诊断染性海锦状脑病的方法技术

本发明专利技术提供在动物中诊断传染性海绵状脑病（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ）（ＴＳＥ）或朊病毒疾病的方法，该方法包含测定所述动物的样品以确定样品中的类红细胞、巨核细胞或血小板谱系造血细胞的数目或其表达产物的量。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及诊断传染性海绵状脑病(TSE)或朊病毒疾病的新方法。对TSE的生物学全面综述可参见发表的综述形式(Prusiner，S.B.，Proc.Nat’l Acad.Sci USA 95 13363-13383(1998))和/或因特网(http//www.mad-cow.org)。传染性海绵状脑病(TSEs)或朊病毒疾病是一组中枢神经系统(CNS)的不变的致命性病症，它们是通过遗传、传染或散发性机制显现。它们包括绵羊的瘙痒病、牲畜的牛海绵状脑病(BSE)和库鲁症、克-雅病(CJD)、新变体(nv)CJD、Gerstmann-Straussler Sheinker综合症(GSS)和人的致命性家族失眠症。TSE疾病也显现于其他物种中，如驼鹿、鹿、水貂、猫(FSE)和引进的动物园物种如林羚(Nyala)、阿拉伯羊(Arabian Oryx)、印度豹(Cheetah)和大捻角羚(Kudu)。在鹿和驼鹿中也鉴定出了慢性萎缩疾病(CWD)，已提示该疾病也可以传染给人。TSE疾病特征在于长的无症状潜伏期及随后相对快的临床病程，该病程常包括神经变性、液泡化、神经胶质细胞增生和有蛋白酶抗性的朊病毒蛋白质Sc(PrPSc)的积累，其中的朊病毒蛋白质Sc是宿主编码的糖蛋白PrPC的异常同工型。将正常的对蛋白酶K敏感的PrPC转变为异常的有蛋白酶K抗性的同工型PrPSc是TSE疾病的经常性的特征标志。当前，作为BSE流行病及随后新变体CJD在人中的出现的结果，在英国对TSE疾病有相当大的兴趣；认为TSE疾病起因于BSE并作为感染BSE的组织进入人食物链的结果而穿过物种屏障而进入人类。大多数英国公民可能已经暴露于BSE感染的介质中了。除了天然的绵羊瘙痒病的问题之外，现认为由于感染BSE的物质已出现于动物饲料中，所以BSE也很可能以亚临床无症状水平存在于绵羊和其他农业物种中。英国人口中存在的nvCJD的程度和继续发展为疾病的比例当前仍未知。目前没有有效的死前诊断方法估计人或动物中TSE潜在的感染。为了从人食物链中去除感染TSE的农业物种并估计人类中TSE潜在的感染，需要有适当的诊断方法，且理想为针对容易得到的组织如血液。目前，鉴定的唯一的疾病特异性大分子是PrPSc。然而，实际上仅在死后能在CNS中检测到PrPSc，尽管在一些TSE疾病中它可在扁桃体活组织检查中被检测到(Coghlan，A.，New Scientist，第5页，(6月15日，1996))。最近已证明PrPSc可在感染TSE的动物血液中检测到(Schmerr等人Journal of Chromatography 853(1-2)207-214(1999))。然而，这是耗时且在技术上显著苛求的程序，是对PrPSc的一般检测。另外，PrPSc通常在明显地受TSE疾病侵袭的人和动物CNS组织中是不可检测的。因此，没有有效的估计TSE感染的死前诊断方法。理想的诊断方法因而应该不基于PrPSc，且可允许在容易得到的组织如血液中对潜在的TSE感染进行估计。这样的诊断检验将理想地允许在早期对活个体的TSE感染进行估计，而可执行治疗干涉策略。几个在感染TSE的动物的CNS组织中差异表达的基因已有报道。然而，到目前为止，尚未有其他报道关于感染TSE的动物的脾、骨髓或血液中差异表达的基因。尽管来自TSE感染的动物的血液已显示具有感染性，且已证明PrPSc蛋白质在若干造血细胞中表达，但是在本专利技术之前尚未认识类红细胞造血细胞和TSE发病机理之间的联系。有关当前TSE诊断成果的全面概要可参见因特网(httpwww.mad-cow.org/OO/sci_archive_frame.html)。当前的TSE研究迄今为止未能在TSE发病机理中包含EDRF或类红细胞造血细胞生物学，或者在脾、血液或骨髓中鉴定TSE感染的非PrPSc分子标记。该领域的多数研究人员看来集中于旨在检测PrPSc的方法上。现在已经发现EDRF，一个正常表达于造血组织类红细胞中的基因，在感染TSE的动物的造血组织中差异表达。EDRF表达于脾、骨髓和血液中的类红细胞和巨核细胞/血小板谱系的造血细胞中。因此，看来血细胞生成，特别是红细胞生成，在受TSE感染的个体中受到令人惊讶的影响。根据本专利技术的第一个方面，提供在动物中诊断传染性海绵状脑病(TSE)是否存在的方法，该方法包含测定从动物中获得的样品以确定样品中的类红细胞、巨核细胞或血小板谱系的造血细胞的相对数目。传染性海绵状脑病(TSEs)或朊病毒疾病包括绵羊的瘙痒病、牲畜的牛海绵状脑病(BSE)和库鲁症、克-雅病(CJD)、新变体(nv)CJD、Gerstmann-Straussler Sheinker综合症(GSS)和人致命性家族失眠症。TSE疾病特征在于朊病毒蛋白质Sc(PrPSc)，即宿主编码的糖蛋白PrPC的异常同工型的积累。已认识到正常的对蛋白酶K敏感的PrPC转变为异常的具有蛋白酶K抗性的同工型PrPSc是TSE疾病的特征。为本专利技术的目的，术语TSE感染与术语TSE疾病状况意义等同。TSE疾病传染的确切手段仍然是科学争论的主题。实验动物可在实验室中用TSE疾病“感染”。虽然临床表现足够明显，但在实践中遇到的疾病是否是正常字面意义上的“感染”仍然未知。受TSE疾病感染的动物包括哺乳动物如绵羊、牛、人、猫、驼鹿、鹿、水貂，和引进的动物园物种如林羚(Nyala)、阿拉伯羊(Arabian Oryx)、印度豹(Cheetah)和大角羚捻(Kudu)，以及鸟类物种如家禽，例如鸡、火鸡、珍珠鸡。因此与本申请一致的方法可扩展为在绵羊、牛、鹿、驼鹿或人中的TSE诊断方法。根据本专利技术要测定的样品一般为生物学样品，例如来源于造血细胞或基于血液的样品。该样品可为全部或分级分离的血液(或部分分级分离的血液)、血浆、造血组织如骨髓或来自脾。该样品可加入进一步的成分而使样品分析最优化。例如，在血液样品中可方便地加入如肝素、EDTA和/或柠檬酸钠等物质以防止形成血块方式的凝固。其他的样品来源包括脑脊液(CSF)、尿、泪、乳、精液、粘液分泌物、组织或器官活组织检查，如脑、肝、胸腺、胰腺。类红细胞谱系的造血细胞包括多能干细胞、髓样干细胞、CFU-GEMM细胞(粒细胞/红细胞/单核细胞/巨核细胞集落生成单位)、BFU-E细胞(类红细胞-血浆生成单位)、CFU-E细胞(类红细胞原红细胞-集落生成单位)、网织红细胞和红细胞。类红细胞谱系的造血细胞示意性地表示在附图说明图11中。单能造血细胞是指定型为单一细胞谱系的细胞；双能造血细胞是指定型为两个可能的细胞谱系之一的细胞，例如E/Meg或红细胞/巨核细胞，其能够沿红细胞或巨核细胞谱系分化；三能造血细胞是指定型为三个可能的细胞谱系之一的细胞。如Junquiera或Wheater的定义所述，红细胞从原红细胞的成熟包括经由下列已识别细胞类型的过程，如下所示 巨核细胞(mekaryocyte)和血小板谱系造血细胞包括E/Meg前体细胞、原巨核细胞和分化的巨核细胞或血小板细胞。因此与本专利技术一致的方法可为对一或多种上述的造血类红细胞、巨核细胞或血小板谱系的细胞类型的测定，或对与一或多种造血类红细胞、巨核细胞或血小板谱系细胞类型相关联的表达产物的本文档来自技高网...

【技术保护点】
在动物中诊断传染性海绵状脑病（ＴＳＥ）是否存在的方法，包含测定从动物中获得的样品以确定样品中的类红细胞、巨核细胞或血小板谱系的造血细胞的相对数目。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M克林顿，G米勒，JC曼森，
申请(专利权)人：罗斯林学院爱丁堡，
类型：发明
国别省市：GB[英国]