一种用于制备抑制结肠癌细胞增殖药物的基因抑制剂制造技术

本发明专利技术提供了一种用于制备抑制结肠癌细胞增殖药物的基因抑制剂，属于生物医学技术领域。本发明专利技术证明了LINC02360基因抑制剂能够抑制结肠癌细胞的增殖速率，并且能够调控增殖相关蛋白Cyclin‑D1和P21的表达，因此，其可用于制备抑制结肠癌细胞增殖的药物。

【技术实现步骤摘要】
一种用于制备抑制结肠癌细胞增殖药物的基因抑制剂
本专利技术属于生物医学
，尤其涉及一种用于制备抑制结肠癌细胞增殖药物的基因抑制剂。
技术介绍
结肠癌是胃肠道中一种常见恶性肿瘤。近年来，随着我们饮食结构、生活习惯的变化，我国结肠癌的发病率和死亡率保持上升趋势。尽管，目前结肠癌的手术治疗、辅助治疗、靶向治疗等治疗手段取得了较大的进展，但是结肠癌晚期患者的预后依然不是十分乐观。目前，依然缺乏特效的治疗药物。非编码RNA是近年来发现的一类在生物体内普遍存在并在生命活动中发挥重要功能的RNA分子，与mRNA、tRNA以及rRNA不同，其并不参与编码蛋白质。长链非编码RNA是一类长度大于200个核苷酸的RNA分子，其不具有编码蛋白质的潜力。现有的研究发现，长链非编码RNA在X染色体沉默以及基因组印迹等多种调控过程中发挥着重要作用。研究表明，lncRNA在细胞生理和病理活动中发挥着重要的作用，并且参与肿瘤等疾病的发生和发展过程。因此，进一步探究长链非编码在结肠癌中的分子基础，发现新的与结肠癌相关的长链非编码RNA对于寻找新的治疗靶点开发新的治疗药物具有重要的意义。目前，长链非编码RNALINC02360在结肠癌及其他恶性肿瘤中的作用还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够有效抑制结直肠癌细胞增殖的基因抑制剂。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术提供了一种长链非编码RNALINC02360基因抑制剂在制备抑制结肠癌细胞增殖药物中的用途。优选地，所述基因抑制剂可以抑制结肠癌细胞中的LINC02360基因的表达。优选地，所述基因抑制剂为siRNA或shRNA中的一种。优选地，所述基因抑制剂为siRNA。优选地，所述siRNA的正义链为GAAUGAUGUGAAUGGUUAACC；所述siRNA的反义链为UUAACCAUUCACAUCAUUCAG。此外，本专利技术提供了一种长链非编码RNALINC02360，其特征在于，所述LINC02360在结肠癌细胞中高表达；抑制结肠癌细胞中的LINC02360能够抑制结肠癌细胞增殖。本专利技术的有益效果在于：本专利技术首次通过实验证明，长链非编码RNALINC02360的siRNA能够通过调控结肠癌细胞增殖相关蛋白来有效的抑制结肠癌细胞的增殖，从而为进一步开发抑制结肠癌细胞增殖和治疗结肠癌的药物提供了可能。附图说明图1LINC02360在正常结肠上皮细胞系FHC和结肠癌细胞SW480、SW620、HCT116和HT29中的表达差异图2LINC02360siRNA的抑制效果检测图3CCK-8检测LINC02360siRNA对于结肠癌细胞增殖的影响图4EDU染色检测LINC02360siRNA对于结肠癌细胞增殖的影响图5LINC02360siRNA对于增殖相关蛋白cyclin-D1和P21的影响。具体实施方式下面结合具体的实施例对本专利技术进行进一步的说明，需要说明的是，本专利技术实施例仅用于说明本专利技术，而不用于限定本专利技术。实施例1检测LINC02360在正常结肠上皮细胞系FHC和结肠癌细胞SW480、SW620、HCT116和HT29中的表达差异。1.提取RNA（1）将FHC细胞、SW480、SW620、HCT116和HT29接种于6孔板中，培养48h后，使用PBS清洗细胞2次，之后每孔加入1mLTrizol，反复吹打细胞使Trizol和细胞充分混匀，将混合液转移至EP管中，室温放置5min；（2）4℃，12000r/min，离心5分钟，将上清转移至新的无RNase的EP管中，每个EP管中加入200μL预冷的氯仿，颠倒混匀后，室温放置10min；（3）4℃，12000r/min，离心5min，将上清转移至新的无RNA酶EP管中，加入等体积的预冷异丙醇，混匀后，4℃静置10min；（4）4℃，12000rpm/min，离心20分钟，将上层500μL无色水相转移至新的无RNaseEP管中；（5）加入500μL预冷的异丙醇，充分混匀，冰上放置1小时；（6）4℃，12000rpm/min，离心20分钟，去除上清，保留RNA沉淀，加入1mlDEPC水配置的乙醇水溶液，洗涤沉淀；（7）4℃，12000rpm/min，离心5min，去除上清，并且尽可能去除残留在管壁上的液体，室温干燥RNA，至沉淀半透明，加入40μLDEPC水。2.检测LINC02360基因表达（1）逆转录反应反应条件：25℃10min；42℃30min；85℃5min。（2）荧光定量PCR反应反应条件：95℃5min；95℃15s，60℃40s，40个循环。（3）引物序列LINC02360ForwardPrimer5'-GGTAGAGGTGAAGCTTCGCA-3'（SEQIDNO.1）ReversePrimer5'-ACACCACGAGACAGTTTAGGA-3'（SEQIDNO.2）GAPDHForwardPrimer5'-TTCACCACCATGGAGAAGGC-3'（SEQIDNO.3）ReversePrimer5'-CCACCTGGTGCTCAGTGTAG-3'（SEQIDNO.4）采用2-△△Ct方法处理实验数据，结果如图1所示。实施例2检测si-LINC02360基因抑制剂对于LINC02360的抑制效果si-LINC02360和ControlsiRNA序列如下所述：ControlsiRNA5'-UUCUCCGAACGUGUCACGU-3'（SEQIDNO.5）5'-ACGUGACACGUUCGGAGAA-3'（SEQIDNO.6）si-LINC023605'-GAAUGAUGUGAAUGGUUAACC-3'（SEQIDNO.7）5'-UUAACCAUUCACAUCAUUCAG-3'（SEQIDNO.8）（1）将SW480细胞接种于细胞板上，参照lip2000说明书进行转染，分为对照组，controlsiRNA组，si-LINC02360组，每组设置3个重复；（2）转染6小时去除转染培养基，更换为正常培养基，培养48h后，提取RNA，逆转录，荧光定量PCR，具体实验步骤参照实施例1。实验结果如图1所示，从图中可以看出，controlsiRNA组对于SW480细胞中的LINC02360的表达无显著影响，si-LINC02360可以显著降低SW480细胞中LINC02360的表达量，抑制效果为82%。实施例3CCK-8检测LINC02360对于结肠癌细胞增殖的影响（1）将分别转染controlsiRNA和si-LINC02360的SW480细胞接种于96本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.长链非编码RNA LINC02360基因抑制剂在制备抑制结肠癌细胞增殖药物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.长链非编码RNALINC02360基因抑制剂在制备抑制结肠癌细胞增殖药物中的用途。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述基因抑制剂可以抑制结肠癌细胞中的LINC02360基因的表达。


3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述基因抑制剂为siRNA或shRNA中的一种。


4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐正晓，
申请(专利权)人：济南帕斯维德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37