一种蛋白，其氨基酸序列的Ｎ－端位于ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示序列的８７０－９２０残基之间，Ｃ－端位于ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示序列的１０００－１２４０残基之间，或所述蛋白的氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸残基的替换、添加、缺失的保守性变体。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及来自SARS-CoV病毒S蛋白的蛋白质S242、S163和S297或其保守性变体，其能够形成多聚体，从而形成抗原性颗粒。本专利技术还涉及编码所述蛋白的核苷酸序列，及含有所述序列的重组载体。本专利技术进一步涉及所述蛋白用于制备诊断、预防和/或治疗严重急性呼吸道综合征的产品的用途。本专利技术还涉及一种SARS相关冠状病毒的基因工程亚单位疫苗，其中分别含有所述蛋白或其多聚体的活性成分，以及任选的佐剂和/或药学可接受的载体。本专利技术还涉及一种SARS相关冠状病毒的DNA疫苗，其中含有编码本专利技术所述蛋白或其片段的核苷酸序列，以及药学可接受的载体。
技术介绍
严重急性呼吸道综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)，又称传染性非典型性肺炎，是由一种新型冠状病毒(SARS，Coronavirus，SARS-CoV)引起的，通过飞沫、粪便和尿液等多种途径传播，以发热后出现快速进行性呼吸困难为特征性症状，传染性强、高病死率的急性疾病。潜伏期10天左右，病死率高达15％。病程一般为18～23天。SARS流行的控制一方面依赖于可靠的诊断试剂以对病例进行及时诊断并监测其传播，另一方面也需要有效的疫苗和抗病毒药物以预防和治疗这一疾病。因此开发出预防SARS-CoV感染的疫苗十分必要。已知，疫苗可以成功预防动物的传统冠状病毒感染。但由于SARS-CoV的发现时间较短，因此，对该病毒的主要结构蛋白的结构特征、主要病毒中和表位、免疫优势表位等均缺乏直接了解，始终无法开展针对SARS-CoV感染的诊断、治疗和/或预防。冠状病毒是一个大的RNA病毒家族，它的宿主非常广泛，包括哺乳动物和鸟类在内的很多脊椎动物都能被感染。已知冠状病毒直径100-120nm，呈有包膜的球形颗粒。病毒内部含单正链RNA，全长约30kb，是所有RNA病毒中最大的一种。病毒体成六角型状，组成病毒体衣壳的结构蛋白共有4-5种，包括S、M、E和N蛋白等，有些病毒还有HE蛋白。S蛋白形成病毒表面大的花瓣状突起，为分子量150-180kD的糖蛋白，该蛋白与病毒侵入细胞的过程密切相关，并可诱导中和抗体的产生。M蛋白确定病毒芽生的位置，启动病毒颗粒的组装等。N蛋白形成核蛋白，介导细胞免疫。E蛋白可形成病毒包膜，启动病毒颗粒的组装等。HE蛋白可凝集红细胞，形成病毒表面的小突起等。SARS-CoV病毒形态上与其它冠状病毒相同，但同源性分析研究发现SARS-CoV与以往的3群冠状病毒不同，SARS-CoV看来缺乏HE基因，因此SARS-CoV被分为第4群冠状病毒，而各地获得的SARS-CoV基因序列相对保守。SARS-CoV包括5个主要的开放读码框架，分别编码S、M、N、E和复制酶蛋白；此外还包括数量不等的非保守开放读码框架。SARS-CoV病毒引起VERO和FRhk-4细胞病变效应，病毒复制被SARS康复人的血清所抑制。S蛋白被认为是冠状病毒侵染过程中的关键蛋白，与病毒的组织嗜性、致病性密切相关，因此，也是SARS疫苗和SARS诊断试剂研制的重要靶蛋白，可能包含着重要的中和表位和免疫优势表位。SARS-CoV的S蛋白包括1255个氨基酸，其具体序列如SEQ ID NO1所示。
技术实现思路
本专利技术人通过对SARS病毒的大量研究和实验，利用基因工程方法成功表达了SARS-CoV的S蛋白的不同片段，首次发现在所述SARS-CoV的S蛋白中存在能够形成多聚体的数个氨基酸片段，从而成功研制出用于诊断、预防和/或治疗SARS相关疾病的产品，特别是SARS相关冠状病毒的基因工程亚单位疫苗和DNA疫苗。本专利技术的一个方面，涉及SARS-CoV的S蛋白的片段，所述蛋白质之氨基酸序列的N-端位于SEQ ID NO1所示序列的870-920残基之间，C-端位于SEQ ID NO1所示序列的1000-1240残基之间。此外，本专利技术还涉及所述蛋白的氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸残基的替换、添加、缺失的保守性变体。优选的，所述蛋白的氨基酸序列之N-端位于第899位残基，C-端位于第1063位、第1140位或第1195位残基。在本专利技术的一个实施方案中，所述蛋白具有如SEQ ID NO2所述的序列，以下称为S163蛋白。在本专利技术又一实施方案中，所述蛋白具有如SEQ ID NO3所述的序列，以下称为S242蛋白。在本专利技术又一实施方案中，所述蛋白具有SEQ ID NO4所述的序列，以下称为S297蛋白。此处所用的术语“变体”是指多核苷酸或多肽，其分别不同于参考的多核苷酸或多肽，但保留了基本的特性，如基本的生物特性、结构特性、调节特性或生化特性。多核苷酸的一般变体之核苷酸序列不同于另一个，参考核苷酸。变体核苷酸序列的变化可改变或不改变多肽的氨基酸序列，其中所述的多肽由参考多核苷酸编码。核苷酸的变化可导致参考序列所编码的多肽中氨基酸的替换、添加、删除、融合和截短，对此将在下面讨论。多肽的一般变体之氨基酸序列不同于另一个，参考多肽。通常，差异是有限的，以使参考多肽之序列与变体总体上非常相似，并且在许多区域是相同的。变体和参考多肽氨基酸序列上的差异可以是一个或多个氨基酸以任一组合的替换、添加和删除。替换或插入的氨基酸残基可由遗传密码编码，也可不由遗传密码编码。多核苷酸或多肽的变体可以自然产生(如等位基因变体)，或者它可以是非自然产生的变体。多核苷酸和多肽之非自然产生的变体可通过诱变技术或直接合成而产生。此外，本专利技术所要求保护的范围还涉及编码根据上述蛋白之多核苷酸序列。本领域技术人员知晓，由于遗传密码的简并性，因此，根据上述氨基酸序列可以推导出一种以上的相应的多核苷酸序列，这些序列均包含在本专利技术的范围之内。此外，本领域技术人员知晓，在编码上述蛋白的氨基酸序列中，可以进行保守性的氨基酸替换、添加或缺失，得到本专利技术所述蛋白质的保守性变体，只要经修饰的氨基酸序列保持或基本上保持本专利技术蛋白的抗原性或免疫原性。这些蛋白质保守性变体以及编码这些蛋白质变体的相应的多核苷酸序列均包含在本专利技术的范围之内。本专利技术的又一方面涉及所述蛋白形成的多聚体。本专利技术人出人意料的发现，所述的蛋白能够形成聚合范围从大约2到大约600聚体不等的多聚体，优选的，所述蛋白的多聚体的聚合范围为从3-100的多聚体，更特别的，是3-50的多聚体。本专利技术所述蛋白形成的多聚体呈粒径15-50纳米，优选的，粒径为20-30纳米的蛋白质颗粒。本专利技术还涉及编码所述蛋白的核苷酸序列，及含有所述核苷酸序列的重组载体。适于表达本专利技术所述蛋白的重组表达载体，包括但不限于原核表达载体，真核表达载体。这些载体包括染色体的、非染色体的和合成的DNA序列，例如，SV40的衍生物、细菌质粒、噬菌体DNA、酵母质粒、衍生于质粒和噬菌体DNA结合的载体、病毒DNA、杆状病毒、牛痘病毒、腺病毒、禽痘病毒及伪狂犬病毒。不过，只要能在宿主中复制和存活，其它载体也可以利用。合适的DNA序列可以通过许多方法插到载体中。通常，DNA序列用本领域中已知的方法插入到合适的限制性内切酶位点上。这些方法相信处于本领域技术人员的知识范围内。表达载体中的DNA序列被有效地与一个合适的表达控制序列(启动子)连在一起，从而指导mRNA的合成。下面提到的是这种启动子的代表LT本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：夏宁邵，张军，葛胜祥，林鉴，李少伟，鲜阳凌，
申请(专利权)人：厦门大学，养生堂有限公司，
类型：发明
国别省市：
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