本发明专利技术包含新的和经过修饰的肽，它们能够诱导ＨＩＶ－１特异性免疫应答而且不拮抗细胞毒性Ｔ细胞的活性，其目的是得到一种针对ＨＩＶ的有效的预防和治疗疫苗。这些肽基于ＨＩＶｇａｇｐ１７和ｐ２４的保守区域。本发明专利技术还阐述了：包含至少一种所述的肽的游离形式或载体结合形式的抗原，包含至少一种抗原的疫苗组合物，以及应用这些抗原的免疫测定试剂盒和检测ＨＩＶ或ＨＩＶ特异肽诱导的抗体的方法。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基于HIV gag p17和p24的保守区域的新肽，包含至少一种所述肽的游离形式或载体结合形式的抗原，包含至少一种抗原的疫苗组合物，应用这些抗原的免疫测定试剂盒和检测人类免疫缺陷病毒(HIV)或HIV特异肽诱导的抗体的方法。背景控制HIV感染的全球流行是迫切的需要，而且开发HIV疫苗是艾滋病研究的主要目的之一。大体上来说，疫苗应能够激活抗原提呈细胞，克服T细胞应答的遗传限制，并且产生记忆性T细胞和B细胞。病毒群体的变异性给获得有效的HIV疫苗提出更大的困难。迄今为止，试图开发艾滋病疫苗的过程中还没有重大突破报道。现在普遍认为，抗原特异的体液免疫和细胞介导的免疫的诱导是开发有效的预防和治疗性疫苗的关键。免疫系统的三种武器，包括中和抗体、CD8+CTL和T辅助细胞-1(TH1)，对于HIV的保护性免疫可能是必需的。已知，CTL能清除其它病毒感染(Ada，Immunol.Cell Biol.，72447-454，1994)，并能在细胞产生和释放病毒子代之前裂解感染早期的靶标，Ada等，同上。研究焦点集中在抗原的选择与不同佐剂的设计和评价。用于体外和体内不同研究的抗原包括了所有从粗蛋白质到来源于几种HIV蛋白质的多种人工合成肽。已经对gp120 V3环做了大量的研究。已经观察到B细胞和T细胞免疫应答的诱导，然而有体外研究报道，来源于gp41保守区的肽表明感染的增强(Bell S.J.等，Clin.Exp.Immunol.，87(1)37-45，January 1992)。由于病毒固有的通过改变表达在感染细胞表面的抗原决定部位而获得的逃逸能力，候选疫苗中天然产生的HIV序列不能刺激稳定的免疫应答。实际上当那些重要的氨基酸隐藏起来的时候，免疫系统错误地认为特定氨基酸序列是有关的。最近的一项针对gag p24抗体滴度的研究表明，向艾滋病发展的慢性过程与抗体的高滴度相关，而向艾滋病发展的急性过程与抗体的低滴度相关。已表明p24抗体滴度低的人比p24抗体滴度高的人更快地发展成艾滋病(Zwart G..等Virology，201，p.285-93，June 1994)，提示gag和(特别是)p24可能在控制艾滋病发展过程中扮演关键角色。在WO91/13360中描述了新的HIV p24肽，其中这些肽用于鉴定诊断为HIV阳性的血清样本的真伪。Johnson R.P.等，The Journal of Immunology，vol.147，p.1512-1521，No.5，September 1，描述了在三个HIV血清阳性个体中gag特异CTL应答的特异性分析，发现此gag特异CTL应答是由HLA-I类分子限制的CD3+CD8+淋巴细胞介导的。GoulderP.J.R.等，Journal of Virology，Vol.74，p.5679-5690，No 12，June2000研究了不同人群中的HIV p17和p24的不同部分的CTL应答。研究发现存在某些免疫显性区域，然而氨基酸组成上较小的差异就能导致应答的较大不同。EP-A-0 356 007公开了抗原决定簇，尤其是它涉及与HIV-1中蛋白质相关的合成多肽序列，并且这些合成多肽序列能用作抗艾滋病的潜在疫苗的基础。Rosenberg E.S.等，Science，Vol.278，21 November 1997，p.1447-1450描述了在一些慢性病毒感染中，病毒特异性的CD4+T辅助淋巴细胞是维持有效免疫性的关键，但是在慢性人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染中不能检测到其特征。对p24的HIV-1特异的增生性反应与病毒载量呈负相关。他们得出结论，HIV-1特异的辅助细胞在免疫治疗干预和疫苗开发中可能是重要的。F.Hoffmann-La Roche和Co.Aktiengesellschaft名下的EP 0 230 222、EP 0 270 114、DE 3 711 016和GB 2 118 639都是关于重组表达和纯化HTLVIII Gag/Env基因的蛋白质或融合蛋白质的。这些天然序列组成的蛋白质能纯化为均一的蛋白质，而且作为检测针对与艾滋病相关病毒的抗体的诊断试验的基础。gag/env蛋白质也可配制成疫苗，从而通过预防免疫接种来抵抗艾滋病。从诊断和治疗的角度看，使用p24作为试验或治疗的制剂成分其主要问题与p24的大量抗原决定部位有关，这些抗原决定部位刺激产生大量特异性差的抗体，这些特异性差的抗体可通过重复刺激潜在的突变序列能产生自身抗体(HIV感染中α/βT细胞受体的自身抗体(Autoantibodies to the alfa/beta T-cellreceptors in HIV infection)；dysregulation and mimicry.Lake D.F.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，(23)10849-53，Nov.8 1994)。进而报道了p24抗体滴度不能达到与包膜蛋白(gp120和gp41)同样高的水平。通常情况下p24抗体是在感染十分早期阶段产生的，但是在开始感染后抗体滴度非常迅速地稳定下来。之后，p24滴度逐渐降低，此时gP160的滴度反而升高。最近关于天然产生的HIV-1 gag突变体拮抗细胞毒性T细胞活性的报道也支持了这一发现(Klenerman P.等，Nature，2369(6479)，p.355，2 June 1994)。这可能是p24滴度迅速稳定下来以及之后又开始下降的原因之一。基于以上的背景数据，我们决定研究设计能模拟p17和p24表位却不拮抗细胞毒性T细胞活性的新合成肽的可能性，其目的是满足有效的预防和治疗疫苗的需要。Korber B.等，Human Retroviruses and AIDS 1999Eds.Theoretical Biology and Biophysics Group，Los AlamosNational Laboratory，Los Alamos，NM公布了p17的序列，该序列可以作为开发能引发CTL和抗体应答的肽的可能模板。这些鉴别出来的氨基酸序列位于第33位和第53位氨基酸之间，参考表1表1氨基酸序号 氨基酸序列 天然产生的氨基酸33 H34 I L V M35 I V36 W37 A38 S N R39 R S40 E41 L M42 E D K G Q43 R K G N44 F S Y45 A T S46 V L I C47 N D S48 P R S T49 G S A D N Q50 L F51 L M52 E G D53 T S A说明书中代表序列中氨基酸的单字母和三字母密码与国际标准及参考书中给出的一致，如Lehninger A.L.，《(Principles ofBiochemistry》，Worth Publishers Inc.，New York，1982.第二列右侧给出的氨基酸代表序列的天然变异。氨基酸修饰引起的抗原决定部位电荷变化涉及到免疫原性的显著提高，氨基酸修饰包含从原来的螺旋结构到折叠结构的可能的构象本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肽，其特征在于它包含至少一种选自下列氨基酸序列的氨基酸序列： Ｘａａ↓［１］ Ｘａａ↓［２］ Ｘａａ↓［３］ Ｘａａ↓［４］ Ｘａａ↓［５］ Ｘａａ↓［６］ Ｘａａ↓［７］ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｘａａ↓［１１］ Ｘａａ↓［１２］ Ｘａａ↓［１３］ Ｘａａ↓［１４］ Ｘａａ↓［１５］ Ｘａａ↓［１６］ Ｘａａ↓［１７］ Ｘａａ↓［１８］ Ｘａａ↓［１９］ Ｘａａ↓［２０］ Ｘａａ↓［２１］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１） 其中链上的氨基酸具有以下意义： 肽衍生物的第１位Ｘａａ是Ｈｉｓ，Ｌｙｓ或Ａｒｇ， 第２位Ｘａａ是Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ或Ｍｅｔ， 第３位Ｘａａ是Ｉｌｅ或Ｖａｌ， 第４位Ｘａａ是Ｔｒｐ或Ｔｙｒ， 第５位Ｘａａ是Ａｌａ或Ｌｅｕ， 第６位Ｘａａ是Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ或Ａｓｎ， 第７位Ｘａａ是Ａｒｇ或Ｓｅｒ 第１１位Ｘａａ是Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ或Ａｓｎ， 第１２位Ｘａａ是Ｐｈｅ，Ｓｅｒ或Ｔｙｒ， 第１３位Ｘａａ是Ａｌａ，Ｔｈｒ或Ｓｅｒ， 第１４位Ｘａａ是Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ或Ｃｙｓ， 第１５位Ｘａａ是Ａｓｎ，Ａｓｐ或Ｓｅｒ， 第１６位Ｘａａ是Ｐｒｏ，Ａｒｇ或Ｓｅｒ， 第１７位Ｘａａ是Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｓｐ或Ａｓｎ， 第１８位Ｘａａ是Ｌｅｕ或Ｐｈｅ， 第１９位Ｘａａ是Ｌｅｕ或Ｍｅｔ， 第２０位Ｘａａ是Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ或Ｉｌｅ， 第２１位Ｘａａ是Ｔｈｒ，Ｓｅｒ或Ａｌａ 肽包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１的至少６个连续的氨基酸， Ｘａａ↓［１］Ｘａａ↓［２］Ｘａａ↓［３］Ｘａａ↓［４］Ｘａａ↓［５］Ｘａａ↓［６］Ｘａａ↓［７］ＧｌｙＸａａ↓［９］ＬｅｕＶａｌ－Ｚ －ＴｙｒＸａａ↓［１３］Ｘａａ↓［１４］ Ｘａａ↓［１５］Ｘａａ↓［１６］Ｘａａ↓［１７］Ｘａａ↓［１８］Ｘａａ↓［１９］Ｘａａ↓［２０］Ｘａａ↓［２１］ ＡｌａＸａａ↓［２３］Ｘａａ↓［２４］Ｘａａ↓［２５］Ｘａａ↓［２６］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４） 其中链上的氨基酸具有以下意义： 第１位Ｘａａ是Ｐｒｏ，Ｔｙｒ或Ｐｈｅ， 第２位Ｘａａ是Ｉｌｅ，Ｖａｌ或Ｌｅｕ， 第３位Ｘａａ是Ｉｌｅ，Ａｌａ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ或Ｌｅｕ， 第４位Ｘａａ是Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ或Ｖａｌ， 第５位Ｘａａ是Ａｓｎ，Ａｓｐ或Ｔｈｒ， 第６位Ｘａａ是Ｉｌｅ，Ａｌａ，Ｌｅｕ或Ｍｅｔ， 第７位Ｘａａ是Ｇｌｎ，Ｇ...
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：B索伦森，
申请(专利权)人：比奥诺尔免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：NO[挪威]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。