一一对照式玻片检测方法技术

一一对照式玻片检测方法，属于医学检测方法技术领域。其特征在于包括以下步骤：选择与检测对象相应的对照物质，进行细胞提取处理；制备细胞对照保存体；对照物质进行细胞提取处理后，于保存介质中制成细胞对照保存体，细胞提取物与保存介质的比例为１∶１－５；在进行玻片检测时，将上述细胞对照保存体少许点、涂或融化于相应的每一张玻片上，与检测对象一起进行检测、分析或判断。上述一一对照式玻片检测方法，操作简单、方便，能保证每张玻片的检测条件一致，有效提高了检测结果的准确性，为相关的研究工作提供了必要的数据，更为治疗方案的选择提供了更准确的判断依据，且还能通过对比观察检测出未知物质的性质。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学检测方法
，具体为。
技术介绍
在科研或临床应用上，组织学、细胞学、组织细胞水平、蛋白质水平、RNA水平、DNA水平、免疫组化、各种原位杂交或原位PCR，只要是原位方法的检测，按质量要求均需要设立阳性对照及空白对照。目前，除少数试剂可于片中寻找自身对照外，通常是一组检测片只能通过切片方法设立一张阳性对照片作为对照，但是无论是机器操作还是手工操作均不能保证每张玻片的检测条件一致，如每一步骤的时间、试剂的用量、效价程度或其它人为因素等均存在差异，都会造成部分结果的准确性很难判断，故其标准化问题日益受到大家的重视。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术中存在的上述问题，设计提供一种的技术方案，能有效提高判断结果的准确性。所述的，其特征在于包括以下步骤1)选择与检测对象相应的对照物质，进行细胞提取处理；2)制备细胞对照保存体对照物质进行细胞提取处理后，于保存介质中制成细胞对照保存体，细胞提取物与保存介质的比例为1∶1-5；所述的保存介质为液体石蜡或固体石蜡，也可以是自制的保存液，保存液的制备取0.05-0.1mol/L、PH为7.4的三羟甲基氨基甲烷100ml，加温到60-70℃，加入优质明胶50-100mg，搅拌溶解后，冷却至室温，加入0.1-0.8g牛血清白蛋白，加入NaN3200mg溶解后过滤制成；3)在进行玻片检测时，将上述细胞对照保存体少许点、涂或融化于相应的每一张玻片上，与检测对象一起进行检测、分析或判断。所述的，其特征在于所述的对照物质为培养细胞、液体标本或组织标本。所述的，其特征在于培养细胞的细胞提取处理为直接用胰酶将细胞从培养瓶上消化下来。所述的，其特征在于液体标本的细胞提取处理为液体标本加入抗凝剂进行直接离心分离、洗涤获取细胞，所述的洗涤液为0.01mol/L、PH为7.4的磷酸缓冲液或三羟甲基氨基甲烷缓冲液，抗凝剂为肝素或枸橼酸。所述的，其特征在于组织标本的细胞提取处理为组织标本洗去血迹、磨碎，100-400目筛网过滤，进行细胞打孔处理、离心分离、洗涤。所述的，其特征在于不新鲜组织标本磨碎后进行及时固定，固定液为10-20％中性福尔马林或90-95％乙醇或冷丙酮。所述的，其特征在于组织标本磨碎后添加红细胞裂解液处理，红细胞裂解液的配制称取3-4g氯化铵、1-2g三羟甲基氨基甲烷，加水溶解并稀释至500ml，0.22μm滤膜过滤除菌，4-6℃保存。上述，操作简单、方便，将细胞对照保存体少许点、涂或融化于相应的每一张玻片上，与检测对象一起进行检测、分析或判断，保证每张玻片的检测条件一致，有效提高了检测结果的准确性，为相关的研究工作提供了必要的数据，更为治疗方案的选择提供了更准确的判断依据，且还能通过对比观察检测出未知物质的性质。具体实施例方式，其特征在于包括以下步骤1)选择与检测对象相应的对照物质，进行细胞提取处理，所述的细胞包括动物细胞和微生物，所述的对照物质可为培养细胞、液体标本或组织标本。培养细胞的细胞提取处理为直接用胰酶将细胞从培养瓶上消化下来。液体标本的细胞提取处理为液体标本加入抗凝剂进行直接离心分离、洗涤获取细胞，所述的洗涤液为0.01mol/L、PH为7.4的磷酸缓冲液或三羟甲基氨基甲烷缓冲液，抗凝剂为肝素或枸橼酸。组织标本的细胞提取处理为组织标本洗去血迹、磨碎，300目筛网过滤，进行细胞打孔处理、离心分离、洗涤。不新鲜组织标本磨碎后进行及时固定，固定液为15％中性福尔马林或95％乙醇或冷丙酮。组织标本含红细胞较多的，磨碎后添加红细胞裂解液处理，红细胞裂解液的配制称取3.735g氯化铵、1.3g三羟甲基氨基甲烷，加水溶解并稀释至500ml，0.22μm滤膜过滤除菌，4℃保存。2)制备细胞对照保存体对照物质进行细胞提取处理后，于保存介质中制成细胞对照保存体，所述的细胞对照保存体为悬液，也可以是固体，所述的保存介质为医用的液体石蜡或固体石蜡，也可以是自制的保存液。保存液的制备取0.06mol/L、PH为7.4的三羟甲基氨基甲烷100ml，加温到65℃，加入优质明胶90mg，搅拌溶解后，冷却至室温，加入0.7g牛血清白蛋白，加入NaN3200mg溶解后过滤制成。细胞提取物与保存液按1∶3的配比，制成细胞悬液；细胞提取物进行脱水、透明处理后与液体石蜡、固体石蜡按配比进行浸蜡处理，其比例分别为1∶3，1∶1，分别制成细胞悬液、细胞对照保存固体。3)在进行玻片检测时，将上述细胞对照保存体少许点、涂于相应的每一张玻片上，与检测对象一起进行检测、分析或判断。本申请中所涉及的离心分离、洗涤处理，脱水、透明、浸蜡处理，及细胞悬液、细胞对照保存固体的配制均为一般公知技术，在此不再赘述。根据该检测方法，可开发出针对不同检测目的、不同检测对象的对照物质，生产出可长时间保存的细胞对照保存体。在进行玻片检测时，将细胞对照保存体少许点、涂或融化于相应的每一张玻片上，与检测对象一起进行检测、分析或判断，保证每张玻片的检测条件一致，有效提高了检测结果的准确性，为相关的研究工作提供了必要的数据，更为治疗方案的选择提供了更准确的判断依据，且还能通过对比观察检测出未知物质的性质。权利要求1.，其特征在于包括以下步骤1)选择与检测对象相应的对照物质，进行细胞提取处理；2)制备细胞对照保存体对照物质进行细胞提取处理后，于保存介质中制成细胞对照保存体，细胞提取物与保存介质的比例为1∶1-5；所述的保存介质为液体石蜡或固体石蜡，也可以是自制的保存液，保存液的制备取0.05-0.1mol/L、PH为7.4的三羟甲基氨基甲烷100ml，加温到60-70℃，加入优质明胶50-100mg，搅拌溶解后，冷却至室温，加入0.1-0.8g牛血清白蛋白，加入NaN3200mg溶解后过滤制成；3)在进行玻片检测时，将上述细胞对照保存体少许点、涂或融化于相应的每一张玻片上，与检测对象一起进行检测、分析或判断。2.如权利要求1所述的，其特征在于所述的对照物质为培养细胞、液体标本或组织标本。3.如权利要求2所述的，其特征在于培养细胞的细胞提取处理为直接用胰酶将细胞从培养瓶上消化下来。4.如权利要求2所述的，其特征在于液体标本的细胞提取处理为液体标本加入抗凝剂进行直接离心分离、洗涤获取细胞，所述的洗涤液为0.01mol/L、PH为7.4的磷酸缓冲液或三羟甲基氨基甲烷缓冲液，抗凝剂为肝素或枸橼酸。5.如权利要求2所述的，其特征在于组织标本的细胞提取处理为组织标本洗去血迹、磨碎，100-400目筛网过滤，进行细胞打孔处理、离心分离、洗涤。6.如权利要求5所述的，其特征在于不新鲜组织标本磨碎后进行及时固定，固定液为10-20％中性福尔马林或90-95％乙醇或冷丙酮。7.如权利要求5所述的，其特征在于组织标本磨碎后添加红细胞裂解液处理，红细胞裂解液的配制称取3-4g氯化铵、1-2g三羟甲基氨基甲烷，加水溶解并稀释至500ml，0.22μm滤膜过滤除菌，4-6℃保存。全文摘要，属于医学检测方法
其特征在于包括以下步骤选择与检测对象相应的对照物质，进行细胞提取处理；制备细胞对照保存体对照物质进行细胞提取处理后，于保存介质中制成细胞对照保存体，细胞提取物与保存介质的比例为1∶1－5；在进行玻片检测时，将上述细胞对照保存体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一一对照式玻片检测方法，其特征在于包括以下步骤：１）选择与检测对象相应的对照物质，进行细胞提取处理；２）制备细胞对照保存体：对照物质进行细胞提取处理后，于保存介质中制成细胞对照保存体，细胞提取物与保存介质的比例为１∶１－５； 所述的保存介质为液体石蜡或固体石蜡，也可以是自制的保存液，保存液的制备：取０．０５－０．１ｍｏｌ／Ｌ、ＰＨ为７．４的三羟甲基氨基甲烷１００ｍｌ，加温到６０－７０℃，加入优质明胶５０－１００ｍｇ，搅拌溶解后，冷却至室温，加入０．１－０ ．８ｇ牛血清白蛋白，加入ＮａＮ↓［３］２００ｍｇ溶解后过滤制成；３）在进行玻片检测时，将上述细胞对照保存体少许点、涂或融化于相应的每一张玻片上，与检测对象一起进行检测、分析或判断。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：任兴昌，
申请(专利权)人：杭州市中医院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]