一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及制备方法技术

本发明专利技术属于生物制品及化妆品技术领域，公开了一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及制备方法。该透皮七肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该美容组合物包括透皮七肽、透明质酸和水，所述透皮七肽的浓度为20～50μg/mL，所述透明质酸的浓度为50～80mg/mL。该制备方法通过将透皮七肽串联后转入大肠杆菌扩大培养，并酶切去串联后得到透皮七肽。本发明专利技术的优点在于，该透皮肽能有效渗透入肌肤内里，增加皮肤弹性，解决细纹等皮肤问题，该美容组合物通过将透皮七肽和透明质酸以特定比例组合，在有效增加美容组合物保湿能力的同时充分提升透皮七肽的功效；该制备方法通过重组工程菌等生物技术，扩大生产透皮七肽，纯度高，可适用于大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及制备方法
本专利技术属于生物制品及化妆品
，简而言之，具体涉及一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及制备方法。
技术介绍
近年来，随着社会的不断发展和进步，人们对于化妆品的需求越来越倾向于“自然”、“天然”，对含有天然成分的化妆品青睐有加。使用者的这一需求也促使研发机构对于化妆品活性成分的研究从化学类原料向中药、生物等天然原料转移。由于某些中药类原料和生物类原料与机体的相容性好、副作用小且效果显著，人们对于这两类原料的研究也越来越多。人们的皮肤从外到内依次包括表皮、真皮和皮下组织。我们常说的护肤即对皮肤表皮的最外层进行护理，目前的大多数护肤品，最多也只能达到皮肤表皮的角质层。其原因在于皮肤角质层由角层细胞和细胞间质组成，形成了一种“砖墙结构”，细胞间脂质的弯曲通道既阻止了皮肤表皮中水分散失，又阻止了外界物质的进入，同时也包括护肤品中的各种昂贵的有效成分。因此，目前市面上的大多数产品，即使其用料昂贵，成本高，定位高端护肤品，其中的有效成分依然无法部分或全部渗透进入肌肤内里，无法从根本上改善肌肤状态，当然也就无法起到很好保养效果。由于角质层具有高度亲脂性结构，是大分子和亲水性物质的天然屏障，而位于角质层下方的活性表皮和真皮层则为亲水结构，因此，如果要想达到较好的护肤保养效果，则在不影响角质层结构的情况下，使功效成分进入角质层才能从根本上改善皮肤状态，达到较好的护肤保养和美容的效果。细胞穿透肽又称为穿膜肽、跨膜肽等，在目前透皮给药领域中有广泛研究。透皮短肽(Transdermalpeptide1，TD-1，CAS号为918629-48-8)是其中的典型代表，该短肽由11个氨基酸组成，可携带各种化学药物、天然药物及生物制品进入人体皮下组织，无需物理方法协助就能打开皮肤屏障，通过毛细血管吸收达到治疗或预防疾病的效果。随着研究范围的逐渐扩大，越来越多的细胞穿透肽被发现和证实，也逐渐发现其在美容护肤中的功效。然而，目前的大多数细胞穿透肽在美容护肤方面的研究都停留在证实其功效的层面上，主要原因在于细胞穿透肽的氨基酸数量小，一般采用化学方法合成，但化学方法合成细胞穿透肽成本会比较高，无法实现量产，因此也限制了细胞穿透肽在美容护肤方面的进一步研究和应用。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的上述问题，本专利技术目的在于提供一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及其制备方法。该透皮肽能有效渗透入肌肤内里，增加皮肤弹性，解决细纹等皮肤问题，该美容组合物通过将透皮七肽和透明质酸以特定比例配合，在有效增加美容组合物保湿能力的同时充分提升透皮七肽的功效；该制备方法通过重组工程菌等生物技术，扩大生产透皮七肽，纯度高，可适用于大规模生产。本专利技术所采用的技术方案为：一方面，本专利技术提供了一种透皮七肽，所述透皮七肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。优选的，上述制备方法，所述透皮七肽串联8次后的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。另一方面，本专利技术提供了一种含有前述透皮七肽的美容组合物，其特征在于，包括透皮七肽、透明质酸和水，所述透皮七肽的浓度为20～50μg/mL，所述透明质酸的浓度为50～80mg/mL。另一方面，本专利技术提供了一种前述透皮七肽的制备方法，包括如下步骤：合成SEQIDNO.2所示核苷酸，得到HN；将HN与载体分别双酶切后连接，得到重组质粒；将重组质粒转入大肠杆菌，扩大培养，得到HN工程菌；培养HN工程菌，加入诱导剂诱导，得到发酵菌液；将发酵菌液离心取沉淀，向沉淀中加入包涵体溶解液，离心收集上清，得到包涵体蛋白溶液；向包涵体蛋白溶液中加入复性液，混匀，过阴离子交换柱，得到纯化后蛋白；向纯化后蛋白中加入肠激酶酶切后再加入胰蛋白酶酶切，灭酶后得到酶解液；将酶解液超速离心后冷冻干燥，得到透皮七肽。优选的，上述制备方法，所述核苷酸序列的5'的酶切位点为XhoI，所述核苷酸序列的3'端的酶切位点为BglII。优选的，上述制备方法，所述载体为pET-30a(+)。优选的，上述制备方法，所述诱导剂为IPTG，IPTG的终浓度为0.8mmol/L，诱导时间为6h。优选的，上述制备方法，复性包涵体蛋白所需复性液为10mL/mg，所述复性液中尿素浓度为6～8mol/L，Tris-Cl的浓度为50mmol/L，所述复性液的pH为7.9～8.2。优选的，上述制备方法，所述肠激酶的终浓度为0.3U/mL，所述胰蛋白酶的终浓度为1.0U/mL。优选的，上述制备方法，所述超速离心包括一次超速离心和二次超速离心，所述一次超速离心的离心力为50000g，离心时间为2h，所述一次超速离心的离心力为85000g，离心时间为5h。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的透皮肽具有七个氨基酸，能渗透皮肤屏障，有效渗透入肌肤内里，增加皮肤弹性，显著减少皮肤经UV照射后的回弹时间，解决细纹等皮肤问题。本专利技术提供的含有透皮七肽的美容组合物通过将透皮七肽和透明质酸以特定比例组合，在有效增加美容组合物保湿能力的同时充分提升透皮七肽的功效，使得整体增加皮肤弹性、修复UV照射后的问题皮肤的效果更好，从而显著提升组合物的美容效果；本专利技术提供的制备方法通过将透皮七肽的氨基酸序列优化后串联，再依据大肠杆菌密码子偏好性反向翻译为核苷酸序列，并将该核苷酸序列串联后转入大肠杆菌中，利用重组工程菌等生物技术，扩大生产含有透皮七肽的质粒，再去质粒，去标签，去串联，最终成功制得纯度高的透皮七肽，可适用于大规模生产。附图说明图1是本专利技术实施例1中不同诱导条件得到的菌液OD600值；图2是本专利技术实施例1中不同诱导条件得到的菌液中总蛋白和目的蛋白的含量；图3是本专利技术实施例1中不同诱导时间时pET-30a(+)-HN-DE3的相对数量；图4是本专利技术实施例1提供的透皮七肽和实施例2～4中提供的含有透皮七肽的美容组合物对皮肤弹性的影响。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步阐释。实施例1本实施例的目的在于提供一种透皮七肽。1.制备透皮七肽的核苷酸序列筛选网上公布的透皮肽，并对其进行优化，优化后的透皮七肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，由于短肽氨基酸数太少，无法进入重组表达系统，故以SEQIDNO.1所示氨基酸为重复单元，串联7～9次，本实施例中选择串联8次，过长的串联易造成目的蛋白自聚，对串联后的氨基酸序列进行优化后将其逆向翻译为核苷酸序列，并按照有利于大肠杆菌表达系统进行翻译，翻译后的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。修饰SEQIDNO.2所示核苷酸序列，以便其能适应载体和后续的切割，结果如SEQIDNO.3所示。将SEQIDNO.3两端加上酶切位点后送往生物公司合成，并进行验证确认，得到透皮七肽的核苷酸序列，如SEQIDNO.4所示，SEQIDNO.4的5'有XhoI切割位点(小写斜体双横线字母)和肠激酶切割位点(小写字母)，3'有终止密码子(小写且有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种透皮七肽，其特征在于，所述透皮七肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种透皮七肽，其特征在于，所述透皮七肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的透皮七肽，其特征在于，所述透皮七肽串联8次后的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.一种含有权利要求1或2所述的透皮七肽的美容组合物，其特征在于，包括透皮七肽、透明质酸和水，所述透皮七肽的浓度为20～50μg/mL，所述透明质酸的浓度为50～80mg/mL。


4.一种权利要求2所述的透皮七肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：合成SEQIDNO.2所示核苷酸，得到HN；将HN与载体分别双酶切后连接，得到重组质粒；将重组质粒转入大肠杆菌，扩大培养，得到HN工程菌；培养HN工程菌，加入诱导剂诱导，得到发酵菌液；将发酵菌液离心取沉淀，向沉淀中加入包涵体溶解液，离心收集上清，得到包涵体蛋白溶液；向包涵体蛋白溶液中加入复性液，混匀，过阴离子交换柱，得到纯化后蛋白；向纯化后蛋白中加入肠激酶酶切后再加入胰蛋白酶酶切，灭酶后得到酶解液；将酶解液超速离心后冷冻干燥，得到透皮七肽。


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【专利技术属性】
技术研发人员：何备战，刘木水，
申请(专利权)人：广州和佳润颜医药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44