本发明专利技术公开了预防或治疗多发性肌炎/皮肌炎药物或诊断试剂或试剂盒中的应用。本发明专利技术还公开了lncRNA AK124826慢病毒过表达载体在制备预防或治疗多发性肌炎/皮肌炎药物或诊断试剂或试剂盒中的应用。本发明专利技术还公开了lncRNA AK124826的RNAi干扰载体在制备预防或治疗多发性肌炎/皮肌炎药物或诊断试剂或试剂盒中的应用。
【技术实现步骤摘要】
lncRNAAK124826及其相关分子在诊断多发性肌炎/皮肌炎中的应用
本专利技术属于生物技术和治疗领域，具体涉及lncRNAAK124826及其相关分子在诊断多发性肌炎/皮肌炎中的应用。
技术介绍
多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)是较常见的自身免疫性疾病，发病过程中CD4+T细胞发挥重要作用，Th17/Treg细胞数量和功能失衡，但具体发病机制尚不完全清楚。多发性肌炎和皮肌炎(polymyositisanddermatomyositis，PM/DM)是一种典型的自身免疫性疾病，其主要表现为肌肉组织淋巴细胞浸润、累及横纹肌，血清特征性抗Jo-1抗体阳性，近年来PM/DM发病率逐年升高，目前尚无有效根治疗法。PM/DM的发病机理复杂，涉及遗传、感染、免疫功能及microRNA异常表达等众多因素，近年来，不断深入研究该病的发病机制，目前认为在+T细胞异常活化，Th17细胞因子反应异常，但具体机理尚未完全阐明。PM/DM患者中存在Th17表达异常。Th17细胞是新发现的CD4+T细胞的亚型。TournadreA等研究发现，PM/DM患者肌肉组织中CD4+T细胞阳。TournadreA等研究发现，PM/DM患者肌肉组织中CD4+T细胞阳性，IL-17表达阳性，Th17细胞数量显著增加。白细胞介素-27(IL-27)在调控Th17细胞反应中起重要作用。IL-27是一种新的IL-6/IL-12家族细胞因子，主要作用于各种免疫细胞而发挥广泛调节作用，在自身免疫性疾病中扮演重要角色。IL-27可以通过下调IL-6和TGF-β的表达抑制Th17细胞的分化，同时，IL-27还可以通过抑制STAT1、STAT3的磷酸化，调控Th17细胞反应。研究发现，多发性硬化急性期患者外周血IL-27水平显著降低，IL-17水平和Th17细胞数量显著增加，IL-27和IL-17的表达呈显著负相关，初步提示IL-27可能通过抑制IL-17的分泌，参与多发性硬化的发病。自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型研究中发现，IL-27受体EBI3基因敲除，小鼠炎症反应加重，炎症组织中Th17细胞数量增多。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术研究发现，PM/DM患者外周血CD4+T细胞中Th17细胞百分率显著增多，初步结果提示PM/DM患者存在Th17细胞表达失调，其机制尚不清楚。本专利技术研究发现，PM/DM患者外周血IL-27表达水平较健康对照者显著降低，但PM/DM患者中IL-27的表达如何被调节，及其与Th17/Treg细胞平衡关系，尚不清楚。本专利技术研究发现，lncRNAAK124826在PM/DM患者CD4+T细胞中高表达，IL-27在PM/DM患者中低表达，芯片网络调控图预测IL-27是lncRNAAK124826的作用靶点。因此，我们提出lncRNAAK124826通过靶基因IL-27影响Th17/Treg平衡，参与PM/DM的发病。首先观察lncRNAAK124826在PM/DM患者中的表达特点；其次，采用慢病毒过表达和干扰技术研究lncRNAAK124826对PM/DM患者Th17/Treg细胞分化的作用机制；第三，验证IL-27是lncRNAAK124826的功能靶点。本专利技术为诊断和治疗PM/DM提供新的思路。本专利技术以PM/DM患者为疾病组；运动神经元病，重症肌无力，进行性肌肉营养不良，风湿性多肌痛等患者为疾病对照组；肝肾功能指标正常的健康体检者为正常对照组。分离上述研究对象的外周血CD4+T细胞及血清标本。本专利技术发现PM/DM患者外周血IL-27表达水平较健康对照者显著降低，在明确PM/DM的自身免疫调节机制，找出新的诊断和免疫治疗靶点，以及为研发新的治疗手段提供理论依据。本
技术实现思路
还包括荧光原位杂交(FISH)检测各研究组CD4+T细胞lncRNAAK124826和IL-17共表达。本
技术实现思路
还包括分析各研究组CD4+T细胞内Th17/Treg细胞的表达、lncRNAAK124826、IL-27基因和蛋白的表达差异。本
技术实现思路
还包括检测各研究组血清中IL-17、TGF-β和肌酸激酶(creatinekinase，CK)的表达情况。本
技术实现思路
还包括综合上述指标及临床资料，分析lncRNAAK124826与疾病的关系，以验证lncRNAAK124826是否参与PM/DM发病。技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术提供了lncRNAAK124826在制备预防或治疗多发性肌炎/皮肌炎药物或诊断试剂或试剂盒中的应用。本专利技术还提供了lncRNAAK124826慢病毒过表达载体在制备预防或治疗多发性肌炎/皮肌炎药物或诊断试剂或试剂盒中的应用。本专利技术还提供了lncRNAAK124826的RNAi干扰载体在制备预防或治疗多发性肌炎/皮肌炎药物或诊断试剂或试剂盒中的应用。其中，所述lncRNAAK124826的靶点为IL-27基因。其中，所述lncRNAAK124826调控IL-27、TGF-β和/或肌酸激酶的表达水平。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优点是：1、本专利技术研究发现PM/DM患者外周血中TGF-β和CK表达显著高于健康对照组升高，PM/DM患者外周血CD4+T细胞中Th17细胞百分比是(3.24土1.47)％，显著高于健康对照组的(0.82±0.24)％，PM/DM患者外周血CD4+T细胞Treg细胞百分比是(3.27土0.45)％，显著低于对照组的(6.78±0.92)％；2、lncRNAAK124826慢病毒过表达载体、RNAi干扰载体转入PM/DM患者外周血初始CD4+CD45RA+T细胞，免疫荧光表明转染效率达到80％，荧光定量PCR检测过表达和干扰效果，结果表明表达分别上升和下调了5.6、2.2倍。在CD4+CD45RA+T细胞中过表达lncRNAAK124826能够显著活化JAK-STAT和MAPK/P38信号通路，降低lncRNAAK124826的表达能够显著抑制上述信号通路，lncRNAAK124826过表达组Th17细胞比例显著增加，同时Treg细胞显著减少；3、lncRNAAK124826可显著降低野生型IL-273’UTR的报告基因活性，表达下调30％左右，RNA免疫共沉淀实验验证IL-27为lncRNAAK124826的功能靶点。干扰lncRNAAK124826后，Th17细胞明显减少(1.00±0.03)％，Treg细胞显著增加(6.13±0.64)％(P＜0.01)；然而，将lncRNAAK124826和IL27同时干扰掉后，发现Th17细胞明显增加(3.12±0.19)％，Treg细胞显著减少(3.92±0.25)％(P＜0.01)。附图说明图1健康组和PM/DM患者血清中IL-27、TGF-β和肌酸激酶的表达水平；图2lncRNA芯片差异聚类图；图3为健康组和PM/DM患者血清中lncRNAAK124826、IL-17和FoxP3基因的表达情况；...
【技术保护点】
1.lncRNA AK124826在制备预防或治疗多发性肌炎/皮肌炎药物或诊断试剂或试剂盒中的应用。/n
【技术特征摘要】
1.lncRNAAK124826在制备预防或治疗多发性肌炎/皮肌炎药物或诊断试剂或试剂盒中的应用。
2.lncRNAAK124826慢病毒过表达载体在制备预防或治疗多发性肌炎/皮肌炎药物或诊断试剂或试剂盒中的应用。
3.lncRNAAK124826的RNAi干扰载体在制备预防或治疗多发性肌...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋廷旺，薛建中，韩志君，龚燕萍，高明珠，
申请(专利权)人：常熟市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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