%的甘露醇为冻干保护剂冷冻干燥后保存，获得茶树精油壳聚糖微胶囊；
5）将步骤4）所得茶树精油壳聚糖微胶囊与生石灰在机械力作用下进行物理混合，质量比为茶树精油壳聚糖微胶囊:生石灰=1:（2-2.5），获得生石灰包裹的茶树精油壳聚糖微胶囊；
6）将步骤5）所得产物置于聚丙烯无纺布袋中，热封封口；
7）选取自产地采集的新鲜、色泽饱满、无虫蛀、无病斑的桑叶和桑枝，分别对其表面进行洁净处理；
8）将洁净处理后的桑叶和桑枝装入贮存袋中，加入步骤6）所得聚丙烯无纺布袋，然后利用真空封口机对贮存袋进行真空封口处理。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）中，搅拌时间为4-6h，所述微孔过滤膜的孔径为0.4-0.5μm。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）中，调节pH的试剂为0.8-1.2mol/L的NaOH溶液，超声时间为10-20min。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）中，加入茶树精油溶液后搅拌10-15min，加入TP...

【专利技术属性】
技术研发人员：周旸，杨海亮，郑海玲，
申请(专利权)人：中国丝绸博物馆，
类型：发明
国别省市：浙江;33