一种ＭＣＶ分析方法，它包括如下步骤：血样采集后立即用抗凝结剂处理；用一种含有预定渗透浓度的预定表面活性剂的试剂稀释采集后经抗凝结剂处理并且经过至少７２小时时间的血样，以强制血样中的红血球发生形态变化；并使用颗粒分析仪分析该血样。该试剂包括一种非离子表面活性剂，一种用来调节渗透压的盐，和水，该试剂的渗透压（π）大约是１５０－４００ｍＯｓｍ／ｋｇ，ｐＨ值是６．０－８．５。表面活性剂的浓度是０．０００５％到０．５％，并具有１０－２０的亲水／亲油平衡（ＨＬＢ）。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析血样中的平均红细胞容积(MCV)，特别是涉及一种用颗粒分析仪在进行MCV分析的过程中使用的试剂和方法。现在，临床检查领域广泛使用了自动血液分析仪。作为医疗诊断过程中对病人作检查的装置，它们被设计为可对血液成分进行快速分析。这些装置能够进行全部血球数(CBC)的多种分析，包括诸如红血球(RBC)数、白血球(WBC)数、白血球分类、血红蛋白浓度(Hb)、血细胞比容(Ht)和血小板数(PLT)这些项目。MCV是从这些细胞分析值中计算得到重要项目中的一项。MCV可以由血细胞比容被红细胞数所除，就是Ht/RBC值而得到，血细胞比容就是一个单位容积的全血中红血球的百分含量。那么MCV就是单个红血球的平均容积，相应的其单位是fL、飞升、或10-15L。上述血液分析仪采用流式血细胞计数器。在流式血细胞计数器中，稀释后的血液以高速通过一个非常细小的喷嘴导入流动槽，并且，喷嘴导出的液流被包覆液体(层流)的圆柱形流所包围。通过使该层流变窄，可以由此将样品流聚集至如下程度，即该样品流基本上呈一个细胞接一个细胞的线性序列。从而这些样品流中细胞的通过被该层流控制，通过采用激光照射液流，用光学方法检测该细胞，以及通过测量电阻和电导率，用电学方法检测该细胞。为给上述的血液分析仪中使用的流式血细胞计数器分析制备全血样品，样品一般必须使用抗凝剂如EDTA盐处理，并用生理等渗溶液稀释。作为用来稀释整个血液的稀释剂，一般有如下溶液例如生理盐水、林格式溶液(Ringer’s solution)、洛克式溶液(Lock’s solution)和台罗德式溶液(Tyrode’s solution)。在前述血液分析器的分析过程中也可以使用上述稀释剂。然而通常，每台分析仪选用最佳稀释剂。在制备MCV分析的全血样品过程中，目前技术上存在的主要问题是实际的MCV会随血液采集后经历的时间而改变。临床诊断中MCV值是必要而又重要的，它应在血样采集后立即获得，也就是，该值应当与原始血液的MCV值相一致。实践中，作为CBC一部分的MCV值直到采集血样72小时后才会被测量。而此时这样的血样再也不能产生适宜的MCV分析值了。血液采集后，样品中的RBC膨胀，使得经过采集后的经历时间所测得的MCV值渐渐大于原始RBC的平均容积。原始MCV才是诊断所需的真正测量。日本专利公告8-33388(1996)，日本专利公告7-82010(1995)和日本专利申请公开8-122327(1996)公开了各种含有非离子型表面活性剂的水溶液。然而，不管这些溶液中的哪一种用作流式血细胞计数器的包覆液，都需要在流动腔内加入非离子型表面活性剂以消除气泡。另外，日本专利公告1-33780(1989)公开了一种稀释剂，在其中加入一种非离子型表面活性剂以抵销防腐剂对红细胞的影响，最终目的是在所测的MCV中抑制由于防腐剂而产生的稀释后的变化。然而，日本专利公告1-33780没有公开在所测的MCV中抑制因为血样采集后的经历时间而产生的变化的方法。如果能找到一种在血液采集72小时后测得的血细胞比容和红细胞数与血样原始值一致的方法，这将是本领域中的重要进步。本专利技术使得采集后的血液经过一段时间后分析仍能产生一个与该样品原始值非常一致的MCV值，也就是与采集后立刻测量的MCV值相一致。根据本专利技术的试剂是一种血样的水稀释溶液，它包括在有限的浓度范围内加入少量的预定表面活性剂。用合适的物质将该试剂的渗透压调至预定范围。用于本专利技术的试剂是一种水溶液，它包括非离子型表面活性剂和用于将渗透压(π)调至大约150-400mOsm/Kg的一种盐或合适的物质。该试剂优选的渗透压(π)大约是230-350mOsm/Kg；特别优选的是大约260-320mOsm/Kg的渗透压(π)。本专利技术实施例中的非离子型表面活性剂的例子可以是下面任何一个。(1)R-O(CH2CH2O)nH(2)R-COO(CH2CH2O)nH(3)R-COO(CH2CH2O)nCO-R(4) (5) (6) -或- (7) 其中，R代表碳数12～24的烷基链、烯基链或炔基链，并且n、n1+n2+n3和n1+n2+n3+n4+n5+n6代表5-70的整数。在本专利技术的一个优选的实施例中，非离子型表面活性剂包括至少一个烷基链，一个烯基链和一个炔基链，分别有12-24个碳原子。该非离子型表面活性剂较好包括一个聚氧乙烯链，该链上有5-70摩尔加成数的氧乙烯。作为具体例子，下面所述的非离子型表面活性剂中的任何一种都可用于根据本专利技术的实施例中。a)吐温-80(加入20摩尔PEG的脱水山梨醇油酸酯)，Croda公司“Crillet 4”。b)Steareth-20(十八醇+PEG 20)，Croda公司“Volpo S-20”。c)PEG-60杏仁甘油酯(有60摩尔PEG的杏仁甘油单甘油酯和杏仁二甘油酯)，Croda公司“Crovol A-70”。d)PEG-23油酸(加入PEG23酯的油酸)，Croda公司“crodet O 23”。更优选的非离子型表面活性剂是Oleth-20(聚氧乙烯油醚)。这种表面活性剂含有一个聚氧乙烯油醚的混合物，其中每分子中氧乙烯单元的平均数大约是20。将CTFA Name作为上述提到物质的总称。应明确，在本专利技术的范围内，也可使用此处限定的非离子型表面活性剂的混合物。也应当明确，假如在其它方面符合此处给定的参量，在市场上买到的非离子型表面活性剂也适用于本专利技术。众所周知，市场上买到的非离子型表面活性剂不是化学纯材料。因此，在前述参数都可满足的条件下，根据本专利技术的试剂中采用相关非离子型结构所引入的伴生物和无关的材料，也在它们的范围之内。特别重要的是这些表面活性剂或混合物在盐溶液中是透明的。该非离子型表面活性剂必需在水中完全可溶，并在最小的0.1％的重量浓度产生透明溶液。根据渗透压和作为溶剂的盐溶液的成分能够合理确定试剂中含有的给定非离子型表面活性剂的浓度。然而，一般非离子型表面活性剂在约0.0005％～0.5％的低浓度范围内使用，优选的浓度范围是约0.001％～0.1％，最优选是约0.005％～0.05％的范围。根据本专利技术，在盐溶液中使用非离子型表面活性剂，以此来为血液分析稀释和稳定血样。该非离子型表面活性剂优选具有10-20的亲水/亲油平衡值。根据本专利技术试剂的PH值优选是6.0～8.5。本专利技术给出的试剂还包括一个用以稳定其PH值的缓冲溶液，一个用以调节试剂溶液渗透压的添加剂，一种防腐物质，或一种抗氧化剂。不特别限制合适的缓冲溶液；然而磷酸盐缓冲溶液，硼酸盐缓冲溶液，三(羟甲基)氨基甲烷盐酸(tris)缓冲溶液，咪唑缓冲溶液等都是优选的。不特别限定用于调整试剂PH值的合适物质，但例如，它们可以是盐酸或氢氧化钠。不特别限定用于调整渗透压的合适物质，例如，可以使用至少一种选自氯化钠或氯化钾的碱金属盐或碱土金属盐。或者，也可使用象蔗糖、葡萄糖等糖类或聚乙二醇。根据本专利技术的方法包括a)抗凝处理步骤，其中用抗凝剂处理血样；b)稀释步骤，其中用含有表面活性剂的试剂溶液稀释经抗凝剂处理的血样，确保样品中的红血球形态发生变化；c)分析步骤，其中，血样在取血后经过例如至少48小时的时间后接着稀释步骤用颗粒分析仪进行分析。本专利技术优选的一个方本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于ＭＣＶ分析的血样稀释剂，所述的试剂是水溶液，它包括：至少一种非离子表面活性剂；和一种用于将该水溶液渗透压调至大约１５０～４００ｍＯｓｍ／Ｋｇ的物质；其中选择所述非离子表面活性剂和用于调节渗透压的物质，以使所述的稀释剂能确 保采集后经过一段时间后的血样的ＭＣＶ测定值与血样采集后立即测定所得的ＭＣＶ值在诊断可接受的范围一致。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：B豪温，内桥欣也，浜口行雄，R马斯特，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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