诊断试验方法技术

本发明专利技术披露了一种用于穿流型检测过程的方法和装置。该方法的特征在于：“预孵育步骤”，在该步骤中要进行分析的样品（通常为检测特定蛋白质的存在）和已知可结合到特定蛋白质上的检测分析物（通常为与胶体金或荧光标记连接的一种或多种抗体）一起结合一段所需的时间。该预孵育阶段发生在样品和检测分析物的混合物与连接在膜上的捕获分析物接触之前。提供该预孵育阶段可提高检测敏感度，并且可减少检测所需样品的体积。一种用于实施该方法的装置，其特征为：用于接受样品和检测分析物的预孵育腔室，其具有由膜形成的基底和在其上连接有捕获分析物的第二膜。在一种型式下，预孵育腔室在一个位置处支撑在第二膜上，但可以将它推至与载有捕获分析物的膜相接触的位置，如此使得液体通过捕获膜从孵育腔室迁移出来。在另一种型式下，孵育腔室基底的膜是疏水的，它的下侧与捕获膜相接触，当在预孵育室的内容物中加入湿润剂时，发生液体迁移。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种诊断测试方法，具体涉及一种用于进行检测方法的装置和一种用该装置进行检测过程的方法。
技术介绍
侧流和穿流型技术已用于诊断试验近20年。侧流型技术现在占据主导地位，因为侧流装置易于生产并且该检测可在简单的两个步骤中进行，其可适于全血分离。其结果为一种简单的装置能在本领域作为进行快速即时诊断仪(Cole等，1996，Tuberc.Lung.Dis.77363-368)。然而，由于样品间的侧向扩散差异和各批分隔膜之间流率的不同，因此很难在多种疾病诊断中使用侧流技术。这意味着抗原或抗体信号强度可能在试验中变化也可能在不同批次试验中变化，从而导致不一致的结果。与侧流型测试通常需要5～10分钟相比，已有的穿流型诊断测试可在少于2分钟的时间内完成。然而，这种速度的优势常以损失灵敏度为代价。另一缺点是需要较大量的样品以获得与侧流相同的灵敏度。这在一些情况下可能是成问题的。例如，诊断全血中的分析物(反应物)需要从全血细胞中分离血浆。为此而需要较大的全血量将很快阻塞穿流型中使用的膜。已很好的建立了穿流型检测的基本原理。该测试设计为确定样品中预定分析物/反应物的存在，在一些情况下确定其数量。这些反应物常为蛋白质，但也可以进行其他反应物的测试。如果检测是测试患者有特定的疾病，可能会对患者体液进行测试以检测由患者产生的响应于某种感染的抗体或其他蛋白，或检测由细菌或病毒剂等所表达的引起疾病的蛋白。在通常的穿流化验中，确信含有反应物的液体样品通过连接有捕获分析物的膜吸入吸收垫中，已知该捕获剂将与反应物结合。然后通常用缓冲液洗涤该膜，将含有检测分析物的液体加到该膜上，其中的检测分析物也与反应物结合，并包含可检测的示踪剂或标记物。检测分析物与结合到膜上的固定反应物结合，可以观察到或另外可以检测到以显示反应物的存在。美国专利4246339披露了一种用于测定液体样品中存在预定反应物的检测装置。该装置包括在套筒顶和底部件之间形成储液池，以及用于在开口处偏压部件的弹性装置。顶部件上形成了一系列试验池，每一个试验池具有由多孔膜形成的基底，捕获分析物固定在膜表面上。吸收装置位于底部部件上，在开口位置与膜相分离但在封闭位置与膜相接触。美国专利4246339披露了将由缓冲液稀释的待测血清加到试验池中，于室温下将该装置孵育10分钟，然后将套筒压下到封闭位置以使样品通过该膜进入吸收材料。当膜干燥时，洗涤该膜，然后用含有测定分析物的溶液覆盖该膜，该测定分析物在随后加入染色剂的步骤之后与固定反应物结合。应理解美国专利4246339所述的方法有点时间拖延、耗时并且冗长的方法，同时也缺少敏感性。在美国专利5185127中描述了更新的穿流装置，其披露了一种测定装置，包括过滤器层叠和具有基底部分和盖子的盒体。过滤器层叠具有在其上含有捕获分析物的亲水性膜，在美国专利5185127中称作结合剂。疏水膜位于亲水膜之下，吸收材料垫位于疏水膜之下。盖子包括向上延伸的凸缘，该突缘可插入一个凹处。在使用中将含有反应物的样品(在美国专利5185127中称为分析物)放在测定装置的池中，此时反应物/分析物与捕获分析物/结合剂结合。由于水溶液未浸湿位于过滤器层叠中的亲水膜之下的疏水膜，因此不会发生测定溶液的流动。这样有所需要的充足的时间来完成测定分析物与反应物的结合。当判断结合完成时，通过加入浸润疏水膜的湿润剂使液体开始流动。之后水溶液流入吸收垫。然后洗涤该膜，用测定分析物/示踪剂处理该膜，该测定分析物/示踪剂可以是与分析物特异性结合的抗体，该抗体具有隐蔽结合在其上的标记物。美国专利5185127也缺少敏感性，不能与侧流或ELISA型式中所获得敏感性相等同。一般信息此处所用的术语“源自(derived from)”或“衍生物(derivative)”表示可从特定的来源获得的特定整体，虽不必直接来自该来源。除非上下文需要另外或特意限定为相反的含义，此处本专利技术作为单数所叙述的整体、步骤或部件清楚的包括单数和复数形式叙述的整体、步骤或部件。本专利技术此处所描述的关于任何单独的实施例，尤其是关于检测装置或方法的实施例已对本专利技术此处所述的其他实施例作了必要的修正。整个说明书，除非上下文需要另外限定，词语“包括(comprise)”，或变形如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”可理解为意味着包括设定的步骤或部件或整体或一组步骤或部件或整体，但不排除其他步骤或部件或整体或部件或整体的组。本领域的技术人员应理解除了那些特定的描述，此处描述的专利技术能允许变化和修饰。这可理解为本专利技术包括所有这样的变化和修饰。本专利技术也包括说明书中分别或总体提到的或指明的所有步骤、特征、组分和化合物，以及任何和所有的任意两个或更多步骤或特征的组合。本专利技术不限于此处所述的特定示例的范围。清楚地，功能性等价产物、组分和方法也属于本专利技术在此所述的范围内。除非另外指明，未使用不当的试验方法来进行本专利技术，常规的免疫细胞化学技术例如免疫金标记和蛋白质组学。例如以下文本中所描述的这些的过程，这些文本并入作为参考胶体金—细胞化学标记的新前景(Colloidal Gold-A New Perspective ForCytochemical Marking)，Beesley J(1989)，Royal Microscopical SocietyHandbook第17期，Oxford Science发行，牛津大学出版(平装本)； 对免疫细胞化学的介绍—当前技术及问题(An Introduction ToImmunocytochemistry-Current techniques and problems)，Polak J和VanNoorden 5(1984)，Royal Microscopical Society Handbook第11期，OxfordScience发行，牛津大学出版社(平装本)；免疫细胞化学—现代方法及应用(Immunocitochemistry-Modern Methodsand Applications)，Polak J和Van Noorden 5(1986)(第二版)，ButterworthHeinemann，牛津(精装本)；免疫细胞化学技术(Techniques In Immunocytochemistry)，Bullock G和Petrusz P(1982-1989)(4卷)Academic出版社(平装本)；和胶体金—原理、方法和应用(Colloidal Gold-Principle，Methods andApplications)，Hayat M，(1989-1990)(3卷)，Academic出版社(精装本)。所有在本申请中引用的参考在此特别并入作为参考。由于已有技术没有一致的术语，为避免争议并起到清楚的目的，以下说明书中所使用的术语作了如下限定。术语“反应物”或“靶分析物”是指通过化验用来测定的大分子(例如蛋白质或酶)或其片段等。术语“捕获分析物”是指连接到膜上与并反应物结合的“捕获”化合物。术语“检测分析物”是指包含“检测”化合物的分析物，该化合物也与反应物结合并且也是“可检测的”成分。可检测的成分通常不论是在可见光下还是在荧光下都能可见地进行检测。专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测至少一种预定反应物存在的方法，包括以下步骤：ａ）提供第一多孔膜，在其上已结合有用于与该反应物相结合的捕获分析物；ｂ）将要进行检测的样品和多检测分析物放在一个腔室中，该腔室具有由第二多孔膜形成的基底；ｃ）通 过足够长时间使多检测分析物结合到，所述的至少一种反应物上，如果该反应物存在的化；ｄ）使腔室基底与第一多孔膜接触；和ｅ）使样品流过这些膜从而使得反应物与在第一膜上载有的捕获分析物相结合。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：安德鲁约翰斯隆，安德鲁亚瑟古利，罗伯特艾利科尔，大卫埃莫贝尔，
申请(专利权)人：普罗托姆系统有限公司，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]