本发明专利技术涉及化妆品和生物医药技术领域，尤其涉及一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法。所述含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，是由如下重量份数的成分组成：脂肪干细胞外泌体悬液8‑20份、脂肪干细胞细胞内含物8‑20份、绿豆肽0.5‑2份、罗非鱼多肽0.5‑2份、蝎毒多肽0.5‑2份、甘油1‑6份、乙二醇0.1‑4份、黄原胶0.1‑4份、透明质酸0.1‑4份、苯氧乙醇1‑2份、乙基己基0.03‑0.05份、EDTA0.1‑0.2份、聚山梨醇酯0.3‑0.8份、氧化卵磷脂1‑2份、生育酚1‑5份、蒸馏水55.2‑94.92份。本发明专利技术提供的抗皱精华液含有脂肪干细胞提取物，经效用测评实验证实其对肌肤抗皱均有一定的实际功效。使用抗皱精华液后，志愿者皮肤弹性和皱纹深度的改善情况均优于对比例和现市售抗皱产品，表现出明显的协同增效的抗皱效果。
【技术实现步骤摘要】
一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法
本专利技术涉及化妆品和生物医药
，尤其涉及一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法。
技术介绍
衰老是不可逃避的现实。其原因主要有光化学损伤及老龄性改变等两方面的原因。日常生活中慢性的阳光照射使皮肤弹力纤维异常排列方式堆积；胶原纤维数量下降，剩余的纤维逐无序顺序的排列；异常的真皮与表皮间形成境界带或称边缘带等改变。这些变化引发细小的皱纹、皮肤松弛、色素沉着、皮肤恶性肿瘤等问题。另一方面，随着年龄的增大，皮肤也发生着变化。真皮层变薄；成纤维细胞、肥大细胞、弹力纤维和血管等的减少。皮下的肌肉收缩产生的动力引起皮肤的皱纹，面部脂肪的减少松弛，重力引起较深的皱纹。脂肪干细胞(Adipose-derivedstemcells，ADSCs)是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞，具有易获取、来源充足、免疫排斥性低等特点。研究发现，脂肪干细胞主要是通过旁分泌而发挥修复作用的，其分泌的主要物质之一为外泌体。脂肪干细胞外泌体是一种直径介于50～150nm的亚细胞双层膜囊泡，其形成于内涵体小室，在与细胞质膜融合过程中释放到细胞外环境参与细胞间信息交流。脂肪干细胞外泌体不仅为皮肤修复提供了丰富的细胞来源，脂肪干细胞外泌体也被证实是促进创面愈合的重要物质之一。脂肪干细胞外泌体可以被成纤维细胞摄取，促进其迁移、增殖；并通过促进Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原合并，可以增加神经-钙黏素，增殖细胞核抗原和细胞周期蛋白D1的基因表达，以加速皮肤的修复和再生。脂肪干细胞外泌体还能通过调节成纤维细胞的分化程度来减轻皮肤瘢痕的形成。近年国内学者研究发现，脂肪干细胞外泌体在促进人成纤维细胞增值迁移及胶原沉积的过程中起到了至关重要的作用。现有分离的脂肪干细胞外泌体纯度不高、脂肪干细胞外泌体体外培养分泌量少的问题，脂肪干细胞外泌体加工价格高昂，极大地限制了脂肪干细胞外泌体在美容行业的应用。随着现在生活水平的提高，人们尤其是女性对于自己的外在形象也越来越重视，所以能够抗皱纹皮肤的美容化妆品，是目前人们所期望的。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的目的是提供一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案。一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，是由如下重量份数的成分组成：脂肪干细胞外泌体悬液8-20份、脂肪干细胞细胞内含物8-20份、绿豆肽0.5-2份、罗非鱼多肽0.5-2份、蝎毒多肽0.5-2份、甘油1-6份、乙二醇0.1-4份、黄原胶0.1-4份、透明质酸0.1-4份、苯氧乙醇1-2份、乙基己基0.03-0.05份、EDTA0.1-0.2份、聚山梨醇酯0.3-0.8份、氧化卵磷脂1-2份、生育酚1-5份、蒸馏水55.2-94.92份。进一步地，所述含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，是由如下重量份数的成分组成：脂肪干细胞外泌体悬液8份、脂肪干细胞细胞内含物8份、绿豆肽0.5份、罗非鱼多肽0.5份、蝎毒多肽0.5份、甘油1.5份、乙二醇1.5份、黄原胶0.25份、透明质酸0.15份、苯氧乙醇1份、乙基己基0.03份、EDTA0.1份、聚山梨醇酯0.3份、氧化卵磷脂1份、生育酚0.03份、蒸馏水75.67份。所述脂肪干细胞外泌体悬液中每毫升溶液含有20mg蛋白质。所述脂肪干细胞细胞内含物中每毫升溶液含有20mg蛋白质。所述脂肪干细胞外泌体悬液的制备方法为生理盐水冲洗脂肪组织，重复2-3次，去除血渍；加入与脂肪组织等体积的酶液，37℃消化30-40min，消化后的储液瓶内加入2m培养基；将消化后的组织液100目筛网过滤，收集消化液至离心管中，离心；离心后去除上清液，重悬离心后的细胞沉淀；按照50000个/CM2的细胞密度，接种于T75培养瓶，培养瓶中添加15mL培养基，移入5％CO2，37℃培养箱中培养；24h后换液，每隔4天左右进行一次換液，细胞融合度达到70％～80％时，即可进行传代或冻存；在4℃下，首先300×g离心10min，吸取上清液，然后2000Xg离心10min；吸取上清液后，10000×g高速离心30min，吸取上清液，14000g超速离心90min；除去上清液，所获得的沉淀即为外泌体，用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬后，140000×g再次离心90min，生理盐水重悬沉淀，冻存于-80℃备用，使用时直接放于冰上解冻即可添加至精华液中。所述脂肪干细胞细胞内含物的制备方法为生理盐水冲洗脂肪组织，重复2-3次，去除血渍；加入与脂肪组织等体积的酶液，37℃消化30-40min，消化后的储液瓶内加入2m培养基；将消化后的组织液100目筛网过滤，收集消化液至离心管中，离心；离心后去除上清液，重悬离心后的细胞沉淀；按照50000个/CM2的细胞密度，接种于T75培养瓶，培养瓶中添加15mL培养基，移入5％CO2，37℃培养箱中培养；24h后换液，每隔4天左右进行一次換液，细胞融合度达到70％～80％时，即可进行传代或冻存；使用T75培养瓶培养细胞融合至80-90％，弃去培养基，生理盐水清洗2-3次，每次12ml，每瓶加入3ml不含动物源胰酶替代物消化3min，加入1ml不含动物源血清替代物终止消化，用10ml培养基重悬瓶内细胞，转移至50ml离心管内，1000rpm离心10mim，离心后用1ml生理盐水重悬细胞，使用超声破碎仪将细胞破碎，是细胞内含物溶解到生理盐水中，1000rpm离心10min，弃去沉淀中多余的细胞碎片，用孔径为22μm筛网过滤上清液，弃去多余杂质，保留上清液中的有效成分。所述含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤。步骤1、按重量份数称取配方成分。步骤2、将聚山梨醇酯、氧化卵磷脂、生育酚置于无菌容器中，边搅拌边加热，得到混合物Ⅰ。步骤3、甘油、乙二醇、黄原胶、透明质酸、EDTA、蒸馏水，置于乳化锅中，边搅拌边加热，保温一段时间，得到混合物Ⅱ。步骤4、将步骤2制得的混合物Ⅰ和步骤3制得的混合物Ⅱ混合后，在保温的条件下搅拌均匀，得到混合物Ⅲ。步骤5、将步骤4制得的混合物Ⅲ冷却降温，加入苯氧乙醇、乙基己基、脂肪干细胞外泌体悬液、脂肪干细胞细胞内含物、绿豆肽、罗非鱼多肽、蝎毒多肽继续搅拌20-30min，冷却降温，所得混合物为精华液。进一步地，步骤2中所述加热温度是75℃。进一步地，步骤3中所述加热温度为95-100℃，所述保温时间为30-60min。进一步地，步骤4所述保温温度为95-100℃。进一步地，步骤5中所述将步骤4制得的混合物Ⅲ冷却降温的温度为30-40℃。与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下。本专利技术提供的抗皱精华液含有脂肪干细胞提取物，经效用测评实验证实其对肌肤抗皱均有一定的实际功效。使用本专利技术提供的抗皱精华液后，志愿者皮肤弹性和皱纹深度的改善情况均优于对比例和现市售抗皱产品，表现出明显的协同增效的抗皱效果。本专利技术提供的抗皱精华液含有绿豆肽、罗非鱼多肽、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，是由如下重量份数的成分组成：脂肪干细胞外泌体悬液8-20份、脂肪干细胞细胞内含物8-20份、绿豆肽0.5-2份、罗非鱼多肽0.5-2份、蝎毒多肽0.5-2份、甘油1-6份、乙二醇0.1-4份、黄原胶0.1-4份、透明质酸0.1-4份、苯氧乙醇1-2份、乙基己基0.03-0.05份、EDTA0.1-0.2份、聚山梨醇酯0.3-0.8份、氧化卵磷脂1-2份、生育酚1-5份、蒸馏水55.2-94.92份。/n
【技术特征摘要】
1.一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，是由如下重量份数的成分组成：脂肪干细胞外泌体悬液8-20份、脂肪干细胞细胞内含物8-20份、绿豆肽0.5-2份、罗非鱼多肽0.5-2份、蝎毒多肽0.5-2份、甘油1-6份、乙二醇0.1-4份、黄原胶0.1-4份、透明质酸0.1-4份、苯氧乙醇1-2份、乙基己基0.03-0.05份、EDTA0.1-0.2份、聚山梨醇酯0.3-0.8份、氧化卵磷脂1-2份、生育酚1-5份、蒸馏水55.2-94.92份。
2.如权利要求1所述的一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，是由如下重量份数的成分组成：脂肪干细胞外泌体悬液8份、脂肪干细胞细胞内含物8份、绿豆肽0.5份、罗非鱼多肽0.5份、蝎毒多肽0.5份、甘油1.5份、乙二醇1.5份、黄原胶0.25份、透明质酸0.15份、苯氧乙醇1份、乙基己基0.03份、EDTA0.1份、聚山梨醇酯0.3份、氧化卵磷脂1份、生育酚0.03份、蒸馏水75.67份。
3.如权利要求1所述一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，所述脂肪干细胞外泌体悬液中每毫升溶液含有20mg蛋白质。
4.如权利要求1所述一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，所述脂肪干细胞细胞内含物中每毫升溶液含有20mg蛋白质。
5.如权利要求1所述一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，所述脂肪干细胞外泌体悬液的制备方法为生理盐水冲洗脂肪组织，重复2-3次，去除血渍；加入与脂肪组织等体积的酶液，37℃消化30-40min，消化后的储液瓶内加入2m培养基；将消化后的组织液100目筛网过滤，收集消化液至离心管中，离心；离心后去除上清液，重悬离心后的细胞沉淀；按照50000个/CM2的细胞密度，接种于T75培养瓶，培养瓶中添加15mL培养基，移入5%CO2，37℃培养箱中培养；24h后换液，每隔4天左右进行一次換液，细胞融合度达到70％～80％时，即可进行传代或冻存；在4℃下，首先300×g离心10min，吸取上清液，然后2000Xg离心10min；吸取上清液后，10000×g高速离心30min，吸取上清液，14000g超速离心90min；除去上清液，所获得的沉淀即为外泌体，用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬后，140000×g再次离心90min，生理盐水重悬沉淀，冻存于-80℃备用，使用时直接放于冰上解冻即可添加至精华液中。
6.如权利要求1所述一种含脂肪干细胞提取物的抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：邱宇，董洪选，高健，崔新宇，
申请(专利权)人：辽宁盛京干细胞科技有限公司，辽宁启福干细胞生物科技有限责任公司，北京启福生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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