新的以三唑为基础的解毒剂和它们的应用制造技术

包括基质和与基团Ｚ结合的配体的亲合性配体－基质结合物，配体具有通式（Ⅰ）结构，其中Ｘ之一表示氮原子，而另一Ｘ表示Ｎ、ＣＣｌ或ＣＣＮ；Ａ↓［１］和Ａ↓［２］各自独立地表示Ｏ、Ｓ或Ｎ－Ｒ↓［１］，以及Ｒ↓［１］表示Ｈ、Ｃ↓［１－６］烷基、Ｃ↓［１－６］羟基烷基、苄基或β－苯基乙基基团；Ｂ↓［１］和Ｂ↓［２］各自独立地表示任意取代的、有１－１０个碳原子的烃基链；Ｄ↓［１］表示Ｈ、伯氨基、仲氨基、叔氨基、季铵基、咪唑基、胍基或脒基；和Ｄ↓［２］表示伯氨基、仲氨基、叔氨基、季铵基、咪唑基、胍基或脒基；或Ｂ↓［２］－Ｄ↓［２］是－ＣＨＣＯＯＨ－（ＣＨ↓［２］）↓［３－４］－ＮＨ↓［２］；和ｐ是０或１。这些配体用于内毒素的分离、离析、纯化、特征化、鉴定或定量。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新的亲合配体，它们的制备和与基质的连接，所述的基质是由固体、半固体，微粒或者特别是胶体物质或可溶性聚合物。本专利技术还涉及这些新的亲合配体-基质接合体及其制备和以其结合由各种流体如水、水溶液、体液、血液、血浆、药用产品的溶液、蛋白质和生命起源的其它化合物中除去内毒素的应用。由格兰氏阴性菌的细胞壁释放出来的内毒素被认为是伴有格兰氏阴性败血症的许多病理出现的基本原因。血液中有pg/ml浓度的内毒素就会导致多种细胞因子的释放，包括白细胞介素和TNF。内毒素对免疫系统的刺激导细胞因子的大量释放，最终会引起代谢混乱和感染性休克。在感染性休克期间，互补和凝聚的串联被活化，血管渗透性增加。这可能导致血管内凝聚的散布和多器官功能衰竭，并常常有致命的后果。由于对感染缺少最初的响应，感染性休克常常会继续发展，从而使血液中产生的内毒素达到临界水平。除了在肠胃外药用产品中由于存在活的格兰氏阴性菌或细胞壁碎片显然的危险的以外，在药物制剂中存在游离的内毒素也是主要问题。由于内毒素是有效的免疫刺激物，在很低的浓度下基可能引起毒性反应，包括发热效应。内毒素是相对稳定的分子，用常规的高压灭菌或有机溶剂处理不能使其失活。与浓氢氧化钠接触或延长高温(250℃)的时间可使内毒素失活，虽然此方法对大多数生物制品并不适用。另外，要在生物治疗剂制备的整个过程中使其完全不育是有问题的。因此，非常需要由肠胃外药物中高效的捕获和排除内毒素，特别是在已知内毒素与治疗制剂的组分有关的情况下。已经有多种技术用于排除水溶液中的内毒素，包括超滤、活性碳吸附、阳离子交换色谱和各种固定亲合配体，包括多粘菌素B和内毒素结合蛋白质。所有这些技术都有很大的缺陷，特别是在把内毒素由大分子量的化合物如治疗用蛋白质中除去的情况下更是如此。超滤只能用于除去低分子量化合物中的内毒素，而活性碳吸附趋向于促进大多数有机化合物的结合。在由水中除去内毒素时，阳离子交换色谱是有效的，但对含有蛋白质的溶液作用很小，特别是对有酸性等电点的蛋白质更是如此。多粘菌素B，是环状多肽抗生素，就用于纯化治疗用产品而言毒性太大，而就商业应用而言，内毒素结合蛋白价格太贵。固定化的阳离子氨基酸(组氨酸、赖氨酸和精氨酸)已经被用于除去内毒素(Tosa，T.等人，Molecular Interactions inBioseparations，Ed.Ngo，T.T.，Plenum Press，New York，pp.323-332，1993；Lawden，K.H.等人，Bacterial EndotoxinsLipopolysaccharides From Genes to Therapy，Wiley-Liss Inc.，pp.443A52，1995)。通过将氨基酸直接连接于环氧活化的色谱基质制备这些材料。pyrosepTM是由Tanabe Seiyaku Company Limited，Osaka，Japan，制造的商品，是将一个组氨酸基团通过己二胺间隔臂固定于载体基质。另外，这些材料适用于由水或低分子量的溶液中除去内毒素，但是此方法在有盐(＞50mM)或有与内毒素有亲合性的蛋白质存在时，其效果就要打折扣。因此，没有一种除去内毒素的方法适用于由肠胃外施用的生物治疗化合物中除去内毒素。特别是，确实没有单一作用的和安全的方法由蛋白质治疗剂中除去内毒素。由血液或血浆中除去内毒素有可能提供有效的控制感染性休克的方法，特别是在感染的早期或在预防的情况下，预期感染性休克的危险增加(例如主要是肠或肝的手术)。已有报道说应用直接作用于内毒素或在休克反应的最初阶段释放的细胞因子的单克隆抗体。但是，发现这些方法中大多数是无效的(Siegel，J.P.，Drug Information Journal 30，pp.567-572，1996)。相反，应用纤维-固定的多粘菌素B完成了由全血中在体外除去内毒素(Aoki，H.等人.，Nippon Geka Gakkai Zasshi(Japan)，94，pp.775-780，1993)，虽然保留了多粘菌素B lechates的毒性。因此，与内毒素结合配体的结合有亲合性的吸附剂对内毒素有高亲合性和低毒性，对处置败血症也是有益的。固定化的氨基酸也作为有效的内毒素除去剂进行了研究，但是这些物质与内毒素的结合弱，并且没有特异性，在从生物流体和生物化合物的溶液中除去内毒素方面的价值是有限的。已有报告说以三唑为基的化合物可选择性的与蛋白质结合；但是，这些配体不能用于分离内毒素。专利技术综述本专利技术涉及发现了合成的亲合性配体结构，该结构可选择性地与内毒素结合。已经发现了新的亲合性配体所属基团，该基团对内毒素显示了高亲合性，并且可用于由多种来源中分离内毒素。本专利技术的特征是提供了由生物物质中除去内毒素污染的一般性工具。内毒素与本专利技术的亲合性配体-基质结合物结合得非常紧密。此特征能够使之高效地由水或水溶液中萃取出内毒素，从而提供了生产无热原水或无热原溶液的方法。对于除去内毒素，本专利技术的亲合性配体-基质结合物是特别有价值的，内毒素可与蛋白质、药物或其它可作为药物或药用的生物化合物结合或相联系。某些生物化合物，特别是蛋白质，常常可用于内毒素紧密的结合，其结果是用现有的方法要除去是很困难的。本专利技术的亲合性配体-基质结合物也可应用于由血液和血浆中除去内毒素，因此而提供了在体外或体内除去内毒素的特别有用的方法，例如，后者可通过内毒素的体外萃取装置来实现。这种装置对除去内毒素时特别有价值的，内毒素在发生细菌感染时可释放到血液中，这些感染常常会引起对生命有威胁的疾病如败血症或脑膜炎。除去血液中生成的内毒素对治疗这些疾病以及预防和治疗感染性休克是特别有利的。本专利技术提供的新的亲合性配体-基质结合物可用来代替其它的内毒素结合材料，并且在此应用中更易于掌握，更健全，价格低，以及产生和提供更高的内毒素有效结合率。本专利技术涉及亲合性配体-基质结合物，包括具有下述通式(I)的配体 其中符号X之一表示氮原子，另一符号X表示氮原子或带有氯原子或氰基基团的碳原子；A1和A2各自独立地表示氧原子、硫原子或基团N-R1；R1表示氢原子、具有1-6个碳原子的烷基、具有1-6个碳原子的羟基烷基、苄基或β-苯基乙基基团；B1和B2各自独立地表示任意取代的、有1-10个碳原子的烃基链(就应用而言，是什么取代基实质上是不重要的)，包括烷基、苯基、萘基和环己基基团；D1表示氢原子、伯氨基、仲氨基、叔氨基、季铵基、咪唑基、胍基或脒基；D2表示伯氨基(例如，由赖氨酸或鸟氨酸衍生的)、仲氨基、叔氨基、季铵基、咪唑基、胍基或脒基；和p是0或1。所述的配体连接于载体基质的Z位上，任选通过插入配体和基质之间的间隔臂连接。另外，在本专利技术的新配体中，Z表示能与活化(如果必要或希望)或失活的固体基质反应的官能基类型。专利技术的详细描述在与基质结合时，任选的间隔臂优选用下述通式(II)表示-T-m-(II)其中T表示氧原子、硫原子或基团N-R2；其中R2表示氢原子或具有1-6个碳原子的烷基；V表示氧原子、硫原子、-COO-基团、CONH基团或NHCO基团、-PO3H基团、NH-亚芳基-SO2-CH2-CH2-基团或N-R3基团；其中R3表示氢原子或具有1-6个碳原本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种亲合性配体－基质结合物，其包括基质和基团Ｚ结合其上的具有下述通式（Ⅰ）结构的亲合性配体：＊＊＊（Ⅰ）其中Ｘ之一表示氮原子，而另一Ｘ表示Ｎ、ＣＣｌ或ＣＣＮ；Ａ↓［１］和Ａ↓［２］各自独立地表示Ｏ、Ｓ或Ｎ－Ｒ↓［１］；以及Ｒ↓［１］表示Ｈ、Ｃ↓［１－６］烷基、Ｃ↓［１－６］羟基烷基、苄基或β－苯基乙基基团；Ｂ↓［１］和Ｂ↓［２］各自独立地表示任意取代的、有１－１０个碳原子的烃基链；Ｄ↓［１］表示Ｈ、伯氨基、仲氨基、叔氨基、季铵基、咪唑基、胍基或脒基；和Ｄ↓［２］表示仲氨基、叔氨基、季铵基、咪唑基、胍基或脒基；或Ｂ↓［２］－Ｄ↓［２］是－ＣＨＣＯＯＨ－（ＣＨ↓［２］）↓［３－４］－ＮＨ↓［２］；和ｐ是０或１。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：CR洛维，KH劳登，
申请(专利权)人：普罗米蒂克生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]