均相荧光探针PCR结核杆菌检测方法技术

技术编号:2600514 阅读:215 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术根据结核杆菌(TB)基因序列,采用TB染色体插入序列IS986设计合成引物,用聚合酶链式反应(PCR)对TB特异性片段进行扩增,使用分子信标探针与扩增产物杂交,作为结果测定的方法,通过荧光计直接测量反应管的荧光强度,检测标本是否存在结核杆菌。(*该技术在2019年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种PCR结核杆菌的检测方法。聚合酶链式反应(PCR)是80年代后期发展起来的一种体外扩增DNA片段的技术,可以在数小时内获得数百万个特异DNA序列拷贝。从理论上讲,PCR结合电泳检测的灵敏度可达1个结核菌,但是临床标本中存在对扩增反应有抑制作用的因素,使PCR检测的灵敏度降低,另外由于PCR反应的高灵敏性,扩增产物的污染又容易产生假阳性,假阳性和假阴性造成PCR检测的灵敏度和特异性与理论上的差距较大。本专利技术的目的是采用核酸扩增反应结合探针杂交技术改善PCR检测的灵敏度和特异性。本专利技术根据结核杆菌(TB)基因序列,设计合成引物,用聚合酶链式反应(PCR)对TB特异性片段进行扩增,使用分子信标探针与扩增产物杂交,作为结果测定的方法,通过荧光计直接测量反应管的荧光强度,检测标本是否存在结核杆菌。分子信标探针是一种基于荧光能量转移现象设计的发夹型寡核苷酸探针,空间结构上呈茎环结构,环序列是与靶核酸互补的探针,茎序列由与靶序列无关的互补序列构成,茎的一端连上荧光分子,另一端连上淬灭分子,无靶序列时,分子信标的空间结构不变,荧光分子与淬灭分子非常接近,此时荧光被淬灭本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种均相荧光探针PCR结核杆菌检测方法,其特征采用PCR方法扩增结核杆菌(TB)基因序列,利用分子信标与扩增产物杂交,并且测量反应液的荧光强度,进行结果测定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:李庆阁梁基选栾国彦
申请(专利权)人:厦门泰伦生物工程有限公司
类型:发明
国别省市:92[中国|厦门]

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