筛查巨大后代综合征的方法技术

提供了一种用于诊断经核移植制备的动物或经体外受精或培养方法制备的动物中巨大后代综合征（ＬＯＳ）的方法，其包括分析动物胚胎或来源于胚胎的生物样品中的胰岛素样生长因子－２受体（Ｉｇｆ２ｒ）基因表达。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种筛查动物胚胎或胚胎衍生的多能细胞系异常发育的方法，并涉及在结合该筛查方法的体外培养中操作动物胚胎或细胞的方法。本专利技术也涉及该筛查方法在确定细胞培养环境或操作方法是否诱导动物胚胎异常发育中的应用。在胚泡期之前暴露于不同异常环境的牛及绵羊胚胎导致异常巨大后代的发育(Young等人，生殖综述(Reviews of Reproduction)待出版(1998))，其也可能显示多种器官缺陷，包括骨骼和面部畸形(Walker等人，动物生殖学(Theriogenology)45111-120(1996))、过度肌肉化(over-muscling)和肌纤维成份的改变(Maxfield等人，生理学杂志(J.Physiol.)274E1121-E1123(1998))、小脑发育不全(Schmidt等人，动物生殖学46527-539(1996))、肝及心血管缺陷(van Soom等人，动物生殖学41855-867(1994)；Wilmut等人，自然(Nature)385810-813(1997)；Campbell等人，自然380383(1996)；Cibelli等人，科学(Science)2801256-1258(1998))、泌尿生殖道缺陷(Campbell等人，自然380383(1996))、肺缺陷(Cibelli等人，科学2801256-1258(1998))和胎盘缺陷，包括羊水过多、水尿囊和胎盘瘤增大(Cibelli等人，科学2801256-1258(1998))。曾报道了几种器官的增大(Farin,P.W.和Farin,C.E.,生殖生物学(Biology of Reproduction)52676-682(1995)；Cibelli等人，科学2801256-1258(1998))，相关特征包括妊娠延长、难产(Kruip,T.A.M.和den Haas,J.H.G.，动物生殖学4743-52(1997))和尤其与体温调节、能量平衡、呼吸及代谢pH调节有关的生理缺陷(Garry等人，动物生殖学45141-152(1996))。围生期死亡率是一个特殊问题，产前死亡率较高(Walker等人，动物生殖学45111-120(1996))。这组症状现已通称为巨大后代综合征(Large Offpring Syndrome,LOS)，但有时被称为巨牛综合征(Willadsen等人，动物生殖学35161-170(1991))。不是在每例LOS中都能观察到所有这些特征，有时，在没有明显体积增大时可观察到这些特征。当对母体施用高尿素饮食时(McEvoy等人，动物生殖科学(AnimalReproduction Science)4771-90(1997))，核移植中植入前胚胎的操作、胚胎的体外培养、异步胚胎移植或排卵后不久母体的孕酮处理现在都与这些问题有关(Walker等人，动物生殖学45111-120(1996)综述)。虽然体内胚胎环境的改变是实验性的，但与LOS有关的问题在商业上是特别重要的，这与核移植和体外生产中植入前胚的体外处理有关。体外产生可包括任一或全部下列三个阶段(1)卵母细胞的体外成熟(IVM)；(2)卵母细胞的体外受精(IVF)；和/或(3)受精卵母细胞的体外培养(IVC)，通常至胚泡期。核移植也可包括操作过程之前、期间和之后的卵母细胞或重建的胚胎的体外培养阶段。核移植-重建胚胎的培养能在体外或在生殖道内体内进行，哺乳动物(通常是绵羊或兔)输卵管通常结扎。这两者都可提供异常的胚胎环境，并与LOS的症状有关。也曾描述了人和小鼠的胎儿生长综合征。但是它们与植入前胚胎操作无关，而分别是染色体及其他遗传异常或实验遗传操作的结果。胚胎操作或培养后人及小鼠中不发生胎儿过度生长可能是由于牛与绵羊固有的物种差异，或由于所用方法的不同。例如，家畜胚胎通常作为胚泡被移植到受体中，而历史上也曾将四细胞期的人胚胎移回母体中，因此人胚在关键时期能不接触干扰因素。小鼠胚胎常规培养至胚泡期，但常用的所有培养基都不含血清。与体外胚胎培养有关的大多数牛和绵羊LOS病例都包括接触共培养细胞和/或血清(例如，见Walker等人，动物生殖学45111-120(1996))，它们可能产生和/或含有干扰因素。因此，如果培养条件明显改变，则影响牛和绵羊胚胎的相同因素也能以类似的方式影响其他物种的胚胎。就分娩和后代的存活而言，受干扰的胎儿生长具有重要的临床意义。在商业上，通过包括体外成熟(IVM)或体外受精(IVF)的体外产生(IVP)与牛和绵羊胚胎的产生是十分相关的。该技术可能与该技术在其他物种中的广泛应用越来越相关，如有价值的个体如马(Hinrichs动物生殖学4913-21(1998))以及濒临灭绝的物种如大熊猫(Saegusa自然394409(1998))。LOS也可能在利用核移植技术产生转基因动物中有更大的重要性。LOS的征兆可能与人IVF有关，假定植入前期间的事件能影响后代的前景。例如，常规人IVF能产生具有相对较低出生体重的婴儿。由于该技术越来越具侵入性(例如，胞质内精子注射、胞质减少、体外培养至胚泡期、胚胎活组织检查、植入前诊断)，后代的健康越来越危险(Walker等人，动物生殖学45111-120(1996)；Handyside等人，遗传学趋势(Trends in Genetics)13270-275(1997))。培养的胚胎衍生的胚胎干(ES)细胞和胚胎生殖(EG)细胞也能用来产生转基因或非转基因小鼠或其他动物(Nagy等人，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)908424-8428(1993),Dean等人，发育(Development)1252273-2282(1998))或这些生物的细胞和组织。胚胎干(ES)细胞是从胚泡期胚胎(Evans,M.J.和Kaufman,M.H.，自然292154-156(1981))、桑椹胚(Eistetter,H.R.发育、生长与分化(Dev.Growth Differ.)31275-282(1989))的内细胞团细胞中分离的多能细胞系或分离的上胚层细胞(Brook F.A.和Gardner,R.L.美国国家科学院院刊945709-5712(1997))。来源于小鼠原始生殖细胞的这些细胞系及多能胚胎生殖(EG)细胞系的建立使得能在培养中遗传修饰这些细胞系，并能产生特定基因已被改变、导入或置换的转基因小鼠(McWhir,J.,Roslin研究所年报(Roslin Institute Annual Report)1995-1996 80-83(1996)；L.M.Houdebine(编)《转基因动物生殖与应用》，OverseasPublishers Association,Amsterdam(1997))。尽管迄今为止只有小鼠的ES和EG细胞能建成种系，从而提供转基因动物的途径，但目前对由其他物种的内细胞团或原始生殖细胞产生多能细胞系有很大兴趣。最近，已有用来源于胚泡内细胞团细胞的ES细胞样细胞产生嵌合猪(Golueke等人，动物生殖学49 238(1998))和牛(Cibelli等人，自然生物技术(Nature Biotechnology)16 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种筛查动物胚胎巨大后代综合征（ＬＯＳ）的方法，其包括分析动物胚胎中或来源于胚胎的生物样品中胰岛素样生长因子－２受体（Ｉｇｆ２ｒ）基因表达的步骤。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：TG莫西沃伊，KD辛克莱尔，LE杨，I维尔穆特，
申请(专利权)人：罗斯林学院爱丁堡，
类型：发明
国别省市：GB[英国]