一种桃休眠芽茎尖超低温离体保存方法技术

本发明专利技术公开了一种桃休眠芽茎尖超低温离体保存方法，包括以下步骤：预培养：取桃休眠芽茎尖，置于预培养基中进行预培养；玻璃化脱水处理：采用PVS3溶液进行80～120min的脱水处理；液氮冻存；解冻、卸载；恢复培养：卸载后的桃休眠芽茎尖置于恢复培养基中进行恢复培养；预培养基和恢复培养基中均添加一定量的活性炭和抗坏血酸。本发明专利技术以桃休眠芽茎尖为材料，减少了低温驯化步骤，简化了加载液处理、玻璃化液脱水处理步骤，改良了预培养基和恢复培养基，各步骤处理过程中对茎尖造成的损伤小，经保存后的茎尖再生率高，为桃种质资源长期稳定保存提供了一种新途径。

【技术实现步骤摘要】
一种桃休眠芽茎尖超低温离体保存方法
本专利技术属于植物种质低温保存
，具体涉及了一种利用玻璃化法的桃休眠芽茎尖超低温离体保存方法。
技术介绍
桃属于落叶木本多年生植物，原产于中国，然后传播到世界各地。食用桃是我国桃产业发展的主体，类型丰富，品种繁多，随着育种方法的发展，到2019年我国已经形成了上千种桃商品化品种，桃种质丰富的遗传资源也为今后的育种提供了更大的可能，因此对于桃种质资源进行合理的收集保存尤为重要。植物种质资源超低温保存是指在液氮(-196℃)的超低温条件下长期保存植物细胞、组织或器官并采取一定的方法使之回归正常生长的一整套生物技术，材料储存所需的空间小，维护成本低，并且低温环境能很大程度地减少污染的可能。植物材料冻存于液氮中时，只需要定期的补充液氮维持低温环境，就能够得以长期保存，因此超低温保存被认为是长期保存生物样品的理想方法。种子、茎尖、愈伤等材料都可用于植物低温保存中，其中茎尖分生组织分化程度低，具有较好的遗传稳定性，因此在实际操作中通常被选择为超低温保存材料。休眠芽为冬季体外材料，易获取并且在收集时就本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种桃休眠芽茎尖超低温离体保存方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1.预培养：取桃休眠芽茎尖，置于预培养基中进行预培养，所述预培养基为基础培养基+1.5～2.5gL

【技术特征摘要】
1.一种桃休眠芽茎尖超低温离体保存方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.预培养：取桃休眠芽茎尖，置于预培养基中进行预培养，所述预培养基为基础培养基+1.5～2.5gL-1活性炭+1.5～2.5gL-1抗坏血酸；
S2.玻璃化脱水处理：采用PVS3溶液对预培养后的桃休眠芽茎尖进行80～120min的脱水处理；
S3.液氮冻存：对脱水处理后的桃休眠芽茎尖进行液氮冻存处理；
S4.解冻、卸载：对液氮冻存后的桃休眠芽茎尖解冻、卸载处理；
S5.恢复培养：卸载后的桃休眠芽茎尖置于恢复培养基中进行恢复培养，所述恢复培养基为基础培养基+1.5～2.5gL-1活性炭+1.5～2.5gL-1抗坏血酸。


2.如权利要求1所述的桃休眠芽茎尖超低温离体保存方法，其特征在于，
步骤S1桃休眠芽茎尖经以下步骤获得：取带芽的桃休眠枝条，首先经酒精消毒后，再用次氯酸钠消毒，然后用无菌水洗涤后，剥取得到茎尖。


3.如权利要求2所述的桃休眠芽茎尖超低温离体保存方法，其特征在于，
所述酒精消毒时间为30s～1min，所述次氯酸钠浓度为8～10％，消毒时间为4～7min。


4.如权利要求1所述的桃休眠芽茎尖超低温离体保存方法，其特征在于，
步骤S...

【专利技术属性】
技术研发人员：方伟超，陈璋，王力荣，曹珂，王新卫，陈昌文，
申请(专利权)人：中国农业科学院郑州果树研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41