Wnt7a和HE4联合用作早期卵巢癌生物标志物以及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及Wnt7a和HE4联合用作早期卵巢癌生物标志物以及试剂盒，属于免疫检测技术领域。本发明专利技术公开了检测来自对象的样品中Wnt7a和HE4水平的试剂在制备用于预测、评价或诊断所述对象的早期卵巢癌的试剂盒中的用途。本发明专利技术还提供了用于预测、评价或诊断对象的早期卵巢癌的试剂盒，其能够有效用于卵巢癌的早期筛查，通过本发明专利技术提供的试剂盒，显著提高了对象中卵巢癌的预测、评价和诊断的灵敏度和特异性，极大地降低了早期卵巢癌检测中的假阳性率。

【技术实现步骤摘要】
Wnt7a和HE4联合用作早期卵巢癌生物标志物以及试剂盒
本专利技术大体上涉及免疫检测
，具体涉及将Wnt7a和HE4组合用作早期卵巢癌生物标志物，以及由其制得的试剂盒。
技术介绍
卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，对女性生命造成严重威胁。由于卵巢深居盆腔，体积小，发病时缺乏典型症状，因而，卵巢癌的早期诊断较为困难，已成为技术难题。临床发现时，常常已经发展至中晚期。而发展至中晚期，尤其在发生转移之后，即便通过卵巢上皮癌手术进行治疗，其复发率和5年生存率均较低。因此，卵巢癌的早期诊断对于降低转移、提高5年生存率具有重要意义。目前在临床上，卵巢癌的诊断主要依据阴道超声检查(TVU)和血液中卵巢癌标志物的检测。对于卵巢癌标志物，尽管中华医学会妇科肿瘤学分会推荐HE4与CA125的联合应用(专利文献1和2)，然而，单一HE4对I期卵巢癌辅助诊断的灵敏度比CA125更高，但也仅为45.9％；而HE4和CA125联合检测的灵敏度在I期卵巢癌中并未得到提升(参见MooreRG,BrownAK,MillerMC等，Theuseofmultiplenoveltumorbiomarkersforthedetectionofovariancarcinomainpatientswithapelvicmass.GynecolOncol,2008,108:402-408)。因此，仍然缺乏准确可靠的肿瘤标志物用于卵巢癌早期的诊断，急需开发一些新的具有诊断价值的卵巢癌血清标志物。理想的标志物需要在卵巢癌恶变的早期阶段即能敏感和特异性地从外周血中检出。市售试剂盒大多采用ELISA法，其原理是：将CA125抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的CA125与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的CA125抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CA125呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。然而，该方法受到较大的操作者主观影响。需要提供一种减少人为误差的检测试剂盒。生物标志物“Wnt7a”是由19个分泌糖蛋白组成的Wnt家族的一种39kDa的分泌型糖蛋白。Wnt7a在uniprot.org中登录号为UniProtKB-O00755(WNT7A_HUMAN)。Wnt7a蛋白在人中由WNT7A基因编码，长度为349个氨基酸。该蛋白通常在肺、睾丸、淋巴结和脑中表达，通过Wnt/β-catenin信号通路参与调控细胞的生命活动。已知Wnt7a在不同类型的恶性肿瘤中表现出不同的表达模式。然而，从未公开过将HE4和Wnt7a联合用于早期卵巢癌诊断的生物标志物。【参考文献】[专利文献1]：CN108008132A；[专利文献2]：CN103954761A。
技术实现思路
本专利技术一般性地涉及早期卵巢癌生物标志物，并且特别地涉及通过测量生物标志物组合Wnt7a和HE4的水平来预测、评价和诊断早期卵巢癌的方法和应用，并且还提供用于预测、评价和诊断早期卵巢癌的试剂盒。本专利技术提供的方法和试剂盒特别地用于上皮性卵巢癌，并且更特别地用于早期卵巢癌(即I期或II期卵巢癌)，从而提供了一种便于操作、灵敏度高、特异性高、能够有效地用于卵巢癌的早期筛查的方法和试剂盒。为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术采用如下技术方案：在一个方面中，本专利技术提供了检测来自对象的样品中Wnt7a和HE4水平的试剂在制备用于预测、评价或诊断所述对象的早期卵巢癌的试剂盒中的用途。在一些实施方案中，所述卵巢癌选自I期卵巢癌、II期卵巢癌或I期和II期卵巢癌二者。在一些实施方案中，所述检测Wnt7a和HE4水平的试剂分别是针对Wnt7a的抗体和针对HE4的抗体。优选地，所述针对Wnt7a的抗体和针对HE4的抗体分别是针对Wnt7a的单克隆抗体和针对HE4的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述样品是来自所述对象的生物流体样品。优选地，所述样品是来自所述对象的血液、血清、血浆、淋巴、脑脊液、腹水、尿和组织活检物。更优选地，所述样品是来自所述对象的血液、血清和血浆。在一些实施方案中，所述试剂盒是化学发光试剂盒。优选地，所述化学发光试剂盒包括捕获抗体、检测抗体以及化学发光底物。在一些实施方案中，所述捕获抗体选自与磁微粒连接的Wnt7a单克隆抗体、与磁微粒连接的HE4单克隆抗体，及其组合。可选地，所述检测抗体选自具有碱性磷酸酶标记的Wnt7a单克隆抗体、具有碱性磷酸酶标记的HE4单克隆抗体，及其组合。可选地，所述化学发光底物是AMPPD(CASNo:122341-56-4)。在另一个方面中，本专利技术提供了一种用于预测、评价或诊断对象的卵巢癌的试剂盒，其包含检测样品中Wnt7a和HE4水平的试剂。优选地，所述卵巢癌选自I期卵巢癌、II期卵巢癌或I期和II期卵巢癌二者。在一些实施方案中，所述检测Wnt7a和HE4水平的试剂分别是针对Wnt7a的抗体和针对HE4的抗体。优选地，所述针对Wnt7a的抗体和针对HE4的抗体分别是针对Wnt7a的单克隆抗体和针对HE4的单克隆抗体。在一些实施方案中，所述样品是来自所述对象的生物流体样品。优选地，所述样品是来自所述对象的血液、血清、血浆、淋巴、脑脊液、腹水、尿和组织活检物。更优选地，所述样品是来自所述对象的血液、血清和血浆。在一些实施方案中，所述试剂盒是化学发光试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒是诊断试剂盒。优选地，所述化学发光试剂盒包括捕获抗体、检测抗体以及化学发光底物。在一些实施方案中，所述捕获抗体选自与磁微粒连接的Wnt7a单克隆抗体、与磁微粒连接的HE4单克隆抗体，及其组合。可选地，所述检测抗体选自具有碱性磷酸酶标记的Wnt7a单克隆抗体、具有碱性磷酸酶标记的HE4单克隆抗体，及其组合。可选地，所述化学发光底物是AMPPD。在一些实施方案中，所述试剂盒包括2个试剂亚组，其中，亚组1包含：包被有针对Wnt7a的单克隆抗体的磁微粒、具有碱性磷酸酶标记的Wnt7a单克隆抗体，和化学发光底物AMPPD；并且其中亚组2包含：包被有针对HE4的单克隆抗体的磁微粒、具有碱性磷酸酶标记的HE4单克隆抗体，和化学发光底物AMPPD。在本申请的另一方面中，还提供了预测、评价或诊断对象中卵巢癌的存在及其发展阶段的方法，包括对来自所述对象的样品中Wnt7a和HE4水平进行检测。在一些实施方案中，可以通过如以上方面中所提供的试剂盒来检测对象的样品中Wnt7a和HE4的水平。可选地，可将所检测到的对象的样品中Wnt7a和HE4的水平与由未患病群体中所获得的Wnt7a和HE4水平值(即，标准值)进行比较，以确定所述对象中卵巢癌是否存在及其发展阶段。有益效果本专利技术联合使用Wnt7a和HE4作为卵巢癌筛选和诊断的新标志物。本专利技术人本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测来自对象的样品中Wnt7a和HE4水平的试剂在制备用于预测、评价或诊断所述对象的卵巢癌的试剂盒中的用途，其中，所述卵巢癌选自I期卵巢癌、II期卵巢癌或I期和II期卵巢癌二者，所述样品是来自所述对象的血液、血清、血浆。/n

【技术特征摘要】
1.检测来自对象的样品中Wnt7a和HE4水平的试剂在制备用于预测、评价或诊断所述对象的卵巢癌的试剂盒中的用途，其中，所述卵巢癌选自I期卵巢癌、II期卵巢癌或I期和II期卵巢癌二者，所述样品是来自所述对象的血液、血清、血浆。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测Wnt7a和HE4水平的试剂分别是针对Wnt7a的抗体和针对HE4的抗体。


3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述针对Wnt7a的抗体和针对HE4的抗体分别是针对Wnt7a的单克隆抗体和针对HE4的单克隆抗体。


4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述试剂盒是化学发光试剂盒，所述化学发光试剂盒包括捕获抗体、检测抗体以及化学发光底物。


5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述捕获抗体选自与磁微粒连接的Wnt7a单克隆抗体、与磁微粒连接的HE4单克隆抗体，及其组合；
所述检测抗体选自具有碱性磷酸酶标记的Wnt7a单克隆抗体、具有碱性磷酸酶标记的HE4单克隆抗体，及其组合；和/或，
所述化学发光底物是AMPPD。


6.用于预测、评价或诊断对象的卵巢癌的试剂盒，其包含检测样品中Wnt7a和HE4水平的试剂，
其中，所述卵巢癌选自I期卵巢癌、II期卵...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄光磊，薛新颖，刘三宏，周小进，师凯旋，殷霞，张振峰，
申请(专利权)人：北京信诺卫康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11