一种检测尿液中是否含有本周氏蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测尿液中是否含有本周氏蛋白的方法，它采用可在一般实验室条件下实现的离心法代替需要保温的过滤法将本周氏蛋白沉淀分离出来，大大降低了温度对检测结果的影响。另外，由于本发明专利技术剔除了白蛋白和球蛋白，仅加热本周氏蛋白，增加了其溶解能力，因此有利于得出更准确的检测结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生化分析方法，具体地说是一种从检测尿液中是否含有本周氏蛋白的方法。
技术介绍
本周氏蛋白又称凝溶式蛋白，是一种免疫球蛋白的轻链或共聚合体，此种蛋白在一定的PH值条件下加热至40～60℃时有沉淀发生，温度升高至100℃时沉淀消失，再冷却时又重新出现沉淀，根据这一原理可以检测尿液中是否含有本周氏蛋白。现有技术中的检测方法是取尿液4ml于试管中，加入醋酸盐缓冲液1ml，混匀后，放置于56℃的水中水浴15分钟，如有浑浊或沉淀，再将试管放入沸水中，煮沸3分钟，观察试管中浑浊或沉淀的变化，如浑浊变清、减弱或沉淀减少，均提示本周氏蛋白阳性，若煮沸后浑浊增加或沉淀增多，表明尿液中还有其它蛋白质，此时将试管从沸水中取出，立即过滤。如滤出液开始透明，温度下降时又出现浑浊，再煮沸时又透明，说明本周氏蛋白为阳性。这种方法存在的缺点是，当尿液中的总蛋白含量在5g/L以上时，由于尿液中的蛋白含量过高，在加热90℃以上时造成部分本周氏蛋白不能完全溶解，凝溶现象变化不明显，结果不易判断。另外，多发性骨髓瘤一般多见于肾的损害造成大量球蛋白、白蛋白进入尿液，为了克服其干扰需将其过滤掉，过滤时需要保持恒温，因为如果温度下降会造成本周氏蛋白析出而被过滤掉，但在实验室条件下过滤时很难保持恒温，因此也会影响检测结果的准确性。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种操作简单，能准确得出尿液中是否含有本周氏蛋白的检测方法。本专利技术的检测尿液中是否含有本周氏蛋白的方法，包括以下步骤(1)取尿液4ml置于试管中，加入1ml浓度为2mol/L的醋酸盐缓冲液，混合均匀；(2)将试管放入56℃的水中水浴15分钟，若无浑浊或沉淀出现，尿液中无本周氏蛋白；若出现浑浊或沉淀，执行步骤(3)；(3)将试管放入离心机，以1500转/分钟的速度离心3分钟，将上清液倒入另一个试管，沉淀保留在原试管中；(4)将盛有上清液的试管放入100℃的水中水浴8分钟，如果无沉淀，将试管内液体倒回盛有沉淀的试管，执行步骤(5)；如果有沉淀，将试管放入离心机，以3000转/分钟的速度离心5分钟，将上清液倒回盛有沉淀的试管，执行步骤(5)；(5)将试管中的沉淀和液体混合均匀，置于100℃的水中水浴3分钟，如果浑浊变清或减弱，则尿液中含有本周氏蛋白，否则不含本周氏蛋白。所述的醋酸盐溶液的PH值为4.9。本周氏蛋白的等电点为4.9，选择醋酸盐缓冲液的PH为4.9，更有利于蛋白质的沉淀析出。选择1500转/分钟的速度离心56℃沉淀，即能使沉淀有效的分离出，又不至于使沉淀因离心力太大而影响下一步沉淀的混合均匀；用3000转/分钟的速度离心100℃沉淀，可使蛋白质分离的更充分。由于本专利技术的检测尿液中是否含有本周氏蛋白的方法采用了可在一般实验室条件下实现的离心法将本周氏蛋白沉淀分离出来，代替了需要保温的过滤法，大大降低了温度对检测结果的影响。另外，由于本专利技术剔除了白蛋白和球蛋白，仅加热本周氏蛋白，增加了其溶解能力，因此有利于得出更准确的检测结果。具体实施例方式下面结合具体实施例分别用现有技术中的方法(过滤法)和本专利技术的方法(离心法)进行检测分析。配制醋酸盐缓冲液，取醋酸钠17.5g，加冰醋酸4.1ml，再加蒸馏水100ml，调至PH4.9。取尿总蛋白含量在1-3g/L的尿液6例，3-5g/L的尿液9例，5-10g/L的尿液12例，10g/L以上的尿液8例。用现有的过滤法对上述35例尿液分别进行检测分析，方法为取尿液4ml于试管中，加入醋酸盐缓冲液1ml，混匀后，放置于56℃的水中水浴15分钟，如有浑浊或沉淀，再将试管放入沸水中，煮沸3分钟，观察试管中浑浊或沉淀的变化，如浑浊变清、减弱或沉淀减少，均提示本周氏蛋白阳性，若煮沸后浑浊增加或沉淀增多，表明尿液中还有其它蛋白质，此时将试管从沸水中取出，立即过滤。如滤出液开始透明，温度下降时又出现浑浊，再煮沸时又透明，说明本周氏蛋白为阳性。用本专利技术的离心法对上述35例尿液分别进行检测分析，方法为(1)取尿液4ml置于试管中，加入1ml浓度为2mol/L的醋酸盐缓冲液，混合均匀；(2)将试管放入56℃的水中水浴15分钟，若无浑浊或沉淀出现，尿液中无本周氏蛋白；若出现浑浊或沉淀，执行步骤(3)；(3)将试管放入离心机，以1500转/分钟的速度离心3分钟，将上清液倒入另一个试管，沉淀保留在原试管中；(4)将盛有上清液的试管放入100℃的水中水浴8分钟，如果无沉淀，将试管内液体倒回盛有沉淀的试管，执行步骤(5)；如果有沉淀，将试管放入离心机，以3000转/分钟的速度离心5分钟，将上清液倒回盛有沉淀的试管，执行步骤(5)；(5)将试管中的沉淀和液体混合均匀，置于100℃的水中水浴3分钟，如果浑浊变清或减弱，则尿液中含有本周氏蛋白，否则不含本周氏蛋白。检测结果如下 从以上结果可以看出，本专利技术的检测尿液中是否含有本周氏蛋白的方法在尿液中总蛋白含量超过5g/L时其准确率大大提高。本专利技术不限于保护尿液中本周氏蛋白的检测方法，用相同的方法检测其它液体中含有的本周氏蛋白的方法亦属于本专利技术所要求保护的范围。权利要求1.，包括以下步骤(1)取尿液4ml置于试管中，加入1ml浓度为2mol/L的醋酸盐缓冲液，混合均匀；(2)将试管放入56℃的水中水浴15分钟，若无浑浊或沉淀出现，尿液中无本周氏蛋白；若出现浑浊或沉淀，执行步骤(3)；(3)将试管放入离心机，以1500转/分钟的速度离心3分钟，将上清液倒入另一个试管，沉淀保留在原试管中；(4)将盛有上清液的试管放入100℃的水中水浴8分钟，如果无沉淀，将试管内液体倒回盛有沉淀的试管，执行步骤(5)；如果有沉淀，将试管放入离心机，以3000转/分钟的速度离心5分钟，将上清液倒回盛有沉淀的试管，执行步骤(5)；(5)将试管中的沉淀和液体混合均匀，置于100℃的水中水浴3分钟，如果浑浊变清或减弱，则尿液中含有本周氏蛋白，否则不含本周氏蛋白。2.根据权利要求1所述的检测尿液中是否含有本周氏蛋白的方法，其特征在于所述的醋酸盐溶液的PH值为4.9。全文摘要本专利技术公开了，它采用可在一般实验室条件下实现的离心法代替需要保温的过滤法将本周氏蛋白沉淀分离出来，大大降低了温度对检测结果的影响。另外，由于本专利技术剔除了白蛋白和球蛋白，仅加热本周氏蛋白，增加了其溶解能力，因此有利于得出更准确的检测结果。文档编号G01N33/493GK1821778SQ200610043260公开日2006年8月23日 申请日期2006年3月23日 优先权日2006年3月23日专利技术者卜金县, 张继兰, 刘家爱, 陈相民 申请人:卜金县本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测尿液中是否含有本周氏蛋白的方法，包括以下步骤：（１）取尿液４ｍｌ置于试管中，加入１ｍｌ浓度为２ｍｏｌ／Ｌ的醋酸盐缓冲液，混合均匀；（２）将试管放入５６℃的水中水浴１５分钟，若无浑浊或沉淀出现，尿液中无本周氏蛋白；若出 现浑浊或沉淀，执行步骤（３）；（３）将试管放入离心机，以１５００转／分钟的速度离心３分钟，将上清液倒入另一个试管，沉淀保留在原试管中；（４）将盛有上清液的试管放入１００℃的水中水浴８分钟，如果无沉淀，将试管内液体倒回盛有沉淀 的试管，执行步骤（５）；如果有沉淀，将试管放入离心机，以３０００转／分钟的速度离心５分钟，将上清液倒回盛有沉淀的试管，执行步骤（５）；（５）将试管中的沉淀和液体混合均匀，置于１００℃的水中水浴３分钟，如果浑浊变清或减弱，则尿液中含有 本周氏蛋白，否则不含本周氏蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：卜金县，张继兰，刘家爱，陈相民，
申请(专利权)人：卜金县，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]