本发明专利技术包含新的和经过修饰的肽，它们能够诱导ＨＩＶ－１特异性免疫应答而且不拮抗细胞毒性Ｔ细胞的活性，其目的是得到一种针对ＨＩＶ的有效的预防和治疗疫苗。这些肽基于ＨＩＶ ｇａｇ ｐ１７和ｐ２４的保守区域。本发明专利技术还阐述了：包含至少一种所述的肽的游离形式或载体结合形式的抗原，包含至少一种抗原的疫苗组合物，以及应用这些抗原的免疫测定试剂盒和检测ＨＩＶ或ＨＩＶ特异肽诱导的抗体的方法。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
来自gag p17和p24保守区域的HIV肽以及 它们在例如疫苗中的应用本案是分案申请，母案申请号为01815742.4 (PCT申请号为 PCT/NO 01/00362)，申请日为2001年09月03日，专利技术名称为"来 自gag pl7和p24保守区域的HIV肽以及它们在例如疫苗中的应 用"。本专利技术涉及基于HlVgagpl7和p24的保守区域的新肽，包 含至少一种所述肽的游离形式或栽体结合形式的抗原，包含至少 一种抗原的疫苗组合物，应用这些抗原的免疫测定试剂盒和检测 人类免疫缺陷病毒(HIV)或HIV特异肽诱导的抗体的方法。背景控制HIV感染的全球流行是迫切的需要，而且开发HIV疫苗 是艾滋病研究的主要目的之一。大体上来说，疫苗应能够激活抗 原提呈细胞，克服T细胞应答的遗传限制，并且产生记忆性T细 胞和B细胞。病毒群体的变异性给获得有效的HIV疫苗提出更大 的困难。迄今为止，试图开发艾滋病疫苗的过程中还没有重大突 破报道。现在普遍认为，抗原特异的体液免疫和细胞介导的免疫的 诱导是开发有效的预防和治疗性疫苗的关键。免疫系统的三种武 器，包括中和抗体、CD8+CTL和T辅助细胞-1 (TH1)，对于 HIV的保护性免疫可能是必需的。已知，CTL能清除其它病毒感 染(Ada，Immunol.Cell Biol.，72:447 — 454,1994 )，并育巨在细胞产生 和释放病毒子代之前裂解感染早期的靶标，Ada等，同上。研究 焦点集中在抗原的选择与不同佐剂的设计和评价。用于体外和体 内不同研究的抗原包括了所有从粗蛋白质到来源于几种HIV蛋白 质的多种人工合成肽。已经对gpl20V3环做了大量的研究。已经观察到B细胞和T细胞免疫应答的诱导，然而有体外研究报道， 来源于gp41保守区的肽表明感染的增强(Bell S.J.等， Clin.Exp.Immunol"87(l):37 - 45， January 1992 )。由于病毒固有的通过改变表达在感染细胞表面的抗原决定部 位而获得的逃逸能力，候选疫苗中天然产生的HIV序列不能刺激 稳定的免疫应答。实际上当那些重要的氨基酸隐藏起来的时候， 免疫系统错误地认为特定氨基酸序列是有关的。最近的一项针对gag p24抗体滴度的研究表明，向艾滋病发 展的慢性过程与抗体的高滴度相关，而向艾滋病发展的急性过程 与抗体的低滴度相关。已表明p24抗体滴度低的人比p24抗体滴 度高的人更快地发展成艾滋病(ZwartG..等Virology，201，p.285-93，June 1994)，提示gag和(特别是)p24可能在控制艾滋病发 展过程中扮演关键角色。在WO91/13360中描述了新的HIV p24肽，其中这些肽用于 鉴定诊断为HIV阳性的血清样本的真伪。Johnson R.P.等，The Journal of Immunology, vol. 147， p, 1512 - 1521, No.5， S印tember 1，描述了在三个HIV血清阳性个体 中gag特异CTL应答的特异性分析，发现此gag特异CTL应答 是由HLA-I类分子限制的CD3+CD8+淋巴细胞介导的。Goulder P.J.R.等,Journal of Virology,Vol.74，p.5679 - 5690，No 12，June 2000研究了不同人群中的HIV p17和p24的不同部分的CTL应 答。研究发现存在某些免疫显性区域，然而氨基酸组成上较小的 差异就能导致应答的较大不同。EP-A- 0 356 007公开了抗原决定簇，尤其是它涉及与HIV -1中蛋白质相关的合成多肽序列，并且这些合成多肽序列能用作 抗艾滋病的潜在疫苗的基础。Rosenberg E.S.等，Science，Vo1.278，21 November 1997, p.1447 一 1450描述了在一些慢性病毒感染中，病毒特异性的CD4+T辅助 淋巴细胞是维持有效免疫性的关键，但是在慢性人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染中不能检测到其特征。对p24的HIV-1 特异的增生性反应与病毒栽量呈负相关，他们得出结论，HIV-1 特异的辅助细胞在免疫治疗干预和疫苗开发中可能是重要的。F. Hoffmann - La Roche和Co. Aktiengesellschaft名下的 EP 0 230 222、 EP 0 270 114、 DE 37 11 016和GB 2 118 639都是 关于重组表达和纯化HTLVIII Gag/Env基因的蛋白质或融合蛋 白质的。这些天然序列组成的蛋白质能纯化为均一的蛋白质，而 且作为检测针对与艾滋病相关病毒的抗体的诊断试验的基础。 gag/env蛋白质也可配制成疫苗，从而通过预防免疫接种来抵抗艾 滋病。从诊断和治疗的角度看，使用p24作为试验或治疗的制剂成 分其主要问题与p24的大量抗原决定部位有关，这些抗原决定部 位刺激产生大量特异性差的抗体，这些特异性差的抗体可通过重 复刺激潜在的突变序列能产生自身抗体(HIV感染中a/^T细胞受 体的自身抗体(Autoantibodies to the alfa/beta T- cell receptors in HIV infection ) ;dysregulation and mimicry.Lake D.F. 等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，(23):10849 - 53，Nov.8 1994)。进而报 道了 p24抗体滴度不能达到与包膜蛋白(gpl20和gp41)同样高 的水平。通常情况下p24抗体是在感染十分早期阶段产生的，但 是在开始感染后抗体滴度非常迅速地稳定下来。之后，p24滴度逐 渐降低，此时gpl60的滴度反而升高。最近关于天然产生的HIV - 1 gag突变体拮抗细胞毒性T细胞活性的报道也支持了这一发现 (Klenerman P.等，Nature，2:369(6479)，p.355，2 June 1994)。这可 能是p24滴度迅速稳定下来以及之后又开始下降的原因之一。基于以上的背景数据，我们决定研究设计能模拟p17和p24 表位却不拮抗细胞毒性T细胞活性的新合成肽的可能性，其目的 是满足有效的预防和治疗疫苗的需要。Korber B.等，Human Retroviruses and AIDS 1999 Eds.Theoretical Biology and Biophysics Group, Los AlamosNational Laboratory,Los Alamos，NM公布了 p17的序列，该序歹'J 可以作为开发能引发CTL和抗体应答的肽的可能模板。这些鉴别 出来的氨基酸序列位于笫33位和第53位氨基酸之间，参考表1:表1氨基酸序号 氨基酸序列 天然产生的氨基酸33H34IL V M35IV36W37A38SN R39RS40E41M42ED KGQ43RK GN44FS Y45AT S46VLIC47ND S48PR S T49GS AD N Q50F51M52EGD53TS A说明书中代表序列中氨基酸的单字母和三字母密码与国际标7氨基酸序号 氨基酸序列 天然产生的氨本文档来自技高网...
【技术保护点】
来源于ＨＩＶ－１ ｇａｇ ｐ２４蛋白质的肽，其特征在于它包含氨基酸序列： Ｘａａ↓［１］ＡｌａＸａａ↓［３］Ｘａａ↓［４］Ｘａａ↓［５］ＡｌａＸａａ↓［７］Ｘａａ↓［８］Ｘａａ↓［９］ＬｅｕＬｅｕＸａａ↓［１２］Ｘａａ↓［１３］Ｘａａ↓［１４］－Ｚ－Ｘａａ↓［１５］Ｘａａ↓［１６］ＨｉｓＧｌｎＸａａ↓［１９］ＡｌａＸａａ↓［２１］Ｘａａ↓［２２］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９） 其中第１位Ｘａａ是Ｔｙｒ，Ｔｒｐ，Ｐｈｅ或Ｇｌｙ 第３位Ｘａａ是Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｖａｌ，Ｉｌｅ或Ｌｅｕ 第４位Ｘａａ是Ｐｒｏ或Ｓｅｒ， 第５位Ｘａａ是Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ或Ｔｙｒ 第７位Ｘａａ是Ｌｅｕ，Ｉｌｅ或Ｖａｌ 第８位Ｘａａ是Ａｓｎ或Ｔｙｒ 第９位Ｘａａ是Ｔｈｒ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ或Ａｌａ 第１２位Ｘａａ是Ｓｅｒ，Ｔｈｒ或Ａｓｎ 第１３位Ｘａａ是Ｔｈｒ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ或Ａｌａ 第１４位Ｘａａ是Ｖａｌ或Ｉｌｅ 第１５位Ｘａａ是Ｇｌｙ或无 第１６位Ｘａａ是Ｇｌｙ或无 第１９位Ｘａａ是Ａｌａ或Ｇｌｙ 第２０位Ｘａａ是Ａｌａ 第２１位Ｘａａ是Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｃｙｓ或无 第２２位Ｘａａ是Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ或无 连接子－Ｚ－是可选的，并且为ＰＥＧ、修饰的ＰＥＧ和／或［Ｇｌｙ］↓［ｎ］，其中ｎ＝１，２或３， 序列的末端可以是游离的羧基或氨基、酰氨基、酰基、乙酰基或者是它们的盐，两个或更多的Ｃｙｓ残基可以形成链间二硫键的一部分，即－Ｓ－（ＣＨ↓［２］）↓［ｐ］－Ｓ－或－（ＣＨ↓［２］）↓［ｐ］－桥，其中ｐ＝１－８，其间可任选地插入一个或更多的杂原子如Ｏ，Ｎ和Ｓ；和／或上述肽序列是固定于固体支持物上的。...
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：B索伦森，
申请(专利权)人：比奥诺尔免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：NO[挪威]
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