用抗胚胎血红蛋白抗体鉴别胎儿细胞的方法技术

一种在血样中鉴别胎儿红血球细胞或有核红血球细胞的方法，该方法包括： ａ）将该血样与一种指示血红蛋白中胚胎球蛋白部分的一种抗体或其抗体碎片接触，其中，抗体或碎片将与胎儿细胞结合；和 ｂ）鉴别与抗体或碎片结合的细胞为胎儿红血球细胞或有核红血球细胞。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种从血样中分离和鉴别胎儿细胞的方法。更具体地说，是涉及在孕妇的血样中，从母亲的细胞中分离和鉴别胎儿成核红血球细胞或有核红血球细胞。
技术介绍
胎儿的组织，特别是胎儿的DNA和染色体通常用来做产前诊断及要求对胎儿的基因组进行精确估价时的其它医疗程序。目前，用羊膜穿刺术、绒毛膜取样(CVS)、胎儿镜或脐带穿刺术可以得到胎儿的组织。上述方法在Thompson和Thompson著的Genetics in Medicine,5th Edition,W.B.Saunders Co.,Philadelphia,1991中进行了描述。在羊膜穿刺术中，含胎儿细胞的羊水样品用针管和注射器穿过母亲的腹部取出。羊膜穿刺术有其固有的危险性。主要的危险是会引起流产，据估计，每200个用羊膜穿刺术的人中会有1个人流产。其他危险包括母亲感染及对胎儿肉体的损伤。在CVS中，通过贯穿子宫和贯穿腹部自绒毛膜区域吸出营养细胞组织，用这种方法造成胎儿死亡的几率高达1％。脐带穿刺术或经脐带血取样提供了一种在超声波引导下直接从脐带取出血样的方法。上述每一种进入的方法均同时给母亲和胎儿带来危险。因此，理想的是专利技术一种不进入的方法得到胎儿的组织或胎儿的DNA。或者，为便于保护和在临床实验室中进行诊断，需要专利技术一种快速而且可靠的，从母亲的组织中分离和富集胎儿组织的方法。最近，发现了一种在母亲的末梢循环中鉴别胎儿细胞，并储存这些细胞用来作遗传分析的优选方法。从母亲的血液中鉴别或分离胎儿细胞有赖于从较多的大量的母亲细胞中区别出很少的胎儿细胞。虽然各种胎儿细胞，如胎儿淋巴细胞和滋养层作为目标细胞已经用于胎儿DNA的鉴别，但是，更多的努力则集中于对胎儿的成核红细胞(nRBC)，也就是已知的成核红血球细胞的鉴别。参见Cheuh和Golbus,“The search for Fetal Cells in the MaternalCirculation”,J.Perinatol.Med.,19:411(1991)；Simpson等人,“NoninvasiveScreening for Prenatal Genetic Diagnosis”,Bull.WHO,73:799(1995)；及Cheuh和Golbus,“Prenatal Diagnosis Using Fetal Cells from MaternalCirculation”,West.J.Med.,159(3):308(1993)。一般认为，胎儿的红细胞作为经胎盘出血而穿过胎盘。因为胎儿拥有大量成核红血球细胞，这些成核红血球细胞在成人的血液中很少被发现，因此，成核现象这种区别在从母亲的细胞中分离和鉴别胎儿细胞的过程中是非常有用的。细胞表面抗原抗体，特别是成核红细胞抗体，如铁蛋白受体，已经被用于鉴别和富集这些胎儿细胞。请参见Bianchi等人“Isolation of FetalDNA from Nucleated Erythrocytes in Maternal Blood”,Proc.Natl.Acad.Sci.,87:3279(1990)及Bianchi等人PCT国际申请号为PCT/US90/06623的国际申请(WO 91/07660)，其中描述了用与一种在胎儿细胞表面上的抗原相结合的抗体富集末梢血样中的胎儿成核红血球细胞方法。Bresser等人在PCT国际申请号为PCT/US94/08342(WO 95/03431)的国际申请中描述了一种用胎儿血红蛋白抗体和mRNA探针富集母亲血液中胎儿细胞的方法。胎儿血红蛋白的存在也被Kleihauer-Betke反应所证明，该反应用酸淘析特性从成人血红蛋白中区分出胎儿血红蛋白。请参见Kleihauer等人“Demonstration von fetalem hamoglobin in denerythrocyten eines blutausstrichs”,Klin.Woschenschr,35:637(1957)及Saunders等人“Enrichment of fetal cells from maternal blood for geneticanalysis”,American Journal of Human Genetics,57:287(1995)。对胎儿基因组的遗传分析已经通过在原位将染色体或基因特异性的DNA或RNA探针杂交的萤光法而完成，某些时候，通过自动读数和放大目标胎儿基因和DNA的方法完成。参见Lichter等人“Rapid detectionof human chromosome 21 aberration analysis using fluorescence in situhybridization”,Proc.Natl.Acad.Sci.,85:9664(1988)；O＇kelley等人“Instrumentaion for the genetic evaluation of fetal cells from maternalblood”,Am.J.Hum.Genet.,57:286(1995)及Lo等人“Prenatal SexDetermination,by DNA amplification from maternal peripheral blood”,Lancet,2:1363(1989)。本专利技术概述本专利技术提供了一种血样中胎儿红血球细胞，优选成核或有核红血球细胞的鉴别方法，该方法包括a)将血样与一种抗体或抗体碎片接触来指示血红蛋白中的胚胎球蛋白部分，其中，所述抗体或碎片将与胎儿细胞结合，并且b)将与抗体或碎片结合的细胞鉴别为胎儿成核红血球细胞或有核红血球细胞(血样一般取自妊娠期母亲的末梢循环血液)。各种抗胚胎血红蛋白抗体或其抗体碎片可以用于该方法，特别是那些指示血红蛋白中的胚胎ε球蛋白链和/或胚胎ζ球蛋白链的抗体或其抗体碎片。此外，第二种胎儿或成熟细胞标记物可以用来进一步鉴别或分离所期望的胎儿细胞。一旦被选定的胎儿细胞被鉴别出来，一种胎儿的核酸或蛋白质就可以在用于遗传分析的细胞中被放大或检测。本专利技术还提供了各种与上述方法协同使用的工具包。这些工具包包括一种直接或间接经过标记的抗胚胎血红细胞抗休及其使用说明。在这些工具包中还任意地包括用于提高胎儿细胞浓度、破坏红细胞的溶血试剂、消散药剂和核酸探针的密度梯度介质。具体实施例的详细描述除非另有定义，这里所用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员所理解的术语相同的含义。虽然任何与这里描述的方法和材料相近或等同的方法和材料也可以用来完成和试验本专利技术，但本专利技术还是描述了优选的方法和材料。为了达到本专利技术的目的，定义了下述术语。这里所用的“红血球细胞”或“血红细胞”或“RBC”包括成人和胎儿的血红细胞，它可以是成核的或非成核的。成核红血球细胞是优选的。这里所用的“有核红血球细胞”指一种成核细胞的前身物，从该前身物，一个网状红血球细胞发展成为一个红血球细胞。“正常红细胞”指一种成核血红细胞，它是一种血红细胞的中间前体。这里所用的“胚胎”指怀孕经过二个月形成的一个或多个细胞。典型情况下，从胚胎阶段到出生前的阶段命名为胎儿。在母亲血本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：米切尔·戈尔巴斯，
申请(专利权)人：应用成像公司，
类型：发明
国别省市：